微生物如何培養菌數會高

① 污水處理微生物菌種如何培養

1、甘度復合菌種：降解COD/BOD/氨氮/總氮/總磷等污染物；助力新老系統快速啟動。

復合菌種主要是降解COD/BOD/氨氮/總氮/總磷等污染物，復合菌種是一個復合型菌種，屬於兼性菌種，主要成分硝化細菌屬、反硝化細菌屬、芽孢桿菌屬、假單胞菌屬和活化酶以及多糖等等。同時應用於新老系統啟動也具有非常好的效果。

2、 甘度硝化細菌：主要降解氨氮

氨氮的去除所用的細菌是硝化細菌，硝化細菌屬於好氧菌種，主要應用於好氧池，其成分主要是亞硝酸菌和硝酸菌組成。

3、 甘度反硝化細菌：主要降解總氮

總氮的去除所用的細菌是反硝化細菌，屬於厭氧菌，主要應用於厭氧池或缺氧池，其主要成分是假單胞菌屬、芽孢桿菌科等等。­­­

硝化階段

硝化階段：含氮有機物（有機氮）在有氧貨無氧環境中被氨化為氨氮，改部分污水進入有氧的處理構築物後，在亞硝酸細菌和硝化菌的做一下轉化為硝酸鹽氮，為後續反硝化提供准備。

控制條件：

1、溶解氧：溶解氧控制在2~3mg/l之間，溶解氧低於0.6mg/l硝化過程將受到較大抑制，

2、水溫：硝化菌比較合適的水溫25~35℃之間。通常低於5℃時，細菌的活性會受到抑制，硝化菌就很難發揮它的作用。

3、PH值：硝化菌選擇在的PH值7.5~8.5之間

4、底物濃度：硝化細菌是自養型好氧菌，底物濃度對於硝化菌不是其生產的必要因素。

5、污泥齡：需要保證好氧系統的微生物有足夠的硝化菌，提供硝化菌的濃度，通常將污泥齡控制在10d左右。

反硝化階段

反硝化階段：承接硝化段的產物硝酸鹽氮，對其進行反硝化反應，使硝酸鹽氮轉化為氮氣排出水體。

PH值：反硝化過程合適的PH值6.5~7.5，PH值控制不當，將影響反硝化細菌的生長速率及反硝化酶的活性。

水溫：反硝化菌和硝化菌對水溫的要求基本相同，反硝化菌耐受高水溫較硝化菌強，一般在20~40℃。

底物濃度：底物濃度對於反硝化的進行至關重要，BOD5/RKN>4.0，否則需要補充底物（投加碳源）。

溶解氧：反硝化進行需要嚴格控制溶解氧，一般控制在DO>0.5mg/l,反硝化菌屬於兼性菌，有氧和無語條件下皆可生存，我們需要利用的是反硝化菌無氧代謝。

培菌方法：

1、所謂活性污泥培養，就是為活性污泥的微生物提供一定的生長繁殖條件，即營養物，溶解氧，適宜溫度和酸鹼度。

（1）營養物：即水中碳、氮、磷之比應保持100∶5∶1。

（2）溶解氧：就好氧微生物而言，環境溶解氧大於0.3mg/l，正常代謝活動已經足夠。但因污泥以絮體形式存在於曝氣池中，以直徑500µm活性污泥絮粒而言，周圍溶解氧濃度2mg/l時，絮粒已低於0.1mg/l，好氧菌生長緩慢，所以曝氣池溶解氧濃度常需高於3－5mg/l，常按5－10mg/l控制。調試一般認為，曝氣池出口處溶解氧控制在2mg/l較為適宜。

（3）溫度：任何一種細菌都有一個適生長溫度，隨溫度上升，細菌生長加速，但有一個低和高生長溫度范圍，一般為10－45ºC，適宜溫度為15－35ºC，此范圍內溫度變化對運行影響不大。

（4）酸鹼度：一般PH為6－9。特殊時，進水高可為PH 9－10.5，超過上述規定值時，應加酸鹼調節。

培菌法：

（1）生活污水培菌法：在溫暖季節，先使曝氣池充滿生活污水，悶曝（即曝氣而不進污水）數十小時後，即可開始進水。引進水量由小到大逐漸調節，連續運行數天即可見活性污泥出現，並逐漸增多。為加快培養進程，在培菌初期投加一些濃質糞便水或米泔水等，以提高營養物濃度。特別注意，培菌時期（尤其初期）由於污泥尚未大量形成，污泥濃度低，故應控制曝氣量，應大大低於正常期曝氣量。

（2）干泥接種培菌法：取水質相同已正常運行的污水系統脫水後的干污泥作菌種源進行接種培養。一般按曝氣池總溶積1％的干泥量，加適量水搗碎，然後再加適量工業廢水和濃糞便水。按上述的方法培菌，污泥即可很快形成並增加至所需濃度

（3）數級擴大培菌法：根據微生物生長繁殖快的特點，仿照發酵工業中菌種→種子罐→發酵罐數級擴大培菌工藝，分級擴大培菌。如某工程設計為三級曝氣池，此時可先在一個池中培菌，在少量接種條件下，在一個曝氣池內培菌，成功後直接擴大至二三級。

（4）工業廢水直接培菌法：某些工業廢水，如罐頭食品、豆製品、肉類加工廢水，可直接培菌；另一類工業廢水，營養成分尚全，但濃度不夠，需補充營養物，以加快培養進程。所加營養物品常有：澱粉漿料、食堂米泔水、面湯水（碳源）；或尿素、硫氨、氨水（氮源）等，具體情況應按不同水質而定。

（5）有毒或難降解工業廢水培菌：有毒或難降解工業廢水，只能先以生活污水培菌，然後再將工業廢水逐步引入，逐步馴化的方式進行。

② 微生物的培養方法

1．平板劃線分離培養法

對混有多種細菌，採用劃線分離和培養，使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個菌落，以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法：

①分區劃線分離法：此法常用於含菌量較多的細菌的分離。先用接種環挑取標本塗布於瓊脂平板1區（占培養基總面積的¼）並作數條劃線，再於2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域，均將接種環燒灼滅菌1次，冷後再劃下一區域，每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板，培養後分別觀察1區形成菌苔，2區菌落連成線，3區和4區可分離到單個菌落。

②連續劃線分離法：此法常用於含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕塗抹，然後再用接種環或拭子在平板表面曲線連續劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表面。

2.瓊脂斜面接種法

主要用於菌落的移種，以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環（針）挑取單個菌落或培養物，從培養基斜面底部向上劃一條直線，然後再從底部沿直線向上曲折連續劃線，直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養基斜面接種，用接種針挑取待鑒定細菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部，抽出後在斜面上由下至上曲折劃線接種。

3．穿刺接種法

此法多用於半固體培養基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養基接種，半固體培養基的穿刺接種可用於觀察細菌的動力。接種時用接種針挑取菌落，由培養基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養基，穿刺高層部分，退出接種針後直接劃線接種斜面部分。

4．液體培養基接種法

用於各種液體培養基如肉湯、蛋白腖水、糖發酵管等的接種。用接種環挑取單個菌落，傾斜液體培養管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立後液體淹沒接種物為准）。此接種法應避免接種環與液體過多接觸，更不應在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實驗室污染。

5．傾注平板法

本法主要用於飲水、飲料、牛乳等標本中的細菌計數。取純培養物的稀釋或原標本1ml至無菌培養皿內，再將已融化並冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養基15~20ml傾注入該無菌培養皿內，混勻，待凝固後置37℃培養，長出菌落後進行菌落計數，以求出每毫升標本中所含菌數。先數6個方格（每格為1cm2）中菌落數，求出每格的平均菌落數，並算出平皿直徑，然後按下列公式計數，求出每毫升標本中的細菌數。

全平板菌落數=每方格的平均菌落數×лr2

每ml標本中的細菌數=全平板菌落數×稀釋倍數

6．塗布接種法

本法多用於紙片擴散法葯敏試驗的細菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養基表面，然後用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子於不同的角度反復塗布，使被接種液均勻分布於瓊脂表面，然後貼上葯敏紙片，或直接培養，本法經培養後細菌形成菌苔。

③ 微生物培養需要什麼條件

微生物的實驗室培養：
營養構成：
各種培養基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。
無菌技術：
(1)關鍵：防止外來雜菌的入侵。
(2)具體操作
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。
②將用於微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌。
③為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。
④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。
(3)消毒和滅菌
制備牛肉膏蛋白腖固體培養基的方法：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。
接種方法：
平板劃線法和稀釋塗布法。
（1）平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。
②劃A區：將平板倒置於煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底並盡量使平板垂直於桌面，有培養基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環先在A區劃3—4條連續的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區後應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響後面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底並將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內)，以防止雜菌的污染。
③劃其他區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉到上方，接種環通過A區（菌源區）將菌帶到B區，隨即劃數條緻密的平行線。再從B區作C區的劃線。最後經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。
④等平板凝固後，將平板倒置。
（2）稀釋塗布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。能夠測定樣品中活菌數的方法是：稀釋塗布平板法。

④ 微生物培養需要什麼條件為什麼

微生物的生長和繁殖需要條件有：

1、適宜的營養條件(充足的碳源、氮源)。

2、適宜的氧含量(好氧的要震盪培養，厭氧的要厭氧培養，兼性的可以靜止培養)。

3、合適的pH值(一般指培養基的pH值)。

4、合適的環境溫度(細菌37度，真菌28度)。

5、合適的接種量(一般接種量是1%)。

6、只用專業的中海生物微生物培養基

(4)微生物如何培養菌數會高擴展閱讀：

微生物的主要特徵

1、體小面大

一個體積恆定的物體，被切割的越小，其相對表面積越大。微生物體積很小，如一個典型的球菌，其體積約1mm，可是其表面積卻很大。這個特徵也是賦予微生物其他如代謝快等特性的基礎。

2、吸多轉快

微生物通常具有極其高效的生物化學轉化能力。據研究，乳糖菌在1個小時之內能夠分解其自身重量1000-10000倍的乳糖，產朊假絲酵母菌的蛋白合成能力是大豆蛋白合成能力的100倍。

3、生長繁殖快

相比於大型動物，微生物具有極高的生長繁殖速度。大腸桿菌能夠在12.5-20分鍾內繁殖1次。不妨計算一下，1個大腸桿菌假設20分鍾分裂1次，1小時3次，1晝夜24小時分裂24×3=72次，大概可產生4722366500萬億個（2的72次方），這是非常巨大的數字。

但事實上，由於各種條件的限制，如營養缺失、競爭加劇、生存環境惡化等原因，微生物無法完全達到這種指數級增長。 已知大多數微生物生長的最佳pH范圍為7.0 (6.6~7.5)附近，部分則低於4.0。

微生物的這一特性使其在工業上有廣泛的應用，如發酵、單細胞蛋白等。微生物是人類不可或缺的好朋友。

⑤ 微生物培養方法

微生物培養法是在人為條件下繁殖微生物的方法。根據微生物的種類以及對養料、溫度、氧氣、水分、酸鹼度等環境條件的要求不同，並聯系生產和實驗上的具體要求，可有不同的培養方法。可分好氣培養法和厭氣培養法兩類。中海生物技術的培養基一是好氣微生物培養法，常用：①搖床培養法，即將微生物接種於盛有液體培養基的三角瓶後，放在恆溫培養室中的搖床上作有節奏的振盪，使空氣不斷進入培養液中，促其良好生長;②淺盤培養法，又稱表面培養法，在盤內放一淺層培養基，使微生物能夠充分接觸空氣，而有利於生長繁殖，但此法所需空間大，並且容易污染雜菌;③深層培養法，適用於好氣微生物的大規模發酵培養，在大容積的液體培養基中，通入無菌空氣，並不斷攪拌，可使微生物充分接觸空氣，迅速繁殖並積累代謝產物。二是厭氣微生物培養法，實驗室常用化學還原劑或抽氣機吸除培養基中的分子氧，也有用靜止狀態的深層培養法。在生產中常用密封式發酵罐或不通風的固體發酵法。

⑥ 從育種方面如何獲得高產菌株

菌株分離（separation）就是將一個混雜著各種微生物的樣品通過分離技術區分開，並按照實際要求和菌株的特性採取迅速、准確、有效的方法對他們進行分離、篩選，進而得到所需微生物的過程。菌株分離、篩選（screening）雖為兩個環節，但卻不能絕然分開，因為分離中的一些措施本身就具有篩選作用。工業微生物產生菌的篩選一般包括兩大部分：一是從自然界分離所需要的菌株，二是把分離到的野生型菌株進一步純化並進行代謝產物鑒別。
在實驗工作中，為使篩選達到事半功倍的效果，總的說來可從以下幾個途徑進行收集和篩選：
（1）向菌種保藏機構索取有關的菌株，從中篩選所需菌株。
（2）由自然界採集樣品，如土壤、水、動植物體等，從中進行分離篩選。
（3）從一些發酵製品中分離目的菌株，如從醬油中分離蛋白酶產生菌，從酒醪中分離澱粉酶或糖化酶的產生菌等。該類發酵製品經過長期的自然選擇，具有悠久的歷史，從這些傳統產品中容易篩選到理想的菌株。
菌株的分離和篩選一般可分為采樣、富集、分離、產物鑒別幾個步驟。
第一節 含微生物樣品的採集
自然界含菌樣品極其豐富，土壤、水、空氣、枯枝爛葉、植物病株、爛水果等都含有眾多微生物，種類數量十分可觀。但總體來講土壤樣品的含菌量最多。
一、從土壤中采樣
土壤由於具備了微生物所需的營養、空氣和水分，是微生物最集中的地方。從土壤中幾乎可以分離到任何所需的菌株，空氣、水中的微生物也都來源於土壤，所以土壤樣品往往是首選的採集目標。一般情況下，土壤中含細菌數量最多，且每克土壤的含菌量大體有如下的遞減規律：細菌（108）>放線菌（107）>黴菌（106）>酵母菌（105）>藻類（104）>原生動物（103），其中放線菌和黴菌指其孢子數。但各種微生物由於生理特性不同，在土壤中的分布也隨著地理條件、養分、水分、土質、季節而有很大的變化。因此，在分離菌株前要根據分離篩選的目的，到相應的環境和地區去採集樣品。
（一）根據土壤特點
1．土壤有機質含量和通氣狀況
一般耕作土、菜園土和近郊土壤中有機質含量豐富，營養充足，且土壤成團粒結構，通氣飽水性能好，因而，微生物生長旺盛，數量多，尤其適合於細菌、放線菌生長。山坡上的森林土，植被厚，枯枝落葉多，有機質豐富，且陰暗潮濕，適合黴菌、酵母菌生長繁殖，微生物數量相應也比較少。
從土層的縱剖面看，1～5cm的表層土由於陽光照射，蒸發量大，水分少，且有紫外線的殺菌作用，因而微生物數量比5～25cm土層少；25cm以下土層則因土質緊密，空氣量不足，養分與水分缺乏，含菌量也逐步減少。因此，采土樣最好的土層是5～25cm。一般每克土中含菌數約幾十萬到幾十億個，並且各種類型的細菌和放線菌幾乎都能分離到。如好氣芽孢桿菌、假單胞菌、短桿菌、大腸桿菌、某些嫌氣菌等。但總的說來酵母菌分布土層最淺，約5～10cm，黴菌和好氧芽孢桿菌也分布在淺土層。
2.土壤酸鹼度和植被狀況
土壤酸鹼度會影響微生物種類的分布。偏鹼的土壤（pH7.0～7.5）環境，適合於細菌、放線菌生長。反之在偏酸的土壤（pH7.0以下）環境下，黴菌、酵母菌生長旺盛。由於植物根部的分泌物有所不同，因此，植被對微生物分布也有一定的影響。如番茄地或腐爛番茄堆積處有較多維生素C生產菌。葡萄或其他果樹在果實成熟時，其根部附近土壤中酵母菌數量增多。豆科植物的植被下，根瘤菌數量比其他植被下占優勢。
3．地理條件
南方土壤比北方土壤中的微生物數量和種類都要多，特別是熱帶和亞熱帶地區的土壤。許多工業微生物菌種，如抗生素產生菌，尤其是黴菌、酵母菌，大多從南方土壤中篩選出來。原因是南方溫度高，溫暖季節長，雨水多，相對濕度高，植物種類多，植被覆蓋面大，土壤有機質豐富，造成得天獨厚的微生物生長環境。
4．季節條件
不同季節微生物數量有明顯的變化，冬季溫度低，氣候乾燥，微生物生長緩慢，數量最少。到了春天隨著氣溫的升高，微生物生長旺盛，數量逐漸增加。但就南方來說，春季往往雨水多，土壤含水量高，通氣不良，即使有微生物所需的溫度、濕度，也不利於其生長繁殖。隨後經過夏季到秋季，約有7～10個月處在較高的溫度和豐富的植被下，土壤中微生物數量比任何時候都多，因此，秋季采土樣最為理想。
（二）采樣方法
用取樣鏟，將表層5cm左右的浮土除去，取5～25處的土樣10～25，裝入事先准備好的塑料袋內紮好。北方土壤乾燥，可在10～30處取樣。給塑料袋編號並記錄地點、土壤質地、植被名稱、時間及其他環境條件。一般樣品取回後應馬上分離，以免微生物死亡。但有時樣品較多，或到外地取樣，路途遙遠，難以做到及時分離，則可事先用選擇性培養基做好試管斜面，隨身帶走。到一處將取好的土樣混勻，取3～4撒到試管斜面上，這樣可避免菌株因不能及時分離而死亡。
二．根據微生物生理特點采樣
1.根據微生物營養類型
每種微生物對碳\氮源的需求不一樣,分布也有差異。研究表明，微生物的營養需求和代謝類型與其生長環境有著很大的相關性。如森林土有相當多枯枝落葉和腐爛的木頭等，富含纖維素，適合利用纖維素作碳源的纖維素酶產生菌生長；在肉類加工廠附近和飯店排水溝的污水、污泥中，由於有大量腐肉、豆類、脂肪類存在，因而，在此處采樣能分離到蛋白酶和脂肪酶的產生菌；在麵粉加工廠、糕點廠、酒廠及澱粉加工廠等場所，容易分離到產生蛋白酶、糖化酶的菌株。若要篩選以糖質為原料的酵母菌，通常到蜂蜜、蜜餞、甜果及含糖濃度高的植物汁液中采樣。在篩選果膠酶產生菌時，由於柑橘、草莓及山芋等果蔬中含有較多的果膠，因此，從上述樣品的腐爛部分及果園土中采樣較好。若需要篩選代謝合成某種化合物的微生物，從大量使用、生產或處理這種化合物的工廠附近採集樣品，容易得到滿意的結果。在油田附近的土壤中就容易篩選到利用碳氫化合物為碳源的菌株。Hartman等人曾從乙烯氯化物的工廠附近分離到一株以乙烯氯化物為碳源和能源的分枝桿菌。含1%乙烯氯化物的空氣通過該菌培養可除去93%的毒性。也有人從含油污泥中篩選出能以20#機械潤滑油為惟一碳源的3株石油降解菌菌株，分別為動膠菌屬（Zoogloea sp.）、氮單胞菌屬（Azomonas sp.）和假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）。當然，也可將一種需要降解的物質作為樣品中微生物的惟一碳源或氮源進行富集，然後分離篩選。
此外，不少微生物對碳源的利用是不完全專一的，如以油脂為碳源的某些脂肪酶產生菌同樣也可以分解澱粉或其他糖類物質獲得能源而生長。以石油等碳氫化合物為碳源的油田微生物，也可以利用一些糖類為碳源。具有以上特性的微生物在一般土壤、水、及其他樣品中也會存在。不過數量較少。
2.根據微生物的生理特性
在篩選一些具有特殊性質的微生物時，需根據該微生物獨特的生理特性到相應的地點采樣。如篩選高溫酶產生菌時，通常到溫度較高的南方，或溫泉、火山爆發處及北方的堆肥中採集樣品；分離低溫酶產生菌時可到寒冷的地方，如南北極地區、冰窖、深海中采樣；分離耐壓菌則通常到海洋底部采樣。因為深海中生活的微生物能耐很高的靜水壓，如從海中篩到一株水活微球菌（Micrococcus aquivivus）,它能在600個大氣壓下生長。分離耐高滲透壓酵母菌時，由於其偏愛糖分高、酸性的環境，一般在土壤中分布很少，因此，通常到甜果、蜜餞或甘蔗渣堆積處采樣。如有人曾在花蜜中分離到一株能耐30%高糖的耐高滲透壓的酵母菌。
三、特殊環境下采樣
1．局部環境條件的影響
值得注意的是微生物的分布除了本身的生理特性和環境條件綜合因素的影響之外，還要受局部環境條件的影響。如北方氣候寒冷，年平均溫度低，高溫微生物相對較少。但在該地區的溫泉或堆肥中，卻會出現為數眾多的高溫微生物。氧氣充足的土層中按理只適合於好氧菌生長，實際上也有一些嫌氣菌生活，原因是好氣菌生長繁殖消耗了土層中大量氧氣，為嫌氣菌創造了局部生長的有利環境，故一般土壤中也能分離到嫌氣菌。
海洋對於微生物來說是一個特殊的局部環境，盡管許多微生物也是經河水、污水、雨水或塵埃等途徑而來，但由於海洋獨特的高鹽度、高壓力、低溫及光照條件，使海洋微生物具備特殊的生理活性，相應也產生了一些不同於陸地來源的特殊產物。前蘇聯學者發現，20%～50%的海鞘、海參體內的微生物可產生具有細菌毒性和殺菌活性的化合物。此外，美國馬里蘭大學也曾從海綿體內的共生或共棲的細菌中分離到抗白血病、鼻咽癌的抗癌物質。日本發現深海魚類腸道內的嗜壓古細菌，80%以上的菌株可以生產EPA 和DHA，最高產量可達36%和24%。筆者從鱈魚腸道中分離到一株pj20細菌，產EPA14.78mg/L，在15℃培養時EPA占脂肪酸的12.7%。日本也從海洋Thraustochvtrium aureum中篩選到一株產DNA達290mg/L的菌株。從海洋中采樣時，可參考其中不同種類微生物的分布規律：表層多為好氣異養菌，底層由於有機質豐富，硫化氫含量高，厭氣性腐敗菌和硫酸鹽還原菌較多，兩層中則多為紫硫菌。
具有特殊性質的微生物通常分布在一些特殊的環境中。如得克薩斯州中南部的一個岩洞中存在著大量嗜鹼性的，能進行氨氧化和產幾丁質酶的微生物，其原因是這里生活這2000萬只蝙蝠，它們每晚吃釣5萬lb（磅）昆蟲，其排泄物造成了洞內0m深的豐富營養層，這種特殊的環境對該種微生物起了選擇和富集的作用。還有人從侵蝕木船的一種蠕蟲腸道中分離到既能固氮又能降解纖維素的微生物。從考拉(Koala)熊腸中也曾分離到萜烯分解酶的產生菌，這可能因為考拉專吃含有高萜烯的桉樹類植物，給該種微生物創造了一個適宜的生長環境。美國從用硝酸處理過的花生殼中分離到一株節桿菌，該菌以木質素為唯一碳源，它對處理過的花生殼的消化率可達到63%，再加入釀酒酵母使其蛋白質含量達到13.6%，可作為牛、豬、雞飼料的添加劑。
2．極端環境條件的影響
微生物一般在中溫、中性pH條件下生長。但在絕大多數微生物所不能生長的高溫、低溫、高酸、高鹼、高鹽或高輻射強度的環境下，也有少數微生物存在，這類微生物被稱為極端微生物。生活所處的特殊環境，導致它們具有不同與一般微生物的遺傳特性、特殊結構和生理機能，因而在冶金、采礦及生產特殊酶制劑方面有著巨大的應用價值。
嗜冷菌（thermophiles）的最適生長溫度為15℃，在0℃也可生長繁殖，最高溫度不超過20℃。主要分布於寒冷的環境中，如南北兩極地區、冰窟、高山、深海和土壤等低溫環境中。這類微生物在低溫發酵時可生產許多風味食品且可節約能源及減少中溫菌的污染。最適生長pH在8.0以上，通常在pH9～10之間的微生物，稱之為嗜鹼菌（alkaliphiles）。大量不同類型的嗜鹼菌已經從土壤、鹼湖、鹼性泉甚至海洋中分離得到。由於大部分鹼湖伴有高鹽，許多嗜鹼菌同時也是嗜鹽菌。該類菌所產生的酶如耐鹼蛋白酶和鹼性纖維素酶可作為洗滌劑的舔加成分，也可將鹼性澱粉酶用於紡織品工業。嗜鹼菌中的基因還可以用來調節其他細菌中基因產物的表達和分泌。嗜熱微生物是嗜熱菌最好的來源。有人從溫泉和海底火山口分離出了極端嗜熱菌。從義大利境內的噴硫磺氣的火山口中分離到一種原始的微生物，在pH2和90℃時生長最好，其代謝類型極不尋常，既能作為耗氧型自養菌將硫氧化成硫酸，使自己增殖，又能作為厭氧菌用氫還原硫，生成H2S

⑦ 如何培養微生物

實驗一 常用培養基的制備、滅菌與消毒
實驗二 土壤中微生物分離純化培養
實驗三 菌種保藏
實驗四 細菌形態觀察及單染色
實驗五 放線菌及黴菌形態觀察
實驗六 革蘭氏染色及芽孢染色
實驗七 酵母菌的形態觀察及死活細胞的鑒定
實驗八 微生物直接計數法及測微技術
實驗九 大腸桿菌生長曲線的測定
實驗十 水中細菌總數的測定
實驗十一細菌細胞的生化反應實驗
實驗十二噬菌體的分離、純化及效價測定

實驗一 常用培養基的制備、滅菌與消毒

一、實驗目的
了解培養基的配製原理；掌握配製培養基的一般方法和步驟；了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握乾熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。

二、實驗原理
培養基是人工按一定比例配製的供微生物生長繁殖和合成代謝產物所需要的營養物質的混合物。培養基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水。根據微生物的種類和實驗目的不同，培養基也有不同的種類和配製方法。
牛肉膏蛋白腖培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基，有時又稱為普通培養基。由於這種培養基中含有一般細胞生長繁殖所需要的最基本的營養物質，所以可供微生物生長繁殖之用。
乾熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質變性從而達到殺死微生物的效果。

三、試劑與器材
1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、吸管、培養皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等。
2.試劑 牛肉膏、蛋白腖、NaCl、瓊脂

四、實驗內容
1.稱量→溶化→調pH→過濾→分裝→加塞→包紮→滅菌→無菌檢查
2.乾熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恆溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恆壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按配方配製。
2.調pH不要過頭。
3.乾熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時間控制，70ºC以下放物、取物。
4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱後排除冷空氣，到時降壓回零取物。
5.過濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時，壓力要適當，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。

實驗二 土壤中微生物分離純化培養

一、實驗目的
掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養基和液體培養基中的生長特徵；進一步熟練和掌握微生物無菌操作技術；掌握微生物培養方法。

二、實驗原理
從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的分離、純化方法：單細胞挑取法，稀釋塗布平板法，稀釋混合平板法，平板劃線法 稀釋塗布平板法步驟：倒平板－制備土壤污水稀釋液－塗布－培養－挑菌落；平板劃線法步驟：倒平板－標記培養基名稱－劃線。
三、試劑與器材
1.器材 盛9m1無菌水的試管、盛90m1無菌水並帶有玻璃珠的三角燒瓶、無菌玻璃塗棒、無菌吸管、接種環、酒精燈、無菌培養皿、顯微鏡、血細胞計數板等。
2.試劑 牛肉膏蛋白腖培養基，高氏1號培養基，查氏培養基

四、實驗內容
1.土壤稀釋液的制備
2.微生物分離純化：稀釋塗平板法，平皿劃線分離法，微生物培養技術

五、關鍵步驟及注意事項
1.掌握含菌培養基的配製，嚴格控制溫度。
2.平板劃線應防止染菌，同時應注意劃線深度及密度。
實驗三 菌種保藏
一、實驗目的
1.學習並掌握菌種保藏的基本原理。
2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。

二、實驗原理
微生物個體微小、代謝旺盛、生長繁殖快，如果保存不妥容易發生變異和雜菌污染，甚至導致細胞死亡等現象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括傳代培養法、載體法、懸液法、冷凍法和真空乾燥法

三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌、青黴菌、放線菌
2.試劑 液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無水氯化鈣、食鹽、乾冰
3.器材 無菌吸管、無菌滴管、無菌培養皿；安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、乾燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(—30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等。

四、實驗內容
1.斜面保藏法
2.液體石蠟法
3.穿刺保藏法
4.砂土管保藏法
5.冷凍真空乾燥保存法

五、關鍵步驟及注意事項
1.清楚各種保藏方法的優缺點，針對不同要求選擇適宜的保藏方法。
2.熔封安瓶時防止封閉不嚴。
3.液氮凍存操作應防止凍傷。

實驗四 細菌形態觀察及單染色

一、實驗目的
1.了解簡單染色法的原理，並掌握其操作方法。
2.學習並掌握微生物塗片、染色的基本技術和無菌操作技術。
3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。
4.初步認識細菌的形態特徵。

二、實驗原理
細菌個體微小，且較透明，必須藉助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對比，以便在顯微鏡下進行觀察。根據實驗目的不同，可分為簡單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等。簡單染色法是最基本的染色方法，是利用單一染料對細菌進行染色。此法操作簡便，適用於菌體一般形狀和細菌排列的觀察。常用鹼性染料進行簡單染色。

三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌，枯草芽孢桿菌
2.試劑 呂氏鹼性美藍染液(或草酸銨結晶紫染液)、齊氏石炭酸復紅染液。
3.器材 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環、雙層瓶(內裝香柏油和二甲苯)等。

四、實驗內容
簡單染色法：塗片→乾燥→固定→染色→水洗→乾燥→鏡檢

五、關鍵步驟及注意事項
1.塗片時，生理鹽水及取菌不宜過多，塗片應盡可能均勻，
2.水洗步驟水流不宜過大，過急，以免塗片薄膜脫落。

實驗五 放線菌及黴菌形態觀察

一、實驗目的
1.了解放線菌、黴菌形態觀察的原理。
2.學習並掌握觀察放線菌、黴菌形態的操作方法。
3.初步了解放線菌、黴菌的形態特徵。

二、實驗原理
放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養基表面或深入培養基內生長的叫基內菌絲(簡稱「基絲」)，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲(簡稱「氣絲」)，並進一步分化產生孢子絲及孢子。有的放線菌只產生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。
黴菌可產生復合分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。黴菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態特徵是識別不同種類黴菌的重要依據。黴菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多，常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們設計了各種培養和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長狀態下的形態特徵。本實驗採用插片法。
插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片後培養，使放線菌菌絲沿著培養基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上。觀察時，輕輕取出蓋玻片，置於載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態下的特徵，而且便於觀察不同生長期的形態。

三、試劑與器材
1.材料 黑麴黴、青黴和根霉，細黃鏈黴菌或青色鏈黴菌，滅菌的高氏I號瓊脂和滅菌的查氏培養基。
2.實驗器材 經滅菌的：平皿、玻璃紙、無菌吸管、蓋玻片、玻璃塗棒，以及載玻片、接種環、接種鏟、鑷子、顯微鏡等。

四、實驗內容
倒平板→接種→插片→培養→鏡檢

五、關鍵步驟及注意事項
1.倒平板要厚一些，接種時劃線要密。
2.插片時要有一定角度並與劃線垂直。
3.觀察時，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當視野，更換高倍鏡觀察。
4.如果用0.1%美藍對培養後的蓋玻片進行染色後觀察，效果會更好。
實驗六 革蘭氏染色及芽孢染色
一、實驗目的
1.了解革蘭氏染色法和芽孢染色法的原理，並掌握其操作方法。
2.了解革蘭氏染色法在細菌分類鑒定中的重要性。
3.學習並掌握微生物塗片、染色的基本技術和無菌操作技術。
4.學習顯微鏡(油鏡)的使用方法。
5.初步認識細菌的形態特徵。

二、實驗原理
革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進行染色，再用碘液媒染，然後用乙醇(或丙酮)脫色，最後用復染劑(如番紅)復染。經此方法染色後，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；如果細胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細菌染上復染劑的顏色(紅色)，該菌屬於革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應是細菌重要的鑒別特徵，為保證染色結果的正確性，採用規范的染色方法是十分必要的。
芽孢染色法的基本原理，用著色力強的染色劑孔雀綠或石炭酸復紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進入菌體也可進入芽孢內，進入菌體的染料經水洗後被脫色，而芽孢一經著色難以被水洗脫，當用對比度大的復染劑染色後，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復染劑的顏色，使芽孢和菌體更易於區分。

三、試劑與器材
1.材料：枯草芽孢桿菌12～18h營養瓊脂斜面培養物，大腸桿菌約24h營養瓊脂斜面培養物
2.試劑 革蘭氏染色液(結晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液)。5％孔雀綠水溶液
3.實驗器材 小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無菌水、顯微鏡等、接種環、雙層瓶(內裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等。

四、實驗內容
1.革蘭氏染色法 製片→初染→媒染→脫色→復染→鏡檢。
2.Schaefer-Fulton氏染色法 製片→染色→水洗→復染→水洗→鏡檢。

五、關鍵步驟及注意事項
1.塗片時，生理鹽水及取菌不宜過多，塗片應盡可能均勻，
2.乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關鍵環節，嚴格掌握脫色時間。

實驗七 酵母菌的形態觀察及死活細胞的鑒定

一、實驗目的
1.觀察酵母菌的形態特徵、出芽生殖方式，並掌握酵母菌與細菌形態特徵的區別。
2.學習鑒別死活細胞的實驗方法。

二、實驗原理
酵母菌是單細胞的真核微生物，菌體比細菌大而且不運動。酵母菌的繁殖方式分為無性繁殖和有性繁殖兩種，以無性繁殖為主。芽殖是酵母菌普遍的無性繁殖方式，少數為裂殖；有性繁殖是產生子囊和子囊孢子。本實驗是通過美藍染液水浸片和水一碘液水浸片來觀察酵母的形態和芽殖方式。
美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母活細胞染色時，由於細胞的新陳代謝作用，細胞內具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變為無色的還原型，而對代謝作用微弱或死細胞，無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，不僅用此法可觀察酵母細胞形態，也可用來鑒別酵母菌的死細胞和活細胞。

三、試劑與器材
1.材料 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡爾酵母(Saccharomyces calsbergensis)培養2天左右的麥芽汁(或豆芽汁)液體培養物。
2.試劑 0.05％和O.1％呂氏鹼性美藍染色液、革蘭氏染色用的碘液。
3.器材 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環、灑精燈等。

四、實驗內容
1.美藍浸片觀察 酵母培養→製片→染色→鏡檢→30分鍾後再鏡檢
2.水-碘浸片觀察

五、關鍵步驟及注意事項
1.染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液溢出或出現大量氣泡。
2.用鑷子取一塊蓋玻片，先將一側與菌液接觸，然後慢慢將蓋玻片放下，使其蓋在菌液上，蓋玻片不宜平著放下，避免氣泡產生。

實驗八 微生物直接計數法及測微技術

一、實驗目的
1.了解血球計數板計數原理，並掌握計數方法。
2.掌握用測微尺測定微生物大小的方法。

二、實驗原理
顯微鏡直接計數法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計數板的計數室中，於顯微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法。因為計數板是一塊特別的載玻片。其上由四條槽構成三個平台；中間較寬的平台又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平台上各刻有一個方格網，每個方格網共分為九個大方格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(見圖2—3—44)；另一種是一個大方格分成16個中方格，每個中方格又分成25個小方格，無論哪種每個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為0．1mm，所以計數室的容積為0．1mm3。計數時，通常只用5個中格內的菌體(孢子)數即可。然後求出每個中方格的平均值，再乘上25或16，得出一個大方格中的總茵數，再換算成lml菌液中的總菌數。若設5個中方格中總菌數為N，菌液稀釋倍數為M，如果是25個中方格計數板，則計算方法為：
lml菌液中的總菌數=平均每個中格中菌的個數×25×104×M=50000N·M(個)
微生物細胞的大小是微生物基本的形態特徵，也是分類鑒定的依據之一。微生物大小的測定，需要在顯微鏡下，藉助於特殊的測量工具——測微尺，包括目鏡測微尺和鏡台測微尺。鏡台測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將1mm等分為100格，每格長0．01mm(即10pm)。鏡台測微尺並不直接用來測量細胞的大小，而是用於校正目鏡測微尺每格的相對長度。
三、試劑與器材
1.材料 釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養物。
2.實驗器材 細胞計數板、顯微鏡、蓋玻片、無菌毛細滴管、目鏡測微尺、鏡台測微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。

四、實驗內容
1.微生物直接計數法 菌懸液制備→鏡檢計數室→加樣品→顯微鏡計數→清洗血細胞計數板
2.微生物測微技術 裝目鏡測微尺→校正→菌體大小測定

五、關鍵步驟及注意事項
1.防止加樣空氣泡產生。
2.調節顯微鏡光線的強弱適當。
實驗九 大腸桿菌生長曲線的測定

一、實驗目的
1.了解大腸桿菌的生長曲線特徵和繁殖規律，並學會繪制生長曲線。
2.復習光電比濁法測量細菌數量的方法。

二、實驗原理
將一定量的細菌轉入新鮮液體培養基中，在適宜的條件下培養細胞要經歷延遲期、對數期、穩定期和衰亡期四個階段。以培養時間為橫坐標，以細菌數目的對數或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養條件下所繪制的生長曲線也不相同。

三、試劑與器材
1.材料與試劑 大腸桿菌、LB液體培養基70ml、分裝2支大試管(5ml／支)、剩餘60ml裝入250ml的三角瓶。
2.器材 722型分光光度計、恆溫振盪搖床、無菌試管、無菌吸管等。

四、實驗內容
編號→接種→培養→比濁測定

五、關鍵步驟及注意事項
1.測定OD值時，要求從低濃度到高濃度測定
2.嚴格控制培養時間

實驗十 水中細菌總數的測定

一、實驗目的
1.學習水樣的採取方法和水樣細菌總數測定的方法。
2.了解水源水的平板菌落計數的原理。

二、實驗原理
本實驗應用平板計數技術測定水中細菌總數。由於水中細菌種類繁多，它們對營養和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細菌總數僅是一種近似值。目前一般是採用普通牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基。

三、試劑與器材
1.試劑 牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基，滅菌水
2.器材 滅菌三角瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養皿，滅菌吸管，滅菌試管等。

四、實驗內容
1.水樣的採取
2.細菌總數測定
3.菌落計數方法

五、關鍵步驟及注意事項
1.注意全過程防止染菌
實驗十一 細菌細胞的生化反應實驗

一、實驗目的
了解並掌握細菌鑒定中常用生理生化反應的原理和方法。

二、實驗原理
各種細菌由於具有不同的酶系統，致使它們能利用不同的底物，或雖然可以利用相同的底物，卻產生不同的代謝產物，因此可以利用各種生理生化反應來鑒別細菌。
糖發酵是最常用的生化反應，存在於大多數細菌中。不同的細菌在糖的分解能力上存在很大的差異。有些細菌能分解某種糖並產生酸性物質(如乳酸、丙酸、醋酸等)和氣體(如二氧化碳、氫、甲烷等)，而有些細菌只產生酸不產生氣體。例如大腸桿菌分解乳糖和葡萄糖產酸並產氣，普通變形桿菌分解葡萄糖產酸產氣，但不能分解乳糖。酸的產生可利用指示劑來判斷。在培養基中加入溴甲酚紫(pH5．2為黃色，pH6．8為紫色)，當發酵產酸時，使培養基由紫色變為黃色。氣體的產生可由發酵試管中倒置的德漢氏小管中有無氣泡的出現來驗證．

三、試劑與器材
1.材料大腸桿菌、普通變性桿菌、產氣桿菌、糖發酵培養基、蛋白腖水培養基、葡萄糖蛋白腖水培養基。
2.試劑甲基紅試劑、40％KOH、5％a一萘酚、乙醚、吲哚試劑。
3.實驗器材德漢氏小管、試管、接種環、恆溫培養箱。

四、實驗內容
培養基配製→編號→試管→接種→培養→觀察結果

五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按照培養基配方配製培養基。
2.觀察結果時要注意滴加葯量及反應時間。
實驗十二 噬菌體的分離、純化及效價測定

一、實驗目的
1.學習分離、純化噬菌體的原理和方法
2.觀察噬菌斑的形態和大小
3.掌握噬菌體效價測定的基本方法

二、實驗原理
噬菌體是細菌的專性寄生物，自然界中凡是有細菌存在的地方，均可以發現其特異性的噬菌體，噬菌體侵入細菌細胞後，利用宿主細胞的酶系統進行復制和增殖，最終導致細菌細胞裂解，噬菌體從細胞中釋放出來，可以進一步侵染細菌細胞。在液體培養基中，噬菌體可以使渾濁的菌懸液變為澄清。在長有宿主細菌的固體培養基平板上，噬菌體可以裂解細菌形成透明的空斑，即噬菌斑，一個噬菌體產生一個噬菌斑，因此可以利用這個性質對噬菌體進行分離和效價的測定。
噬菌體的效價是指噬菌體的濃度，即一毫升培養液中所含有的噬菌體數量。噬菌體效價的測定方法多採用雙層瓊脂平板法。先在培養皿中倒入底層固體培養基，凝固後再倒入含有宿主細菌和一定稀釋度噬菌體的半固體培養基。培養一段時間後，計算噬菌斑的數量。

三、試劑與器材
1.材料大腸桿菌、牛肉膏蛋白腖固體培養基、牛肉膏蛋白腖半固體培養基(含有瓊脂0．5％，試管分裝，每管3～5m1)、三倍濃縮的牛肉膏蛋白腖液體培養基。
2.器材培養皿、無菌吸管、三角瓶、抽濾瓶、蔡氏細菌濾器、真空泵、陰溝污水。

四、實驗內容
噬菌體分離→噬菌體純化→效價測定

五、關鍵步驟及注意事項
1.噬菌體時要注意細菌濾器的型號。
2.純化噬菌體時要注意形態、大小。
3.效價測定時要注意雙層瓊脂平板法的使用技巧。

⑧ 如何將微生物擴大培養

分級擴大培養是為了獲得純菌株，每個菌落的細菌都是由同一個細菌分裂繁殖出來的。它們的遺傳物質基本上一樣。而不同菌落的細菌則有可能因為在平板培養之前的步驟（如質粒的重組及轉化）而導致遺傳物質有所差異。如質粒重組時對DNA有所損傷的話，質粒轉染後DNA被酶修復時有可能出錯。

所以需要使用同一個菌落的細菌來做後續實驗，以確保菌株遺傳物質的同一性。

⑨ 微生物的培養

微生物培養（microculture)是生物培養的中的一種。所培養的微生物主要有病毒、細菌、放線菌、真菌等。
微生物培養需要用到培養基，根據微生物的不同種類和生活習性來配製特定的培養基。微生物培養成功的關鍵在於無菌操作，如果培養器具和培養基不能徹底滅菌、培養的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。
病毒的培養 病毒是營寄生生存的生物，靠寄生在活細胞內才能繁殖，在培養的時候一般把它接種到活雞胚內。

1、配製培養基配好之滅菌過程配好培養基般錐形瓶錐形瓶進行滅菌滅完之也先放錐形瓶等待分裝滅完菌之放入無菌室或通風廚待用
2、培養皿滅菌（空）培養皿滅菌沒有培養基情況下進行存所說種放置問題般用專門滅培養皿金屬筒或者用牛皮紙、報紙打包滅菌
3、滅完菌之培養皿放入無菌室或通風廚待用（打開滅菌前包裝從滅菌設備拿出直接進無菌室或通風廚）降至室溫才使用
4、分裝般培養基溫度降至50-60攝氏度時候開始分裝若提前准備好已經凝固錐形瓶用前先水浴加熱熔化液態情況下向培養皿分裝
5、待培養皿培養基凝固（快分裝完基本上凝固差多了）此時才培養皿倒置防止皿蓋上冷凝水污染培養基（此時皿蓋下培養基蒸發出水蒸氣向上走還凝結於培養基上會有皿蓋上形成水滴再滴落情況了此防止污染）
6、接種培養接種也倒置培養（原因同 5 所說）

倒置還防止培養基水分蒸過快發培養基變干無機鹽析出營養成分濃度變大能使用利於微生物生長過分裝培養皿應盡快使用放長了還容易感染雜菌
各地都一樣