生物葯物的分析時應注意些什麼的

❶ 生物制葯的專業應注意和學習什麼

生物制葯專業主要是通過發酵工程、蛋白質工程、基因工程等方法製造葯品的高新技術專業。

在選擇和學習這些專業時，應具備良好生物化學和分子生物學基礎。同時應全面掌握微生物培養、GMP生產廠房、質量管理和成本控制等知識。

深刻掌握生物葯物和小分子葯物區別有助於把握生物制葯的實質。

目前幹細胞葯物、免疫細胞葯物、基因治療葯物是生物制葯的新興領域。在監管、生產和審批上都不同於其他生物葯物和小分子葯物。需要注意相關進展。

❷ 與化學合成葯相比,生物葯物分析有何特點

一問答題1．抗生素類葯物具有哪些特點?分析方法和含量表示方法與化學合成葯有何不同?2．抗生素效價測定方法主要分為生物學法和物理化學法兩大類，兩法各有什麼特點?3．β-內醯胺類抗生素具有怎樣的結構特徵和性質?4．青黴素類抗生素分子中哪部分結構最不穩定?易被哪些試劑作用發生降解反應失活?5．β-內醯胺類抗生素的含量可採用多種理化方法測定，這些方法分別利用了該類葯物的什麼性質?6．試述碘量法測定β-內醯胺類抗生素含量的反應原理、影響因素和含量計算方法。並說明為什麼不採用一般容量分析以滴定度計算含量的方式來計算β-內醯胺類抗生素的含量。7．β-內醯胺類抗生素的特殊雜質主要有哪些?如何檢查?8．試述電位絡合滴定法測定青黴素含量的原理、指示終點的方法、空白實驗的操作與目的。9．氨基糖苷類抗生素分子具有怎樣的結構特徵?10．鏈黴素的麥芽酚反應、N-甲基葡萄糖胺反應、坂口反應分別利用了鏈黴素分子哪部分結構?說明方法的原理與專屬性。11．慶大黴素無紫外吸收，中國葯典採用高效液相法測定C組分的相對含量時採用什麼方法進行檢出?12．試述四環素類葯物的結構特徵與理化性質。13．在四環素類葯物的薄層層析分析中為獲得較好的分離及克服拖尾現象，可採用什麼措施?14．四環素類抗生素中有關雜質主要指什麼?一般採用什麼方法控制這些雜質?

❸ 為什麼要嚴格控制生物葯物質量請舉例說明

改革開放的深入實施,國內各領域都獲得了較好的創新發展環境,其中生物制葯領域的革新效果最為顯著.社會經濟的飛速增長在很大程度上提高了人們的生活水平,但是各種不良的生活習慣卻時刻威脅著人們的身體健康,因此生物制葯在實現自身創新發展的同時還要滿足人們對各類葯物的實際需求.目前,葯物的研發與製造離不開生物葯物分析,是生物制葯的重要組成部分.通常情況下,生物制葯分析是指分析生物材料中的葯物,然後將其合理應用到葯物的製造過程以及臨床研究中.對於臨床用葯而言,生物樣品中葯物濃度測定結果的准確性極其重要,因為測定結果的准確性除了關繫到臨床治療效果以及安全程度之外,還對新葯的葯代動力學以及生物利用度等體內參數的准確性產生直接影響,由此可見,生物葯物分析方法的普及應用勢在必行,同時生物葯物分析方法的實施質量也必須得到最大程度的保障,以保證國內生物製造領域的整體生產研發質量.
生物葯物質量必須注意以下考慮。
葯理學特性
（1）、治療的針對性強
細胞色素c用於治療組織缺氧所引起的一系列疾病。
（2）、葯理活性高
注射用的純ATP可以直接供給機體能量。
（3）、毒副作用小、營養價值高
蛋白質、核酸、糖類、脂類等生物葯物本身就直接取自體內。
（4）、生理副作用時有發生
生物體之間的種屬差異或同種生物體之間的個體差異都很大，所以用葯時會發生免疫反應和過敏反應。

生產、制備中的特殊性
（1）、原料中的有效物質含量低
激素、酶在體內含量極低。
（2）、穩定性差
生物葯物的分子結構中具有特定的活性部位，該部位有嚴格的空間結構，一旦結構破壞，生物活性也就隨著消失。酶，很多理化因素使其失活。
（3）、易腐敗
生物葯物營養價值高，易染菌、腐敗。生產過程中應低溫、無菌。
（4）、注射用葯有特殊要求
生物葯物易被腸道中的酶所分解所以多採用注射給葯，注射葯比口服葯要求更嚴格，均一性、安全性、穩定性、有效性。理化性質、檢驗方法、劑型、劑量、處方、儲存方式。

檢驗上的特殊性
由於生物葯物具有生理功能，因此生物葯物不僅要有理化檢驗指標，更要有生物活性檢驗指標。

❹ 體內葯物分析中為何要處理理生物樣品中的蛋白質又該如何處理生物樣品中的蛋白質

生物樣品的前處理涉及很多方面，但主要應考慮生物樣品的種類，被測定葯物的性質和測定方法三個方面的問題。
樣品於測定前一般說來，放射免疫測定法由於具有較高的靈敏度和選擇性，因此當初步除去主要干擾物質之後即可直接測定微量樣品；而對靈敏度和專屬性較差的紫外分光光度法，分離要求就要相應高一些；至於常用的高效液相色譜法，為防止蛋白質等雜質沉積在色譜柱上，上柱前需對生物樣品進行去蛋白，有時對被測組分進行提取、制備衍生物等前處理。
樣品處理步驟與分析方法的選擇—(一）去除蛋白質
在測定血樣時，首先應去除蛋白質。去除蛋白質可使結合型的葯物均出來，以便測定葯物的總濃度；去除蛋白質也可預防提取過程中蛋白質發泡，減少乳化的形成，以及可以保護儀器性能（如保護HPLC柱不被沾污），延長使用期限。去除蛋白法有以下幾種。
1.加入與水相混溶的有機溶劑加入水溶性的有機溶劑；可使蛋白質的分子內及分子間的氫鍵發生變化而使蛋白質凝聚，使與蛋白質結合的葯物釋放出來。
2.加入中性鹽加入中性鹽，使溶液的離子強度發生變化。中性鹽能將與蛋白質水合的水置換出來，從而使蛋白質脫水而沉澱。
3.加入強酸當pH低於蛋白質的等電點時，蛋白質以陽離子形式存在。此時加入強酸，可與蛋白質陽離子形成不溶住鹽而沉澱。
5.酶解法在測定一些酸不穩定及蛋白結合牢的葯物時，常需用酶解法。最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素。它不僅可使組織酶，並可使葯物析出。
酶解法的優點是：可避兔某些葯物在酸及高溫下降解：對與蛋白質結合牢的葯物（如保泰松、苯妥英納），可顯著改善回收率；可用有機溶劑直接提取酶解液而無乳化現象生成，當採用HPLC法檢測時，無需再進行過多的凈化操作。酶解法的主要問題是不適用於在鹼性下易水解的葯物。
（二）綴合物的水解
尿中葯物多數呈綴合狀態。由於綴合物較原型葯物具有較大的極性，不易被有機溶劑提取。有些葯物僅需較溫和條件即可使葯物游離，有些則需較劇烈的方法，常用酸水解或酶水解的方法。
（三）分離、純化與濃集
對於大多數葯物而言，生物樣品的分析通常由兩步組成：樣品的前處理（分離、純化、濃集）和對最終提取物的儀器分析。
提取法是應用最多的分離、純化方法。提取的目的是為了從大量共存物中分離出所需要的微量組分----葯物及其代謝物，並通過溶劑的蒸發使樣品得到濃集。提取法包括液-液提取法和液-固提取法。
1.液-液提取法（liquid-liquidextraction，LLE）
多數葯物是親脂性的，在適當的溶劑中的溶解度大於水相中的溶解度，而血樣或尿樣中含有的大多數內源性雜質是強極性的水溶性物質。因而用有機溶劑提取一次即可除去大部分雜質，從大量的樣品中提取葯物經濃集後作為分析用樣品。
2.液-固提取法（liquid-solidextration，LES）
液－固提取法是近十幾年來在純化生物樣品時被廣泛採用的方法。也可以認為是規模縮小的柱色譜法。這種方法是應用液相色譜法原理處理樣品。將具有吸附、分配及離子交換性質的、表面積大的擔體作為萃取劑填入小柱，以溶劑淋洗後，將生物樣品通過，使其葯物或雜質保留在擔體上，用適當溶劑洗去雜質，再用適當溶劑將葯物洗脫下來。
（四）化學衍生化
分離前將葯物進行化學衍生化的目的是：（1）使葯物變成具有能被分離的性質；（2）提高檢測靈敏度；（3）增強葯物的穩定性；（4）提高對光學異構體分離的能力等。
葯物分子中含有活潑H者均可被化學衍生化，如含有－COOH、－OH、NH2、、－NH－、－SH等官能團的葯物都可被衍生化。
化學衍生化對GC和HPLC尤為重要。
1.GC中化學衍生化法葯物的化學衍生化前處理對GC十分必要，衍生化可使葯物分子中的極性基團，如羥基、氨基、羧基等變成無極性的、易於揮發的葯物，從而使GC的溫度不必很高即可適合GC的分析要求。主要的衍生化反應有烷基化（alkylations）、醯化（acrylations）、硅烷化（silylations）等。其中已硅烷化用得最廣泛。
常用的烷基化試劑有碘甲烷（CHI）、疊氮甲烷（CHN2）、氫氧化三甲基苯胺（TMAH）等；常用得醯化試劑有：乙酸酐、丙酸酐等；硅烷化試劑有：三甲基氯硅烷（TMCS）、雙－三甲基硅烷乙醯胺（BSA）、雙－三甲基硅烷三氟乙醯胺（BSTFA）、三甲基硅烷咪唑（IMTS）等。
具有光學異構體的葯物，由於R（-）與S（＋）構型不同，使之具有不同的葯效和葯動學特性，因此，異構體的分離也是十分重要的。分離光學異構體的方法之一，就是採用不對稱試劑，使其生成非對映異構體衍生物，然後用GC法或HPLC法進行分析測定。常用的稱試劑有：（S）－N－三氟乙醯脯胺醯氯、（S）－N－五氟乙醯脯胺醯氯等。 #\?xJxT\?
2.HPLC中化學衍生化法當採用HPLC法時，其衍生化的目的是為了提高葯物的檢測靈敏度。一些在紫外、可見光區沒有吸收或者摩爾吸收系數小的葯物，可以使其與衍生成對可見－紫外檢測器、熒光檢測器及電化學檢測器等具有高靈敏度的衍生物。
化學衍生化包括柱前衍生化和柱後衍生化兩種方法。由於柱前衍生化法是在分離前使葯物與衍生化試劑反應，故與葯物具有相同官能團的雜質也會同樣生成衍生，這樣就有可能妨礙葯物的檢測。同時，如果雜質含量多時，葯物與衍生化試劑的反應率降低，因此，應盡可能將葯物進行精製後再衍生化。柱後衍生化是葯物經色譜柱分離之後進行的，所以可形成對檢測器具有高靈敏度的衍生物，從而提高了選擇性。HPLC常用的衍生化試劑有鄰苯二醛、丹醯氯、熒胺等。
在測定生物樣品中葯物及其代謝物時，樣品的前處理是十分重要的。除了少數情況，將體液經簡單處理後進行直接測定外，一般要在測定之前進行樣品的前處理，即進行分離、純化、濃集，必要時還需對待測組分進行化學衍生化，從而為測定創造良好的條件。生物樣品進行前處理的目的在於：①葯物進入體內後，經吸收、分布、代謝，然後排出體外。在體液、組織和排泄物中除了游離型（原型）葯物之外，還有葯物的代謝物、葯物與蛋白質形成的結合物、以及葯物或其代謝物與內源性物質，如葡萄糖醛酸、硫酸形成的葡萄糖醛酸甙（gl uronides）、硫酸酯（sulphates）綴合物等多種形式存在，需要分離後測定葯物及代謝物；②生物樣品的介質組成比較復雜。如在血清中既含有高分子的蛋白質和低分子的糖、脂肪、尿素等有機化合物，也含有Na＋、K＋、X-等無機化合物］。其中影響最大的是蛋白質，若用HPLC法測定葯物濃度時，蛋白質會沉積在色譜柱上發生堵塞，嚴重影響分離效果。因此，為了保護儀器，提高測定的靈敏度，必須進行除蛋白等前處理。
一、常用樣品的種類、採集和貯藏
生物樣品包括各種體液和組織，但實際上最常用的是比較容易得到的血液（血漿、血清、金血）、尿液、唾液。在一些特定的情況下選用乳汁、脊髓液、精液等。下面僅介紹常用的血樣、尿樣及唾液。
（一）血樣 G\­(9M^6@y!
血漿（plasma）和血清（serum）是最常用的生物樣品。測定血中葯物濃度通常是指測定血漿或血清中的葯物濃度，而不是指含有血細胞的全血中的葯物濃度。一般認為，當葯物在體內達到穩定狀態時，血漿中葯物濃度與葯物在作用點的濃度緊密相關，即血漿中的葯物濃度反映了葯物在體內（靶器官）的狀況，因而血漿濃度可作為作用部位葯物濃度的可靠指標。
供測定的血樣應能代表整個血葯濃度，因而應待葯物在血液中分布均勻後取樣。動物實驗時，可直接從動脈或心臟取血。對於病人，通常採取靜脈血，有時根據血葯濃度和分析方法靈敏度，也可用毛細管采血。由採集的血液製取血漿或血清。
血漿的制備 將採取的血液置含有抗凝劑（如：肝縈、草酸鹽、拘橡酸鹽、EDTA、氟化鈉等）的試管中，混合後，以2500～3000rpm離心5min使與血細胞分離，分取上清液即為血漿。

血清的制備 將採取的血樣在室溫下至少放置30min到1h，待凝結出血餅後，用細竹捧或玻璃棒輕輕地剝去血餅，然後以2000～3000rpm離心分離5～10min，分取上清液．即為血清。
血漿比血清分離快，而且製取的量多，其量約為全血的一半。但由於所用抗凝劑的種類不同，用血漿測定葯物濃度有時不一致；血清的獲取量小，但血清成分更接近於組織液的化學成分，測定血清中有關物質的含量，比全血更能反映機體的具體情況；同時，葯物與纖維蛋白幾乎不結合，因此，血漿及血清中的葯物濃度測定值通常是相同的。基於上述原因，現在國外多採用「專用血清」來測定葯物的濃度。
對大多數葯物來說，血漿濃度與紅細胞中的濃度成正比，所以測定全血也不能提供更多的數據，而全血的凈化較血漿和血清更為麻煩，尤其是溶血後，血色素會給測定帶來干擾。但在個別情況下也有採用全血測定葯物濃度的。例如氯噻酮可與紅細胞結合，其動力學行為與在血漿中不同，在血細胞的葯物濃度比血漿葯物濃度大50～100倍；又如一些三環降壓葯物，對個別患者來說，在血漿和紅細胞的分配比率不是一個常數，因此宜採用全血進行測定。
全血（Whole blood）也應加入抗凝劑混合，防止凝血後影響測定。血樣的採取量受到一定限制，特別是間隔比較短的多次取樣，患者不易配合。過去一般取1～2ml。隨著高靈敏度測定方法的建立，取量可減少到1ml以下。採取靜脈血時，目前通行的方法是用注射器直接從靜脈抽取，然後置試管中：採取毛細管取血時，應用毛細管或特殊的微量采血管採取。採取血樣時，應由從事醫療工作的醫生、護士或者臨床檢查技師實施，葯劑師等不能進行采血工作。
血樣的采血時間間隔應隨測定目的的不同而異。例如：進行葯物動力學參數的測定時，需給出葯物在體內的葯物濃度．時間曲線。應根據動力學曲線模型〈單室還是雙室）、給葯方式來確定取樣間隔和次數，主要應在曲線首尾及峰值附近或濃度變化較大處取祥。采樣次數示意圖見
如進行治療葯物濃度監測（therapeuticdrug monitoring，TDM）時，則應在血中葯物濃度達到穩態後才有意義。但每種葯物的半衰期不同，因此達到穩態的時間也不間，取樣時間也隨之不同。葯物進入體內後，大多數很快與血漿中的蛋白質（白蛋白、球蛋白）結合成結合型，並與未結合的游離型葯物處於平衡狀態而存在。結合型葯物（bound型）不能通過血管壁，而游離型葯物（free型）能夠到達葯物作用部位，因此可以說葯物療效與游離型葯物濃度有著比較密切的關系，當然最理想的是測定游離型葯物。由於測定游離型葯物必須經過「超速離心」或「超濾法」等復雜的分離操作，又因葯物的蛋白結合率沒有很大的個體差異，通常血葯總濃度（結合型與游離的總和）可以有效表示游離葯物的濃度，因此，大多數的檢驗室不測定游離型葯物，而是測定葯物的總濃度。
但某些疾病可改變葯物與血漿蛋白的結合率，如肝硬化病人奎尼丁的游離型葯物分數幾乎增加三倍；腎病時，苯妥英、水楊酸、安妥明等的血漿蛋白結合卒明顯下降。有些葯物血漿蛋白結合率存在著很大的個體差異，如奎尼丁的血漿蛋白結合率的范圍為50％～90％，不同個體問游離葯物濃度差達10倍。也就是說在肝硬化、腎功能不全、腎病變、低營養等狀態下，血中白蛋白濃度顯著減少，葯物的蛋白結合率下降，游離型葯物濃度上升，此時應測定游離型葯物濃度。
採取血樣後，應及時分離血漿或血清，並最好立即進行分析。如不能立即測定時，應妥善儲存。血漿或血清樣品不經蒸發、濃縮，必須置硬質玻璃試管中完全密塞後保存。短期保存時置冰箱（4℃）中，長期保存時要在冷凍櫥（庫）（－20℃）中冷凍保存。
要注意采血後及時分離出血漿或血清再進行儲存。若不預先分離，血凝後冰凍保存，則因冰凍有時引起細胞溶解從而妨礙血漿或血清的分離或因溶血影響葯物濃度變化。
（二）唾液
唾液由腮腺、頜下腺、舌下腺和口腔粘膜內許多散在的小腺體分泌液混合組成的，平時所說的唾液就是指此混合液。一般成人每天分泌1～1.5ml，但個體差異大，即使是同－個人每日之內、每日之間也有變動；各腺體分泌的唾液組成也會有很大差別。對口腔粘膜給予機械的或化學的剌激時，會影響各唾液腺的分泌；視覺、聽覺、嗅覺等剌激所產生的條件反射以及思維、情緒也會影響唾液腺的分泌；隨年齡不同，唾液的分泌量也不同：小兒的唾液分泌量多，老年人的分泌量減少。
唾液的相對密度為1.003～1.008；pH值在6.2～7.6之間變動，分泌量增加時趨向鹼性而接近血液的pH值；通常得到的唾液含有粘蛋白，其粘度是水的1.9倍。
唾液的採集應盡可能在剌激少的安靜狀態下進行。一般在漱口後15min收集。分泌量多的，可以將自然貯存於口腔內的唾液吐入試管中，1min內約可取1ml的唾液。必要時也可轉動舌尖，以促進唾液的分泌。採集的時間至少要10min。採集後立即測量其除去泡沫部分的體積。放置後分為泡沫部分、透明部分及灰乳白色沉澱部分三層。分層後，以3000rpm離心分離10min，取上清液作為葯物濃度測定的樣品。也可以採用物理的（如嚼石蠟塊、橡膠、海綿）或化學的（如酒石酸）等方法剌激，使在短時間內得到大量的唾液。但另一方面，這樣做往往使唾液中的葯物濃度受到影響。特殊需要時，可以採集腮腺、頜下腺及舌下腺分泌的單一唾液。這種單一唾液的採集必須採用特殊的唾液採集器來收集。 ~6["b\}iY\
唾液中含有粘蛋白，唾液的粘度由粘蛋白的含量多少而定。粘蛋白是在唾液分泌後，受唾液中酶催化而生成的。為阻止粘蛋白的生成，應將唾液在4℃以下保存。如果分析時沒有影響，則可用鹼處理唾液，使粘蛋白溶解而降低粘度。唾液在保存過程中，會放出二氧化碳而使pH值升高，因此，需要測定唾液的pH值時，應在取樣的當時為好。冷藏保存唾液時，解凍後有必要將容器內唾液充分攪勻後再用，不然測定結果會產生誤差。
用唾液作為樣品測定葯物濃度有幾個優點：與採取血樣不同，患者自己可以不受時間和地點的限制，很容易地反復採集；採集時無痛苦無危險；有些唾液中葯物濃度可以反映血漿中游離型葯物濃度。但另一方面，由於唾液是由腮腺、頜下腺及舌下腺等各腺體分泌的組成不同的混合液體，其組成也會發生經時變動；因此，唾液中的葯物濃度與血漿中的游離型葯物濃度相比就容易變動；而且唾液中葯物濃度與血漿中葯物濃度的比值〈S／P）只有少數葯物是恆定值；有些與蛋白結合率較高的葯物，葯物在唾液中的濃度比血漿濃度低得多，需要高靈敏度的分析方法才能檢測；對有些患者（如癲癇、昏迷）不能採集唾液樣品。最後應該指出的是：目前所指的血漿或血清濃度的治療范圍，都是指血漿或血清中的總濃度（游離型和結合型），因此，只有知道唾液中葯物濃度與血漿中葯物濃度有－定的比值時，唾液中葯物濃度的監測才有意義，並且應該先求出具體患者的比值（S/P）。
（三）尿液
採用尿樣測定葯物濃度的目的與血液、唾液樣品不同。尿葯測定主要用於葯物劑量回收研究、尿清除率、生物利用度的研究，並可推斷患者是否違反醫囑用葯，同時根據葯物劑量回收研究可以預測葯物的代謝過程及測定葯物的代謝類型（代謝速率，MR）等。
體內葯物清除主要是通過尿液排出，葯物可以原型（母體葯物）或代謝物及其綴合物（conjugete）等形式排出。尿液中葯物濃度較高，收集量可以很大，收集也方便。但尿液濃度通常變化很大。尿液主要成分是水、含氮化合物（其中大部分是尿素）及鹽類。
健康人排出的尿液是淡黃色或黃褐色的，成人一日排尿量為1~5L，尿液相對密度1.015~1.020，pH值在4.8~8.0之間。放置後會析出鹽類，並有細菌繁殖、固體成分的崩解，因而使尿液變混濁。由於這些原因，必須加入防腐劑保存。採集的尿是自然排尿。尿包括隨時尿、晨尿、白天尿、夜間尿及時間尿幾種。測定尿中葯物濃度時應採用時間尿，時間尿以外的尿不可能推斷全尿中葯物的排泄濃度和葯物總量。因此，測定尿中葯物的總量時，將一定時間內（如8h、12h或24h等）排泄的尿液全部儲在起來，並記錄其體積，取其一部分測定葯物濃度，然後乘以尿量求得排泄總量。如採集24h的尿液時，一般在上午8點讓患者排尿並棄去不要，之後排出的尿液全部儲存於干凈的容器，中，直到次日上午8點再讓患者排尿，並加入容器中。將此容器中盛的尿液做為檢液。採集24h尿液時，常用2L容量的帶蓋的廣口玻璃瓶，其體和可能會有士100ml的誤差，因此，需再用量筒准確地測量儲尿量。採集一定時間內的時間尿液時，常用塗蠟的一次性紙杯或用玻璃杯，並用量筒准確量好體積放入儲尿瓶，並做好記錄。
尿液中葯物濃度的改變不能直接反映血葯濃度，即P與血葯濃度相關性差；受二試者的腎功能正常與否直接影響葯物排泄，因而腎功能不良者不宜採用尿樣；嬰兒的排尿時間難於掌握；尿液不易採集完全並不易保存。這些是尿樣的缺點。
採集的尿樣應立即測定。若收集24h的尿液不能立即測定時，應加入防腐劑置冰箱中保存。常用防腐劑有：甲苯、二甲苯、氯仿、麝香草酚以及醋酸、濃鹽酸等。利用甲苯等可以在尿液的表面形成薄膜，醋酸等可以改變尿液的酸鹼性來抑制細菌的生長。保存時間為24～36h，可置冰箱（4℃）中，長時間保存時，應冰凍（－20℃）。
本回答

❺ 使用生物農葯，要注意什麼

如今大家的環境保護意識的提升和身體健康觀念愈來愈高，大量人偏愛「翠綠色」食品類。生物農葯如今早已普遍宣傳和應用。那麼，使用生物農葯必須注意什麼？

一、有根據地查天氣施葯

生物農葯的運用實際效果因為遭受自然環境因素的危害很大。因而，具體運用上生物農葯從噴灑於綠色植物到蟲類攝食或觸碰菌體必須一定的時間，而從害蟲攝食到身亡也必須一個全過程，

生物農葯在具體運用中，大部分噴灑系統軟體高效率都很低，一般是自上而下立即對農作物施用，導致很多化肥都集聚在農作物上邊的葉片上，其他化肥則損害在土質里，尤其是細顆粒物很大時，損害就更高。與此同時因為生物農葯產品成本高，因此應提升服葯技術性。

應用性能卓越噴灑機械設備刻不容緩，如選用彌霧法噴灑，與扇型氣體噴管配套設施的液壓機噴頭射出的細顆粒物小而勻稱，使噴霧器潛在性飄流物降低並使較小液體噴涌至預估靶點葉，進而提升生物農葯的防效，減少產品成本。

❻ 簡述酶法分析生物葯物和基因工程葯物的原理，主要有哪些方法

酶分析法在生物葯物分析中的應用主要有兩個方面：第一，以酶為分析對象，根據需要對生物葯物生產過程中所使用的酶和生物葯物樣品所含的酶進行酶的含量或酶活力的測定，稱為酶分析法；第二，利用酶的特點，以酶作為分析工具或分析試劑，用於測定生物葯物樣品中用一般化學方法難於儉測的物質，如底物、輔酶、抑制劑和激動劑(活化劑)或輔助因子含量的方法稱為酶法分析。

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特定及優勢

而如果有僅作用於被測物質的酶，利用酶的特異性，不需要分離就能辨別試樣中的被測組分，從而對被測物質進行定性和定量分析。所以，酶法分析常用於復雜組分中結構和物理化學性質比較相近的同類物質的分離簽定和分析，而且樣品一般不需要進行很復雜的預處理。酶法分析具有特異性強，干擾少，操作簡便，樣品和試劑用量少，測定快速精確，靈敏度高等特點。通過了解酶對底物的特異性。可以預料可能發生的干擾反應並設法糾正。在以酶作分析試劑測定非酶物質時，也可用偶聯反應；而且偶聯反應的特異性，可以增加反應全過程的持異性。此外，由於酶反應一般在溫和的條件下進行，不需使用強酸強鹼，它還是一種無污染或污染很少的分析方法。很多需紅使用氣相色譜儀、高壓液相色譜儀等貴重的大型精密分析儀器才能完成的分析檢驗工作，應用酶法分析方法即可簡便快速地進行。酶法分析目前主要廣泛應用於醫葯、臨床、食品和生化分析檢測中，如尿素、各種糖類、氨基酸類、有機酸類、維生素類、毒素等物質的定性和定量分析。

❼ 生物 在設計探究實驗時,應注意些什麼如何控制變數

單一變數原則
單一變數是指自變數，即只有自變數是可以改變的，其它的無關變數都保持一致，以確保因變數的變化只是由自變數的變化而引起的。
常見的包括：空白對照 ，自身對照，條件對照，相互對照，標准對照

操控自變數的方法：
（1）施加（做加法）
如：驗證甲狀腺激素促進生長發育的作用，實驗組添加甲狀腺激素；
（2）去除（做減法） 如：證明光合作用需要光，實驗組進行遮光處理 ；
（3）改變

實驗步驟中體現無關變數的控制：
①確定分組
②操作自變數，書寫實驗組
控制無關變數，書寫對照組
（等量的、相同的）
③是否立即可得因變數？
（相同的、適宜的條件培養、飼養）
④測量（觀察）因變數

❽ 生化葯物制備過程中需要注意哪幾個方面

國內在生化葯物的研究方面存在較多的問題，主要表現在以下幾個方面：1、對原材料沒有進行嚴格的控制;2、無病毒滅活的工藝步驟;3、質量研究內容不夠全面等。致使審評人員難以把握其質量，且產生了更多的安全性擔憂。
一、生化葯物的制備方法生化制葯就是將動物、植物或微生物機體內的生物活性物質在其結構和功能不遭破壞的前提下，採用多種生化分離的方法提取、純化的工藝過程。生化制葯的六個階段：1、原料的選擇和預處理;2、組織及細胞的破碎;3、從破碎的細胞中提取有效成分製成粗品;4、採用多種生化技術從粗品中將目的物精製出來;5、乾燥及保存;6、制劑。以上各階段在不同的生化葯物制備中，根據所選材料的不同，可靈活取捨選擇使用。
生化葯物的分離純化方法主要有五類：1、根據分子大小和形狀不同進行分離，如凝膠過濾法、透析和超濾法、密度梯度離心法等;2、根據分子的帶電性質進行分離，如離子交換層析法、電泳法、等電聚焦法;3、根據分子極性大小及溶解度不同進行分離，如等電點沉澱法、鹽析法、有機溶劑沉澱法、逆流分配法等;4、根據配體特異性進行分離，如親和層析法;5、根據物質吸附性質不同進行分離，如選擇性吸附和吸附層析法。
二、生化葯物質量控制研究要點生化葯物復雜多樣，在此僅針對臟器提取的多組分生化葯物進行討論，其它生化葯物可參考。
(一)、臟器生化葯物臟器生化葯是指從動物來源的生化葯物，即從動物的組織、器官、腺體、體液、分泌物以及胎盤、毛、皮、角和蹄甲等提取的葯物。臟器生化葯物中多數有效成分不明確，多屬高分子物質，現在多數還不能用合成的方法生產，有的物質還需要有同時存在的其它物質的協同作用才能發揮較好的生理功能。主要的臟器生化葯物1、
組織和器官來源大腦：膽固醇、腦磷脂、卵磷脂、P-物質和多種腦啡肽等;丘腦：生長激素釋放因子和生長激素抑制因子等;心臟和動脈管：細胞色素C、輔酶Q10和輔酶A等;肝臟：核糖核酸、肝注射液、肝提取物、肝水解物和輔酶A等;肺臟：抑肽酶等;脾臟：脾注射液、肝-脾提取物和脫氧核苷酸鈉注射液等;胃：胃膜素和胃蛋白酶等;腸及腸粘膜：P-物質、肝素和其它肝素(低分子肝素)等;眼：眼生素和眼寧等全眼提取物;骨：硫酸軟骨素、硫酸軟骨素A、骨肽注射液和蛋白腖等;皮：明膠和阿膠等;2、
腺體來源腦垂體：促皮質素、促卵泡激素、促黃體生成激素、生長激素、促乳激素、催產素、加壓素和垂體前葉激素等;胰腺：胰島素、胰高血糖素、胰蛋白酶、糜蛋白酶、結晶糜胰蛋白酶、胰酶、蛋白酶抑制劑、激肽釋放酶(血管舒緩素)、彈性酶(彈性蛋白酶)、膠原酶、胰類肝素等;唾液腺：唾液腺素等;頜下腺：激肽釋放酶等;腮腺：腮腺素等;甲狀腺：降鈣素、甲狀腺素和乾燥甲狀腺提取物等;胸腺：胸腺素(胸腺肽)、胸腺生成素Ⅰ、Ⅱ和胸腺體液因子等;腎上腺：腎上腺皮質激素等;甲狀旁腺：甲狀旁腺素等;卵巢：鬆弛肽和子宮鬆弛因子等;睾丸：透明質酸酶等;松果體：松果體激素等;3、
體液和分泌物來源血液：組氨酸、賴氨酸、精氨酸和水解蛋白等;膽汁：人工牛黃、去氫膽酸、鵝去氧膽酸、膽酸鈉、膽黃素等;尿：尿激酶和絨毛膜激素等;4、
其他來源胎盤：胎盤提取物、胎盤球蛋白和白蛋白等;毛：胱氨酸、半胱氨酸、賴氨酸和精氨酸等;角和蹄甲：羚羊角、犀角代用品和婦樂寧等;蛋：溶菌酶等。
(二)、臟器生化葯物的研究和質量控制要點因動物的來源復雜(包括動物的種屬、健康狀況、飼養環境、年齡、採集時間、採集方法等)，提取純化工藝簡單，其有效成分的含量和比例會產生較大的差異，因此，單靠質量標准不能全面控制產品的質量，而需要控制源頭和工藝過程，再結合質量標准才能較有效地控制產品的質量，確保臨床應用的安全性和有效性。換句話說，生化葯物的質量控制重點就是要保證生產產品與臨床研究樣品質量一致，這種質量的一致性單憑質量標准中的質量控制指標不能全面地反映出來(這一點不同於化學葯物)，必須通過嚴格地控制源頭和工藝過程來實現，這一點類似於生物製品。1、臟器生化葯物研究的一般過程研究臟器生化葯物首先要固定源頭(原材料)，包括動物的種屬、健康狀況、飼養環境(封閉飼養)、年齡、採集時間和採集方法等，並制訂原材料的質量標准。然後研究合適的提取純化方法，包括動物源性病毒的滅活和驗證，確定原液(或半成品)的生產工藝;研究原液(或半成品)中的主要成分、含量、主成分的比例，以及其它成分的控制方法等，制訂原液(或半成品)的質量標准。進行制劑的處方工藝研究，最後製成臨床應用的制劑(成品)，並進行相應的質量研究，制訂成品的質量標准。2、動物源性病毒的滅活工藝及驗證因組織來源動物的種類不同，其自然攜帶或者感染病毒的種類也會有所不同，再加上目前動物來源的原材料可控性較差，故必須要對動物源性病毒進行滅活或去除，並對滅活或去除工藝進行驗證。滅活或去除動物源性病毒，首先要了解選定動物的病毒情況，重點關注已確認對人類具有感染和致病能力的病毒(例如牛和豬的口蹄疫病毒，豬的乙型腦炎病毒等)及已有試驗提示與人類疾病具有關聯性的病毒(例如牛腹瀉病毒，豬的戊肝病毒等)，了解病毒的生物學和對理化因素敏感性等方面的特性。檢驗原材料中病毒的污染程度和負載量，為採取相應的處理工藝提供研究數據。如果已知原材料中污染了對人感染或者致病的病毒，或者檢出了內源性逆轉錄病毒、具有種屬特異性的其它污染病毒，則必須廢棄該原材料並妥善處理。(1)病毒的檢測方法病毒的檢測方法主要有體外法(採用不同種屬的多種敏感細胞系進行共培養檢測，在適宜的培養時間點取樣檢測感染性病毒，至少應盲傳3代)、體內法(在沒有可靠的體外試驗方法時，可採用適宜的動物進行接種盲傳試驗，採用敏感的方法檢測感染性病毒)、動物抗體產生試驗(對尚沒有合適的體內和體外試驗方法檢測的病毒，可採用不同動物觀察種特異病毒的抗體產生情況，抗體產生試驗特別有助於檢出嚙齒類動物病毒)、其他方法(電鏡、ELISA、PCR、RT方法等)。病毒的檢測方法應結合品種的特點和具體生產情況，綜合分析後進行設計和選擇，通常應有合理的依據和支持性資料。(2)病毒滅活/去除工藝盡量設計與實際生產工藝相關的及合理的病毒滅活/去除研究試驗方案，尤其是特定的生產工藝步驟，模擬的工藝在試驗參數及控制條件方面應與實際工藝嚴格保持一致。也就是說模擬的生產工藝應當盡可能代表實際生產工藝的情況;如果產生了不可避免的偏差，應對試驗結果可能產生的影響給予合理的解釋。有關病毒滅活/去除的技術方法，可參見《血液製品病毒去除/滅活病毒技術方法及驗證指導原則》。(3)病毒滅活/去除工藝驗證研究病毒滅活/去除工藝驗證研究的目的是要獲取充足的試驗研究數據，以證明生產工藝中包含有效的病毒滅活/去除工藝步驟。其基本原則是生產工藝必須包含有效的病毒滅活/去除工藝步驟，若生產工藝無有效的滅活/去除病毒的作用，應根據產品的不同，在生產工藝過程中增加特定的病毒滅活/去除步驟。對臟器生化葯物應包含兩種機制上能夠互補的有效工藝步驟。經過多年的實踐，已經獲得普遍認可的作法是將已知量的指示用活病毒，加入到模擬的原液或者不同生產工藝階段的中間產品中，然後定量測定經特定工藝步驟或技術方法處理後病毒滴度下降的幅度，據此評價工藝滅活/去除病毒的效果。一般驗證採用普通指示病毒，試驗結果用於說明工藝步驟對一般病毒的滅活/去除能力，在適宜的范圍內能夠代表對同類病毒相似的清除能力;特定驗證採用特定病毒(已發現的污染病毒)或者與特定病毒相似的病毒作為替代，試驗結果用於說明工藝步驟對特定病毒的滅活/去除能力，生產工藝必須具有足夠的清除該病毒的能力。因為特定病毒與一般病毒在理化因素敏感性、病毒結構特點、病毒顆粒大小及其它方面有差異，因此，普通指示病毒與特定病毒或特定病毒相似的病毒不具備可比性和一致性，難以互相替代。(4)指示病毒的選擇指示病毒選擇的原則：指示病毒應具有代表性和合理性，可用於正確評價生產工藝的病毒安全性。選擇指示病毒應考慮的幾個方面：1)根據生產過程中污染病毒的來源、污染環節和程度、致病性質和特點，以及其它應考慮的各種實際因素，同時結合能夠用於評價驗證效果的指示病毒的可獲得性與相關培養試驗條件，盡可能地選擇具有一般代表性和特定模擬意義的多種指示病毒。2)盡可能選擇可培養到高滴度的病毒;並應有可靠、有效的檢測方法。3)應當考慮指示病毒可能對操作人員形成的健康危害，並採取必要的防護措施;必須注意指示病毒本身的安全性，應遵守國家有關的管理規定，屬於烈性傳染病毒不能使用。4)在選擇普通指示病毒或/和特定指示病毒時，至少都應當包括RNA和DNA病毒、脂包膜和非脂包膜病毒。5)以生物組織原材料或組織原材料勻漿中可能出現的病毒為核心，綜合考慮生產工藝、污染病毒及滅活/去除技術方法本身等各方面的特點進行選擇。(5)病毒滅活/去除有效工藝步驟的評價首先要有病毒滅活/去除驗證的試驗資料，並證實在生產工藝過程中某特定步驟能夠有效地滅活/去除病毒。對於可能起作用的每個步驟都應進行必要的評價，明確是否具有確切的病毒滅活/去除作用，並確定有效的工藝步驟。在有效的病毒滅活/去除工藝步驟後，不得進行可能引入新污染(如添加動物來源的材料)的操作(除非證明該操作完全排除病毒污染的可能性)，嚴格防止再污染的發生。一般將病毒感染性滴度減少4log以上的處理步驟認可為有效的病毒滅活/去除工藝步驟。但如果檢測方法的最低檢測限為103TCID50，即使病毒起始滴度為106TCID50，經處理後未檢出病毒，也不宜算作特定的有效工藝步驟，因為處理後病毒的實際滴度有可能大於102TCID50，因此只能根據檢測方法的靈敏度表示為未檢出。病毒感染量的降低可以從病毒顆粒清除的量或病毒被滅活的情況兩方面來評價。可能的情況下，應明確病毒滴度的下降是物理清除還是直接滅活。(6)病毒安全性的追蹤觀察由於檢測方法、監測時間及靈敏性等各種因素的影響，臨床前研究中即使動物試驗，甚至是靈長類動物試驗結果為陰性，也難以完全排除人類感染潛在污染病毒的風險(如潛伏期長的病毒、致病過程緩慢的病毒、感染特異性檢測指標未知的病毒等)。因為不同階段，人們對病毒危害的認識深入程度和全面性等不同，可提供的試驗研究支持性資料及側重點也有所不同;所以對動物來源的生化葯物，不論是在臨床研究的過程中，還是上市後均應進行必要的病毒安全性追蹤觀察。具體方法：針對可能污染的病毒，注意觀察並設立病毒感染的評價指標。包括已知對原材料來源動物有致病性的病毒，在體內、體外試驗中能夠感染人類組織細胞的病毒，特別是隱性感染的病毒等;通過血清學或培養分離等臨床檢測，發現和驗證在生產過程中未能發現的新病毒及感染特徵。採用的檢測方法應能夠鑒別出人與動物病毒的區別，並經過驗證確保方法的敏感性和特異性。在臨床研究方案中應有對可疑致病病毒的檢測實施方案，包括：急性感染、慢性感染、常規篩查臨床隱性感染和血清陽轉情況，以及用葯前後檢測結果的對比。通過主動檢測和被動檢測及時發現無症狀隱性感染患者，避免在人群中可能發生的大規模播散。由於許多未知的和不確定因素的存在，最終確定污染病毒的致病性仍需要進行大量的基礎研究和臨床驗證工作，因此，使用動物來源產品的患者，應該知道：經過病毒安全性控制的產品，雖然已經將感染病毒的風險減小到極低的程度，但並不能完全排除這種風險。3、臟器生化葯物的質量控制要點根據臟器生化葯物研究的一般過程，其質量控制要點主要分以下三個方面：1)固定源頭(原材料)，包括動物的種屬、健康狀況、飼養環境(封閉飼養)、年齡、採集時間和採集方法等，並制訂原材料的質量標准。2)研究合適的提取純化方法，包括動物源性病毒的滅活和驗證，確定原液(或半成品)的生產工藝;研究原液(或半成品)中的主要成分、含量、主成分的比例，以及其它成分的控制方法等，制訂原液(或半成品)的質量標准。3)進行制劑的處方工藝研究，製成臨床應用的制劑(成品)，並進行相應的質量研究，制訂成品的質量標准。總之，臟器生化葯物質量控制的核心就是全程式控制制(從源頭到終產品，工藝過程式控制制和質量標准控制)。
三、生化葯物研究應注意的問題因生化葯物的來源復雜，不同的原材料和生產工藝得到的產品的質量會有差異，包括主要成分的含量、比例，以及其它成分的種類和/或含量等，而這些差異往往質量標准反映不出來，從嚴格意義上說，生化葯物沒有仿製。所以，在進行生化葯物研究時首先要基於「不可仿製」來考慮問題。1、注重原材料和工藝過程式控制制，結合質量標准，較全面地控制產品的質量。2、產品上市後不要輕易更換原材料、變更生產工藝、改換劑型(尤其是水針、粉針、大輸液互換)、延長有效期等。如果需要進行以上變更，應針對變更情況對產品的質量、安全性和有效性的影響(這種影響是指產品的真實質量，並不只是質量標准中的質量控制指標)進行相應的研究工作，包括葯學、葯理毒理和臨床研究。3、因為生化葯物的質量是靠全程式控制制來保證，其原液(或半成品)應不可以自由銷售，否則不僅增大了流通環節再次染菌的可能性，又不利於成品全程的質量控制。4、動物源性病毒的滅活工藝及驗證是一個需要研發者、審評人員，以及有關方面的專家共同研究和探討的課題。因為人們對動物源性病毒的認識，以及動物源性病毒與人類感染性疾病的關系的認識是在逐步地深入，對病毒的滅活和工藝驗證也會隨著人們認識的提高而不斷地趨於更科學和合理。以上簡要介紹了生化葯物的一般制備方法、工藝過程和質量研究，以及在研究過程中應注意的問題，目的是使研發者進一步了解生化葯物的特性和質量控制要點，在進行生化葯物研究時重視源頭控制和工藝過程式控制制，建立生化葯物全程式控制制的理念，尤其是在產品上市後，如果補充申請進行某些變更時，需要針對變更對產品的質量、安全性和有效性的影響進行相應的葯學、葯理毒理和臨床研究.

❾ 利用薄層色譜對葯物進行鑒別和雜質檢查時應注意哪些操作事項

薄層色譜法(The layer chromatography，TLC)是將固定相均勻的塗布在具有光潔表面的玻璃、塑料或金屬板上形成薄層，在此薄層上進行色譜分離的方法，它屬於平板色譜，是一種常用的色譜分離方法。
TLC法被許多國家葯典用於葯物中雜質的檢查、葯物分析等方面，且是目前葯典中收載最多的鑒別與有關物質檢查方法之一，具有設備簡單、操作簡便、分離速度快，靈敏度和解析度較高等優點。
而薄層色譜在葯物分析中，則常用薄層色譜掃描法，其主要用於以下幾個方面：
1、中葯材與中成葯的鑒別與成分分析
2、 合成葯物及其制劑分析
3、葯物代謝研究

4、抗菌素分析
5、中葯的TLC指紋圖譜鑒別
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱「高壓液相色譜」、「高速液相色譜」、「高分離度液相色譜」、「近代柱色譜」等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。
是20世紀70年代迅速發展起來的一種高效、快速、高選擇性、高靈敏度的新型分離分析技術，是經典液相色譜的發展。
高效液相色譜法在葯物分析中的應用主要是鑒別相關物質、檢查葯物中有關物質的含量限度，測定有效成分或主要成分含量。
1、在葯物鑒別中的應用
在HPLC法中，保留時間與組分的結構和性質有關，是定性的參數，可用於葯物的鑒別，在中國葯典中就有大量的葯物採用此法進行鑒別。
2、在雜質檢查中的應用
歷年來各國葯典中收載了多種葯物採用HPLC法進行雜質檢查的方法，並且可採用HPLC法進行雜質檢查的葯物種類在逐年頒布的葯典中有所增加。
3、在含量測定中的應用
用高效液相色譜法測定合成葯及其制劑的含量，可以消除葯物中的雜質，制劑中的附加劑及共存葯物的干擾。

❿ HPLC用於分析生物鹼應該注意什麼

1、生物鹼HPLC的分析模式
根據HPLC分析生物鹼時所使用固定相性質、流動相組成及極性不同,其分析模式大致可分為：正相吸附色譜法、正相硅膠反相洗脫系統色譜法、反相色譜法及離子交換色譜法.
正相吸附色譜法：通常以硅膠基質為吸附固定相,流動相為不同極性的有機溶劑或不同比例混合溶劑,分離過程主要依靠生物鹼與吸附劑吸附作用的差異實現,為了改善分離,提高溶洗脫能力,常於流動相中加濃氨液、二乙胺、三乙胺等.該法應用於生物鹼分析的文獻較少.
正相硅膠一反相洗脫系統色譜法(NS-RE)：通常採用未經化學改性的普通硅膠為固定相,以極性有機溶劑(甲醇、乙腈)和高pH緩沖溶液為流動相,分析包括生物鹼在內的鹼性葯物.該法柱效高,峰形對稱,是簡便有效的方法.在實際應用中,流動相的組成是主要的影響因素,流動相中除含有調節pH 的緩沖鹽外,有時還要三乙胺、溴化四丁基銨等競爭離子或烷基磺酸鈉等對離子.因此,影響保留與分離的主要因素是流動相pH、競爭離子種類及濃度 .
反相高效液相色譜法(RP-HPLC)：近年來RP-HPLC應用於生物鹼分析方面的文獻很多,已成為常規的方法.但普通存在色譜峰的展寬拖尾,導致分離效能低,這主要緣於生物鹼結構中鹼性氮原子與固定相未鍵台酸性硅醇基的相互作用.即使是所測生物鹼在較低濃度下,仍常產生峰漂移及峰對稱性差等現象.針對此缺陷,研究工作者從適用於鹼性物質分析的反相填料的設計選擇,流動相中緩沖鹽的使用,流動相添加劑(離子對試劑、有機胺改性劑)等幾方面進行了較為廣泛細致的研究,並取得了一定的進展.
離子交換色譜法：該法以陽離子交換樹脂為固定相,利用質子化的生物鹼陽離子與離子交換劑交換能力的差異而達到分離生物鹼的目的,有關生物鹼高效液相離子交換色譜法的應用報道較少.
2、生物鹼HPLC分析檢測方法
目前,生物鹼HPLC分析檢測方式多以紫外法為主,在定性分析方面,紫外法檢測選擇性低,定性專屬性差.隨著二極體陣列檢測器使用的普及,顯著提高了液相分析檢測的選擇性.此外,根據生物鹼的理化性質,其它檢測方式如熒光法、電化學法、蒸發光散射法亦得到了應用.近年來,液相色譜-質譜聯用技術已應用於生物鹼分析,增強了對生物鹼的定性檢測能力,提高了檢測靈敏度.新的介面技術及離子化方法的發展．使得HPLC-MS在生物鹼的分析中得到較廣泛的應用,近年的文獻報道日漸增多.
3、生物鹼HPLC分析的樣品處理方法
因生物鹼常具有一定的鹼性,一般常用鹼化液液萃取或酸水提取等方法從中草葯、中成葯及生物樣品等較復雜體系中提取純化,以達到富集和去除雜質的目的.近年來,固相萃取(SPE)技術及超臨界流體萃取等現代提取純化技術亦應用於樣品的提取純化.