uloq在生物學中是什麼意思

① 英語不好，請哪位大俠幫我翻譯一下吧，十分感謝！

為內部的酶聯免疫吸附試驗開發，明確高綁定、 平底聚-styrenemicroplates (R&D 系統) 都塗上了 1 μ g/ml 的滑鼠反人類 MDK(Antigenix)，滑鼠反人類 ANG (R&D 系統)，2 μ g/m l 的滑鼠 antihuman DCN （R&D 系統） 或 0.5 μ g/m l 的兔抗人 sFRP1 在 PBS 在 4 ° C 0.5 μ g/m l 的 100 μ l 一夜之間，分別傾注所有的捕獲解決方案，第二天和用洗板 PBST 四倍後的約束區域封鎖的與 200 μ l 的 5 %bsa 在 PBS 在 25 ° C 為 1 h。5 %Bsa 在 PBS，100 μ l 的乙二胺四乙酸血漿和串列稀釋標準的人類 MDK (Antigenix)、 ANG (R&D 系統)、 DCN （R&D 系統） 或 sFRP1 摘除後 (R&D 系統) 是添加到每個井分別和孵化在 25 ° C 為 2 h。板被沖走再用 PBST 四倍和 0.2 μ g/m l 的生物素共軛 100 μ l 兔抗人 MDK （Antigenix），生物素共軛山羊 antihumanANG (R&D 系統)、 生物素共軛滑鼠反人類 DCN （R&D 系統） 0.25 μ g/m l 或 0.2 μ g/m l 的山羊反人類 sFRP1 0.4 μ g/m l (R&D 系統) 在 0.1%BSA inPBS 被添加到每個井分別，和孵化在 25 ° c。解決方案 wasremoved 1 h 後來由用 PBST 洗滌四次。MDK、 李安和 DCN 檢測 100 μ l 1: 200 的 0.1 %bsa 在 PBS wasadded 在每個井用稀釋鏈霉親和-辣根過氧化物酶 (R&D 系統) 和孵化在 25 ° C 30 分鍾在黑暗中。對於 sFRP1 檢測，100 μ l 的瑜用 0.1 %bsa 在 PBS 是添加在每個井和孵化在 25 ° C 為 1 h 在黑暗中稀釋 HRP 共軛兔抗山羊免疫球蛋白 (DAKO 北美)。板用 PBST 洗四倍和 100 μ l 底物試劑 (R&D 系統) 的在每個井加和孵化在 25 ° C 為 10 分鍾，黑暗中然後通過添加 2 M 硫酸 100 μ l 終止反應。確定每個好立即通過使用酶標儀設置為 450 的光學 density(OD450) 毫微米。量化的限制被確定為 following：MDK。LLOQ，0.156 pg/ml ；ULOQ，20 吳/ml ；內部 CV<6.2%，除 CV < 9.2%。昂.LLOQ 78.1 pg/ml ；ULOQ，5,000 pg/ml ；內部 CV < 5%，除 CV < 9%。DCN。LLOQ 31.25 pg/ml ；ULOQ，2,000 pg/ml ；內部 CV < 4.3%；除 CV < 7.8%.sFRP1。LLOQ，0.195 吳/ml ；ULOQ，25 吳/ml ；內部 CV < 4.8，除 CV < 8.8%。

② 體內葯物分析的樣品測定

體內樣品分析常用的方法有免疫分析法和色譜分析法 。
免疫分析法是基於抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來的一種生物化學分析法。具有很高的選擇性和很低的檢出限，可以應用於測定各種抗原、半抗原或抗體。免疫分析法分為熒光免疫法、發光免疫法、酶免疫法及電化學免疫法等非放射免疫法和放射免疫法，測定的量可以達到μg甚至ng的水平。這些分析方法多配有專用設備和試劑，操作相對簡便，適合常規實驗室使用，多應用臨床治療葯物監測。
色譜分析包括：氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）和色譜-質譜聯用（GC-MS、LC-MS）等，這些方法適用於復雜樣品中微量葯物的專屬准確定量，多用於葯代動力學研究。 由於體內樣品取樣量少、葯物濃度低、內源性物質的干擾（如無機鹽、脂質、蛋白質、代謝物）及個體差異等多種因素影響體內樣品測定，為了保證方法的可靠性，必須在建立體內樣品分析方法的同時對方法進行驗證。
（一）特異性
必須證明所測定的物質是原形葯物或特定的活性代謝物，內源性物質和相應的代謝物及同時服用的其他葯物不得干擾樣品的測定。對於色譜法至少要提供6個不同來源的空白體內樣品色譜圖、空白體內樣品外加標准物質色譜圖（註明濃度）及用葯後的體內樣品色譜圖。
（二）標准曲線與線性范圍
根據所測定物質的濃度與響應的相關性，用回歸分析方法獲得標准曲線。標准曲線的高低濃度范圍為線性范圍，在線性范圍內濃度測定結果應達到試驗要求的精密度和准確度。
必須用至少6個濃度建立標准曲線，應使用與待測樣品相同的生物介質，線性范圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許將線性范圍外推求算未知樣品的濃度。建立標准曲線時應隨行空白體內樣品，但標准曲線不包括零點。
標准曲線上各濃度點的實測值與標示值的偏差（bias）在可接受范圍內時，可判定標准曲線合格。偏差可按下式計算：
式中，回歸值系將各濃度點的響應值代人標准曲線計算所得的濃度值；標示值系指制備標准曲線時，各相應濃度點的配製濃度。
標准曲線上各濃度點偏差的可接受范圍一般規定為：最低濃度點的偏差在±20%以內，在其餘各濃度點的偏差在±15%以內。只有合格的標准曲線才能用於臨床待測樣品的濃度計算。當線性范圍較寬時，推薦採用加權最小二乘法（weighted least square method）進行同歸計算。
（三）定量下限
定量下限（LLOQ）是標准曲線上的最低濃度點，：要求至少能滿足測定3～5個半衰期時樣品中的葯物濃度，或Cmax的1/10～1/20時的葯物濃度，其准確度應在真實濃度的80%～120%范圍內。RSD應小於20%，S/N應大於5.應由至少5個標准樣品測試結果證明。
（四）精密度與准確度
要求選擇高、中、低3個濃度的質控（quality control，QC）樣品同時進行方法的精密度和准確度驗證。其中，低濃度接近定量下限（lower limit of quantitation，LLOQ），在LLOQ的3倍以內；高濃度接近標准曲線的上限（即定量上限，upper limit of quantitation，ULOQ），中間選一個濃度，每一濃度至少測定5個樣品。
精密度用QC樣品的批內（intra-batch）和批間（inter-batch）RSD表示，RSD一般應小於15%，在LLOQ附近應小於20%.
在測定批內RSD時，每一濃度至少制備並測定5個樣品。為獲得批間RSD應至少在不同天連續制備並測定3個分析批，至少45個樣品。
准確度是指用特定方法測得的體內樣品濃度與真實濃度的接近程度，一般應在85%～115%范圍內，在LLOQ附近應在80%～120%范圍內。
（五）樣品穩定性
根據具體情況，對含葯體內樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時間進行穩定性考察，以確定體內樣品的存放條件和時間。還應注意考查儲備液的穩定性以及樣品處理後的溶液中分析物的穩定性，以保證測試結果的准確性和重現性。
（六）提取回收率
應考察高、中、低3個濃度的提取回收率。其結果應一致、精密和可重現。
（七）質控樣品
質控（QC）樣品系將已知量的待測葯物加入到生物介質中配製的樣品，用於質量控制。
（八）質量控制
應在體內樣品分析方法驗證完成之後開始測試未知體內樣品，每個樣品一般測定一次，必要時進行復測。每個分析批均應建立相應的標准曲線，並隨行測定高、中、低3個濃度的QC樣品，每個濃度至少雙樣本。並應均勻分布在未知樣品測試順序中。當一個分析批中未知樣品數目較多時，應增加各濃度QC樣品數，使QC樣品數大於未知樣品總數的5%，QC樣品數的增加以組（高、中、低3個濃度）為單位。QC樣品測定結果的可接受標准為：偏差應小於15%，低濃度點偏差應小於20%，最多允許1/3不在同一濃度的QC樣品結果超限。如QC樣品測定結果不符合上述要求，則該分析批未知樣品測試結果作廢。濃度高於ULOQ的未知體內樣品，應採用相應的空白介質稀釋後重新測定。
（九）測試結果
應詳細描述所用的分析方法，引用已有的參考文獻，提供每個分析批的標准曲線、質控樣品及未知樣品的測試結果及計算過程。還應提供全部未知樣品分析的色譜圖，包括全部相關的標准曲線、質控樣品的色譜圖，以供審查。 （一）治療葯物監測的對象
對於治療安全濃度范圍窄、治療劑量與中毒劑量接近、毒副作用強、具有非線性葯代動力學特徵、長期使用葯效和毒性不明確、以及聯合用葯可能發生相互作用的葯物，通常都應當進行監測。應當進行治療葯物監測的葯物包括部分抗癲癇葯、抗心律失常葯、強心苷類葯、抗生素、抗精神病葯、抗哮喘葯、抗惡性腫瘤葯和一些解熱鎮痛葯，如表7-1所示。部分應當進行治療葯物監測的葯物的治療濃度范圍和中毒濃度，如表7-2所示。治療葯物監測示例見第十章第一節「苯巴比妥體內樣品的分析。
（二）在葯代動力學研究中的應用
地高辛在臨床上用於心衰治療，其有效濃度（0.8～2.0ng/ml）與中毒濃度（>2.4ng/ml）接近。消除半衰期長，成人的約為36小時、兒童的約為30小時，屬一級動力學。地高辛在腸部被吸收，60%～90%以原型經腎小球濾過或腎小管排泌，僅有約10%在體內通過氫化、水解、結合等反應代謝，另有約7%發生腸-肝循環。
以毛地黃毒苷為內標，對人血漿和尿液中地高辛濃度LC-MS測定如下。
（1）樣品處理方法精密吸取血漿1.0ml，置具塞離心管中，精密加入內標溶液（20ng/ml）50μl，加濃氨水100μl和甲基叔丁基醚5.0ml，振盪混勻30分鍾後，3000×g力離心10分鍾，分取有機層，置另一離心管中，在減壓離心條件下揮千，殘留物用100μl 含0.25mmol/L醋酸鈉的甲醇-水（40：60）流動相溶解，14000×g力離心2分鍾，取上清液15μl進行LC-MS分析。尿樣用空白血漿按1：10或1：50稀釋後照血漿方法處理和測定。
（2）色譜和質譜條件色譜柱C8（2.1mm×50mm，5μm）柱，流動相含0.25mmol/L醋酸鈉的甲醇（A）-水（B）梯度洗脫，流速0.25ml/min.電噴霧正離子化，噴霧電壓5000V，傳輸裂解電壓250V，乾燥氮氣溫度350℃，流速10.0L/min，噴霧口氣壓25psi.選擇性離子【M+Na】+監測（SIM），m/z分別為803.4（地高辛）和787.4（毛地黃毒苷）。
（3）測定結果血漿濃度線性范圍為0.05～1.5ng/ml，應用於人體葯代動力學研究，測得女性受試者口服0.25mg地高辛後的典型血漿濃度-時間曲線如圖7-2所示，其尿液48小時累積排泄量為30.2%。