A. 什麼是生物素標簽
應該是在基因工程中所用到的類似於抗生素類的基因標記標簽
B. 生物素標記的DNA探針用什麼方法檢測
生物素標記的DNA探針用什麼方法檢測
以病原微生物DNA或RNA的特異性片段為模板,人工合成的帶有放射性或生物素標記的單鏈DNA片段,可用來快速檢測病原體.
怎麼檢測:
將一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或熒光染料等標記後製成的探針.可與固定在硝酸纖維素膜的DNA或RNA進行互補結合,經放射自顯影或其他檢測手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在.
以細菌為例,目前分子雜交技術用於細菌的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要准確的多,是細菌分類學的一個發展方向.加之分子雜交技術的高敏感性,分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景.細菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個基因.(各種細菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要採取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段後分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫.然後用多種其它菌種的DNA作探針來篩選,產生雜交信號的克隆被剔除,最後剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段.將此重組質粒標記後作探針進一步鑒定,亦可經DNA序列分析鑒定其基因來源和功能.)括弧里比較重要!
C. 生物素標記是什麼
生物素是個蛋白,標記就是把這個蛋白標記到別的上面便於檢測
D. 熒光二抗標記用HRP、AP、FITC、生物素法各發什麼顏色熒光
這四個不是一碼事,HRP和AP是酶,二抗上掛了酶,要給相應的底物才能顯色,顯色方式可以通過發熒光也可以不發熒光(例如給予ECL底物,其中的H2O2和魯米諾在HRP的作用下,能在黑暗中發出熒光;也可以給予雙氧水和DAB,反應產生棕色不溶於水的物質);FITC為異硫氰酸熒光素,本身就是黃綠色熒光,二抗結合後可直接在熒光顯微鏡下觀察;生物素一般也是掛在二抗上的,利用卵白素分別連接生物素標記的第二抗體和生物標記的酶,由酶催化底物,生成終產物,這個終產物也是不溶於水的。
E. 生物素標記在dna5'和3'的區別
相同點:不能發動新鏈的合成,只催化已有鏈的延長。都有5'端到3'端聚合的作用,3'端到5'端外切得作用。不同點:DNA聚合酶I還有5'端到3'端外切的作用。而DNA聚合酶III沒有此功能。DNA聚合酶I的主要作用是切去岡崎片段5'端得引物。DNA聚合酶III是DNA復制的主要酶。
F. 如何用生物素標記抗體
緩沖溶液的作用主要就是pH穩定性和離子強度的適合,還有避免緩沖溶液中的成分與樣品分子發生共價鏈接,主要就是考慮這些。
鏈接很容易,就用EDC或者CMC等碳二亞胺,是最容易在羧基和氨基之間催化形成醯胺鍵,反應條件就是0到4度,過夜,用磁力攪拌子溫和攪拌,pH<7反應快,不過pH=7或稍微pH>7也關系不大。EDC或者CMC等碳二亞胺催化活性極高,而且一般的蛋白質的分子表面總有Lys,Arg,Asn,Gln,所以游離在分子表面的羧基和氨基總是不少的,參與反應的兩種蛋白質用大致10:1的比例混合(哪種蛋白質便宜,哪種蛋白質的物質的量就大些,但是這不是全部原因),反應樣品濃度就按照平時使用時的濃度或略微更低濃度(別用儲存液的濃度)即可。很容易反應,而且EDC或者CMC等碳二亞胺是零臂連接試劑,用於空間位阻,形成多分子交聯可能較小,即使形成了也很容易用分子篩層析按照分子量區分開。
參與反應的兩種蛋白質用大致10:1的比例混合(哪種蛋白質便宜,哪種蛋白質的物質的量就大些,但是這不是全部原因),為了避免兩種蛋白質之間發生交聯成為串聯,因為一種蛋白質形成串聯的可能性低一些;即使要形成串聯的蛋白質串珠,最好也不要是價格高的那種;另外,EDC或者CMC等碳二亞胺催化活性極高,室溫下即會催化,所以要在0到4度,過夜,用磁力攪拌子溫和攪拌,一方面避免碳二亞胺催化活性太高形成串聯的蛋白質串珠,另一方面,保護蛋白質不變性;反應樣品濃度就按照平時使用時的濃度或略微更低濃度(別用儲存液的濃度)即可,為什麼?因為濃度高了更易形成串聯的蛋白質串珠結構,濃度低了,沒有反應成功,通過分子篩層析還可以分離出來接著連接,如果形成了醯胺鍵再要專一性切開就沒有那麼容易了。
G. 怎樣用生物素標記dna
先用限制性內切酶在DNA上切出兩個粘性末端,然後在DNA連接酶的配合下用與這個粘性末端相配的有標志性的(可以是放射性和熒光性等同位素一般屬於放射性)DNA片段標記出來,簡單地說就是這樣~
H. 易畢恩公司的5hmC高通量檢測到底是什麼樣的技術優勢在哪裡
5hmC高通量檢測是基於化學標記法的5-羥甲基胞嘧啶(5hmC)檢測技術,也叫高通量DNA羥甲基化檢測。高通量DNA羥甲基化檢測即通過高通量測序的方式檢驗DNA中羥甲基胞嘧啶在基因組范圍上的分布,進而了解基因的去甲基化表觀調控信息。它的臨床端產品目前適用於肝硬化多發結節肝癌篩查、肝癌高危人群輔助診斷、小肝癌輔助診斷以及AFP陰性患者術後的療效監控。與其他市場上的癌症早篩技術相比,5hmC高通量檢測主要有以下幾個優勢:1) 能夠更加精準判斷病情。基因突變並不能直接表明患者當下有沒有得疾病,而表觀遺傳編碼則能直接反映疾病的實時情況,且具有高准確性。2) 檢出率高。易畢恩具有芝加哥大學富集羥甲基化片段的全球獨占專利技術,能特異性地挑出血液中帶羥甲基化修飾的基因片段。只用少量血液,就能達到很好的檢測效果。3) 覆蓋廣。通過血液游離DNA的測序可以覆蓋20000個基因的羥甲基化分布,無創廣譜監控基因活性。