體表微生物檢查如何操作

『壹』 致病菌感染的微生物學檢查基本程序是怎麼樣的

病原微生物種類繁多，變異迅速，快速鑒定病原微生物的檢驗技術也在不斷發展前進著。目前，應用比較廣泛的病原微生物檢測方法主要有直接塗片鏡檢、分離培養、生化反應、血清學反應、核酸分子雜交、基因晶元、多聚酶鏈反應等，該文對這些檢測技術進展做一綜述。 對人和動物具有致病性的微生物稱為病原微生物，又稱病原體，有病毒、細菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、真菌、放線菌、朊粒等。這些病原微生物可引起感染、過敏、腫瘤、痴獃等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年來出現的SARS、高致病性禽流感、西尼羅病毒感染等疾病的傳染性極強，往往造成世界性大流行，因此對病原體的檢測必須做到快速、准確。常規病原學檢測方法操作繁瑣，檢測周期長，而且對操作人員技術水平要求比較高。隨著醫學微生物學研究技術的不斷發展，病原學診斷已不再局限於病原體水平，深入到分子水平、基因水平的檢測手段不斷出現並被應用於臨床和實驗室 J。核酸分子雜交技術、PCR技術、基因晶元技術等檢測方法，自動化程度高，快速省時、無污染、結果精確，可以准確靈敏地鑒定病原微生物。1 傳統的病原微生物的檢測方法傳統的病原微生物學實驗室檢查以染色、培養、生化鑒定等為主，將標本直接塗片染色鏡檢和接種在培養基上進行分離培養是對細菌或真菌感染性疾病進行病原學診斷的常用方法。1．1 直接塗片鏡檢病原微生物體形體積微小，大多無色半透明狀，將其染色後可藉助顯微鏡觀察其大小、形態、排列等。直接塗片染色鏡檢簡便快速，對那些具有特殊形態的病原微生物感染仍然適用，例如淋球菌感染、結核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接塗片鏡檢不需要特殊的儀器和設備，在基層實驗室里仍然是十分重要的病原微生物檢測手段。1．2 分離培養與生化反應 分離培養主要用於臨床標本(如血液、痰、糞便等)或培養物中有多種細菌時對某一種細菌的分離。細菌的生長繁殖需要一定時間，檢測周期較長，不能同時處理批量樣本。為解決這一問題，各種自動化培養和鑒定系統不斷產生，傳統鑒定方法也在逐步改進，大大加快了檢驗速度。例如Microscan WalLCAway全自動微生物分析儀，可同時做細菌鑒定和葯敏試驗，檢驗500多個菌種。苛養菌如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對營養要求比較高，常規培養陽性率低。雍剛 等將不要同比例的葡萄糖、玉米澱粉、生長因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌劑加入到巧克力培養基中製成了新型淋病奈瑟菌培養基，大大提高了淋病奈瑟菌的分離培養率。蘇盛通等在營養瓊脂中加人了中葯紅棗、赤小豆培養甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎鏈球菌等細菌，生長指數明顯高於血平板。1．3 組織細胞培養 活組織細胞培養適於專營活組織細胞內生存的病原體，包括病毒、立克次體、衣原體等。不同病原體敏感的組織細胞是不一樣的，將活細胞從病原體敏感的動物組織中取出在體外進行原代培養或用病原體敏感細胞系進行傳代培養，再將病原體接種於相應的組織細胞中後，病原體可在其中繁殖增長，引起特異性的細胞病變效應。也可以將病原體直接接種於敏感動物體內，引起相應組織器官出現特異的病理學改變。往往可以根據這些特異的病變對病原體進行鑒定。2 血清學與免疫學檢測血清學檢測是通過已知的抗體或抗原來檢測病原體的抗原或抗體從而對病原體進行快速鑒定的技術，簡化了鑒定步驟，常用的方法包括血清凝集技術、乳膠凝集實驗、熒光抗體檢測技術、協同凝集試驗、酶聯免疫測試技術等。酶聯免疫技術的應用大大提高了血清學檢測的敏感性和特異性，不僅可檢測樣本中病原體抗原，也可檢測機體的抗體成分。幽門螺奸菌在我國人群感染率高達50％ ～80％ ，應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測唾液中抗HP抗體來診斷HP感染，其結果滿意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國人群中感染率極高，ELISA應用於乙型肝炎病人早期血清學診斷的效果最為明顯。臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何從這些細菌中分離出目標菌是關鍵。免疫磁珠分離技術(IMBS)是近年來發展起來的在微生物檢測領域中一種新技術。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯到磁珠微球上，通過抗原抗體反應形成磁珠一目標病原體復合物或磁珠一一抗一目標病原體復合物，在外部磁場磁力的作用下，將目標病原體分離出來。目前已經開發出了針對各種病原體的免疫磁珠，如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團菌等，廣泛應用到各級科研和實驗室 。經IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測，檢測時間縮短至4 h。IM—Bs還可以和其它檢測技術聯合來檢測病原菌，免疫磁珠分離得到的目標菌可繼續用於分離培養使大腸埃希菌0157最低檢測限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS結合聚合酶鏈反應(IMBS—PCR)可對培養條件比較特殊的細菌如苛養菌、厭氧菌進行快速檢測，肉類中的產毒素型產氣莢膜梭菌經IMBS．PC

『貳』 微生物檢測應注意什麼事項

1、工作室要矮小平整、光滑、無凹凸不平或稜角、四壁及屋頂用不透水之材質，便於擦洗及殺菌。

2、室內採光面積應大，從室外應能看到室內的情況。

3、為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設緩沖走廊，走廊旁再設緩沖間，其面積可小於無菌室。

4、無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設有日光燈及紫外燈，殺菌紫外燈離工作台以一米為宜，其電源開關應設在室外。

5、無菌室與緩沖間進出口應設推拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門要錯開，以免空氣對流造成污染。

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『叄』 簡述細菌性疾病微生物學檢查的主要程序及方法

能夠在得病生物體內提取出病原微生物。病原微生物能夠引發其他目美麗病。目美麗病後症狀與感染源生物症狀相同。在目標體內仍能夠提取出相同病原微生物。

標本的採集非常重要。細菌感染通常是通過培養的方法檢測的，而病毒通常是通過抗原或者核酸來檢測的。細菌培養和鑒定，以及葯敏試驗，是合理使用抗菌葯物的前提，好的標本決定一切，這是檢驗領域的一句俗話。

不恰當的標本、不恰當的採集時間、不規范的採集方法，可能造成假陰性，假陽性，雜菌污染等，延誤診斷，危及生命。對於嚴重感染，需要確定病原菌的，標本應該選擇細菌可能定植的部位，如深部痰液，胸水，血液等，標本提取的時間應該在抗菌葯物使用前，最好在發生寒戰的時候。

(3)體表微生物檢查如何操作擴展閱讀：

菌落總數是指在一定條件下（如需氧情況、營養條件、p H、培養溫度和時間等）每克（每毫升）樣品生長出來的細菌菌落數量。國內外普遍採用此需氧平板計數法（APC）。國外用於食品、化妝品中微生物計數的螺旋平板計數法（SPC）也需（48±3）h。

這2種方法均為傳統的培養方法，操作繁瑣，費時費力。近年來，國內外技術人員研究開發了快速測試片技術、生物電化學技術、微菌落技術、發射測量法、微熱量技術、ATP 生物發光技術、色譜法等快速檢測方法，縮短了檢測時間，簡化了檢測程序。

『肆』 微生物計數方法有哪些我想知道詳細的操作步驟

微生物的顯微直接計數法

一、實驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法，掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多，通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板，一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤（Petrof Hausser）細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同，只是細菌計數板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特製的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數區（圖21-1），計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數區分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數區都由400個小方格組成。
計數區邊長為1mm，則計數區的面積為l mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後，計數區的高度為0.1mm，所以每個計數區的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。
使用血球計數板計數時，先要測定每個小方格中微生物的數量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數量。
已知：1mm3體積=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以：1mm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/4000mm3=4×106個小方格，即系數K=4×106 。
因此：每ml菌懸液中含有細胞數= 每個小格中細胞平均數（N）×系數（K）×菌液稀釋倍數（d）
三、實驗器材
1．活材料：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培養液。
2．器材：顯微鏡、血球計數板、蓋玻片（22mm×22mm）、吸水紙、計數器、滴管、擦鏡紙。
四、實驗方法
1．視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋到10-2），以每小格的菌數可數為度。
2．取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3．將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區，勿使氣泡產生，並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上，不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片後，造成計數區深度的升高。然後加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。4．靜置片刻，將血球計數板置載物台上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區後，再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。
5．計數時若計數區是由16個大方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數。如果是25個大方格組成的計數區，除數上述四個大方格外，還需數中央l個大方格的菌數（即80個小格）。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。
6．對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2—3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），求出每一個小格中細胞平均數（N），按公式計算出每ml（g）菌懸液所含酵母菌細胞數量。
7．測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾，放入盒內保存。
五、實驗作業：
將實驗結果填入下表中：
計數次數 每個大方格菌數 稀 釋
倍 數 試管斜面中的總菌數 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次

『伍』 院感物表采樣後，微生物室怎麼操作

物體表面的菌落總數樣本，一般是採集在10ml生理鹽水管中的。
在微生物室操作時，首先用力振搖試管進行混勻，然後無菌操作取1ml接種於無菌平皿內，傾入滅菌完畢並冷卻至45攝氏度左右的營養瓊脂，每個稀釋度做兩塊平皿，待瓊脂冷卻凝固後翻轉平板進行培養。

『陸』 微生物檢驗技術考試的基本操作知識有哪些

微生物檢驗技術操作的最基本的要求就是無菌二字。說起來簡單，做起來難，操作過程中稍微不注意，染上了雜菌，實驗結果就作廢。
無菌操作技術主要包括兩方面：
1）創造無菌的培養環境。包括提供密閉的培養容器、培養容器的滅菌、培養基的滅菌等；
2）在操作和培養過程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外線殺菌、甲醛熏蒸、超凈台的消毒與檢測、操作工具、器皿滅菌、操作方法等。
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『柒』 潔凈區人員體表微生物檢查要求

1.保持手、指甲、臉部的清潔衛生。人員衛生極其重要。

2.進入潔凈室前必須清洗眼鏡並加以消毒。可是眼鏡的例行清洗很容易被忘記。

3.精心挑選設計精良的服裝系統。潔凈生產用服裝系統是由不同部分組成的。這樣的服裝系統必須完整，並以正確的方式穿著，以保證其整體的防護性能。

4.應盡量保持部件與工具潔凈。

5.禁止吸煙或使用鼻煙。與不吸煙者相比，吸煙者或使用鼻煙者會向空氣中多釋放出幾百萬個粒子。

6.在潔凈室內不得梳頭，甚至不能碰頭發。

7.在潔凈室內一般不允許使用化妝品。所有化妝品都有粒子輕輕附著在皮膚上。如果說話、咳嗽、打噴嚏、觸摸一件物品(比如觸摸面罩)，這些粒子就會從皮膚上掉落下來，而有成為污染物的危險。

8.禁止使用指甲油。指甲油一般比指甲硬，所以過一段時間後，指甲油會出現裂痕。塵埃與微生物就可藏身其中，並到處傳播。

9.潔凈室內禁使用首飾及手錶。因為它們難於清洗，並可能成為感染源或者是污染源。

10.工作只能在潔凈的表面上進行。

11.不能把潔凈服提來提去，人員不能觸摸或翻動潔凈服。否則手或者手套污染潔凈服的危險會很大。即使搬動潔凈服，也會使服裝內收信到的粒子散播到周圍的環境中。

12.要避免一切不必要的活動。增加身體的活動會增加體表散發的粒子。人員不必要的活動會使周圍空氣形成渦流。建議以慢動作進行生產活動。

13.潔凈室內禁止吃喝，禁止咀嚼口香糖或糖果。

『捌』 微生物學的檢查方法是有哪些

微生物學檢查法

標本

因鼠疫傳染性極強，採集標本時必須嚴格無菌操作。根據病型採取淋巴結穿刺液、腫脹部位組織液、膿汁，血液和痰等。人和動物屍體可取肝、脾、肺、病變淋巴結以及心血等。陳舊屍體取骨髓。將採集標本送至有嚴密防護措施的專門實驗室進行檢查，禁止在一般實驗室進行操作。

直接塗片鏡檢

除血液標本外，一般均需塗片或印片，乾燥後用甲醇固定，革蘭染色或呂氏美蘭染色，鏡檢。在不同材料中，菌體大小、形態有很大差異，除典型形態外，往往可見菌體呈多形態性，需加以注意。

分離培養與鑒定

血液標本需先置肉湯中進行增菌培養。分離培養一般選用血瓊脂平板，28攝氏度24小時後，可見較小的露滴狀菌落，繼續培養則菌落增大至1～2毫米，中央厚而緻密，周邊逐漸變薄。取可疑菌落進行塗片染色鏡檢，噬菌體裂解試驗，血清凝集試驗，特異熒光抗體染色等作出鑒訂。

血清學試驗

可用於檢查鼠疫耶爾森菌抗原或特異性抗體。敏感而特異的試驗方法有ELISA、固相放射免疫分析，SPA協同凝集試驗等。

檢測核酸

用DNA探針雜交方法或PCR技術檢測鼠疫耶爾森菌核酸，有助於鼠疫的診斷。PCR敏感性極高，蚤體內有10個鼠疫耶爾森菌感染即可用PCR技術檢出。

診斷檢查

診斷：取決於病人有接觸史及肺部受累表現，病因診斷取決於痰、血或淋巴結吸出物革蘭染色、培養，有條件的單位可作直接熒光素標記抗體染色，可提供快速的病因診斷。