生物素怎麼標記探針

㈠ 基因探針的探針標記

探針是能與特異靶分子反應並帶有供反應後檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸鹼基順序互補的原理，用特異的基因探針即識別特異鹼基序列的有標記的一段單鏈DNA（或RNA）分子，與被測定的靶序列互補，以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。特異性探針有三種形式——cDNA、RNA、寡核苷酸。cDNA和寡核苷酸是目前最常採用的探針。RNA探針用途很廣，也容易獲得，但其不穩定性限制了其商業用途。cDNA探針的獲得是，將特定的基因片段裝載到質粒或噬菌體中，經過擴增、酶切、純化等復雜的步驟，才能得到一定長度的cDNA探針。這一過程比較復雜，有相應條件的實驗室才能做到。寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下，由核酸合成儀來完成，可廉價獲得大量的此類探針。質量也相對來說更為穩定。由於cDNA探針長度通常為數百至數千個鹼基，所以有良好的信號放大作用，但其滲透性比較差。寡核苷酸探針一般為十數個至數十個鹼基，滲透性強，但信號放大作用則較差，合成的多相寡核苷酸探針，敏感性可以達到cDNA探針水平。
探針的標記方式有放射性標記和非放射性標記。標記物質有放射性元素（如32P等）和非放射性物質（如生物素、地高辛等）。32P是最常用的核苷酸標記同位素，被標記的dNTP本身就帶有磷酸基團，便於標記。特點是比活性高，可達9000Ci/mmol；發射的β射線能量高。用它標記的探針自顯影時間短，靈敏度高。32P的半壽期短，雖使用不方便，但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標記法有酶標法和化學物標記法。酶標方法與免疫測定ELISA方法相似，只是被標記的核酸代替了被標記的抗體，事實上被標記的抗體也稱為探針，現有許多商品是生物素、地高辛標記的。血凝素與生物素有非常高的親和性，當血凝素標記上過氧化物酶或鹼性磷酸酶，經雜交反應最終形成探針-生物素-血凝素酶復合物（ABC法），酶催化底物顯色，觀察結果。ABC法底物顯色生成不溶物，以便觀測結果。酶標記法復雜、重復性差，成本高，但便於運輸、保存，靈敏度與放射物標記法相當。 ①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口，然後DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸，同時在3´端修復加入被標記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻，多用於大分子DNA標記，(>1000bp最好)，但單鏈DNA、RNA不能用該法標記。
②隨機引物法。隨機引物是指含有各種可能排列順序的寡聚核苷酸片斷的混合物，因此它可以與任意核苷酸序列雜交，起到聚合酶反應的引物作用。將待標記的DNA探針片斷變性後與隨機引物一起雜交，然後以此雜交的寡聚核苷酸為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶I大斷段（KlenowFragment）催化下，合成與探針DNA互補的DNA鏈，當在反應體系中含有a-32P-dNTP時，即形成放射性同位素標記的DNA探針。具有上述優點，可代替缺口平移法。此外大小、單雙DNA均可標記，標記均勻，標記率高，但也不能標記環狀DNA。隨機引物法標記探針一般長400~600bp。
③末端標記法（又叫尾標）。利用末端轉移酶可進行「尾標」，尾標適用於寡核苷酸探針標記，寡核苷酸探針多用於核酸「點」突變的檢測，該探針可用核酸合成儀人工合成，克隆出的探針一般較長，特異性好，標記量大，雜交的檢出信號強。 1、4—6微米切片，用防脫片膠（多聚賴氨酸）處理過的玻片貼附
2、56—60℃烤片2—16h
3、新鮮二甲苯脫蠟，10minX2（趁熱脫蠟）
4、100%乙醇5minX2次，不用浸水，直接空氣乾燥
5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸餾水稀釋，濃度為25μg/ml），37℃消化10—15min
6、棄去蛋白酶K工作液，0.1MTBS洗滌3minX3次逐級酒精脫水（85%，95%，100%酒精）1minX3次然後空氣乾燥
7、加入20μl探針，加蓋薄膜。（探針用預雜交液稀釋，濃度為5μg/ml）。
8、95℃變性10—12min；立刻置於冰塊上，防止復性。
9、37℃雜交16—20h
10、揭去薄膜，每張切片加入以下雜交後洗滌液：
>用2—3滴2XSSC37℃洗滌3minX2次；
>0.5XSSC37℃洗滌3minX2次；
>0.2XSSC37℃洗滌3minX2次；
11、0.1MPBS/TBS緩沖液洗滌，1minX3次
12、滴加小鼠抗地高辛生物素標記的抗體工作液，37℃孵育45—60min；
13、0.1MPBS浸洗，5minX3次
14、滴加高敏鹼性磷酸酶鏈親和素復合物工作液，37℃孵育45—60min。
15、0.1MPBS浸洗，5minX3次
16、滴加NBT/BCIP顯色6—16h，
17、雙蒸水終止反應（37℃10min—2h），雙蒸水浸洗，5minX2次
18、滴加核固紅，30秒—5min；
19、雙蒸水浸洗，5minX3次
20、脫水、透明、封片

㈡ 如何用光敏生物素標記質粒

如何用光敏生物素標記質粒
常將放射性同位素如32 P連接到某種脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）上做為標記物，然後通過切口平移法標記探針。
切口平移法（nick translation）是利用大腸桿菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多種酶促活性將標記的dNTP摻入到新形成的DNA鏈中去，形成均勻標記的高比活DNA探針。其操作方法如下：
⑴取1?g DNA溶於少量無菌雙蒸水中，加入5?l距離大約10×切口平移緩沖液 (0.5mol/L Tris－HCl，PH7.2；0.1 mol/L MgSO4 ；1mmol/L二硫蘇糖醇；500?g/mL牛血清白蛋白），加入除標記物（如?-32 p-dATP）外的其它三種dNTP（如dCTP，dGTP，dTTP）溶液，20mmol/L溶液各1?l。
⑵加入100?ci（10?l）標記物溶液，加入無菌雙蒸水至終體積為46.5?l，混勻，加入0.5?l稀釋的DNaseI溶液，混勻；加入1?l（約5單位）E.coli DNA polymerase I，混勻。

㈢ 生物素是什麼意思及作用

一、生物素的定義：生物素又稱維生素H、輔酶R，是水溶性維生素，也屬於維生素B族，B7。它是合成維生素C的必要物質，是脂肪和蛋白質正常代謝不可或缺的物質。是一種維持人體自然生長、發育和正常人體機能健康必要的營養素。

生物素是20世紀30年代在研究酵母生長因子和根瘤菌的生長與呼吸促進因子時，從肝中發現的一種可以防治由於餵食生雞蛋蛋白誘導的大鼠脫毛和皮膚損傷的因子。

二、生物素的用途：生物素，即人們所熟知的維生素H，它能使身體將食物轉化為自身能量。生物素有利於細胞的健康和再生。糖尿病患者可以通過生物素改善血糖的調節。頭發和指甲的健康也需要生物素。

（1）保健用途

糖尿病。補充生物素，生物素通過改善胰島素和血糖的使用幫助改善血糖的調節。頭發和指甲。補充生物素可以修復薄弱爆裂的腳趾甲和手指甲，改善頭發的健康。生物素也可以修復那些由於生物素水平偏低引起過早的灰白頭發。

（2）美容用途

生物素具有出色的美容作用，可保持皮膚嫩白、指甲光滑等。這個發現也為生物素產品開拓了一大新葯業用途。美容化妝品行業是國際大產業之一，美容化妝品的國際市場總銷售額遠遠高於葯品的銷售額，生物素在美膚、美甲（指甲）及美發上的新應用必將導致葯用級生物素銷量的上升。

（3）科研用途

生物素可以用作核酸探針的標記物，它能與核酸分子的UTP或dUTP 5『位上的C相結合，並可與親和素結合而被檢測。在檢測的過程中，生物素只用作固定連接，而不用作信號檢測。

(3)生物素怎麼標記探針擴展閱讀：

生物素的食物來源：

（1）在牛奶、牛肝、蛋黃、動物腎臟、草莓、柚子、葡萄等水果、瘦肉、糙米、啤酒、小麥中都含有生物素。在復合維生素B和多種維生素的制劑中，通常都含有維生素H。

（2）富含該維生素的美食：芥末雙脆、 蟹肉西蘭花、芥茉菠菜、魚香腰花、油燜鱔魚、素炒三絲、蛋黃南瓜、芒果柳橙蘋果汁、胡蘿卜燉羊肉、松花淡菜粥、清燉蘿卜牛肉、銀杞明目湯、雞肝胡蘿卜粥、牛肉蔬

（3）菜濃湯、芒果葡萄柚汁、芒果柳橙蘋果汁、木瓜生薑汁、蘆薈檸檬汁、甜橙檸檬汁、杏獼猴桃汁。

㈣ 核酸探針的標記

常將放射性同位素如32 P連接到某種脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）上做為標記物，然後通過切口平移法標記探針。
切口平移法（nick translation）是利用大腸桿菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多種酶促活性將標記的dNTP摻入到新形成的DNA鏈中去，形成均勻標記的高比活DNA探針。其操作方法如下：
⑴取1?g DNA溶於少量無菌雙蒸水中，加入5?l距離大約10×切口平移緩沖液 (0.5mol/L Tris－HCl，PH7.2；0.1 mol/L MgSO4 ；1mmol/L二硫蘇糖醇；500?g/mL牛血清白蛋白），加入除標記物（如?-32 p-dATP）外的其它三種dNTP（如dCTP，dGTP，dTTP）溶液，20mmol/L溶液各1?l。
⑵加入100?ci（10?l）標記物溶液，加入無菌雙蒸水至終體積為46.5?l，混勻，加入0.5?l稀釋的DNaseI溶液，混勻；加入1?l（約5單位）E.coli DNA polymerase I，混勻。
⑶置14-16℃反應1-2小時。 可將生物素、地高辛連接在dNTP上，然後象放射性標記一樣用酶促聚合法摻入到核酸鏈中制備標記探針。也可讓生物素、地高辛等直接與核酸進行化學反應而連接上核酸鏈。其中，生物素的光化學標記法較為常用。其原理是利用能被可見光激活的生物素衍生物-光敏生物素（photobiotin），光敏生物素與核酸探針混合後，在強的可見光照射下，可與核酸共價相連，形成生物素標記的核酸探針。可適用於單、雙鏈DNA及RNA的標記，探針可在-20℃下保存8-10個月以上。具體操作方法如下：
⑴將雙鏈DNA變性或用NaOH處理形成缺口，單鏈DNA或RNA毋需處理，將核酸樣品溶於水。
⑵暗室下在微量離心管中加入10?g DNA，1mg/ml光敏生物素20?l，加水至50?l，混勻。
⑶冰浴中打開離心管蓋，在300-500瓦燈下照射10分鍾（液面距燈泡10cm）。
⑷加入100?l 0.1mol/L Tris－HCl，pH8.0，加入100?l 2-丁醇抽提兩次，離心，棄上層。
⑸乙醇沉澱核酸探針；用70%乙醇漂洗真空抽干，備用。
除上述標記法外，探針的制備和標記還可通過PCR反應直接完成。

㈤ 生物素標記的DNA探針用什麼方法檢測

生物素標記的DNA探針用什麼方法檢測
以病原微生物DNA或RNA的特異性片段為模板,人工合成的帶有放射性或生物素標記的單鏈DNA片段,可用來快速檢測病原體.
怎麼檢測：
將一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或熒光染料等標記後製成的探針.可與固定在硝酸纖維素膜的DNA或RNA進行互補結合,經放射自顯影或其他檢測手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在.
以細菌為例,目前分子雜交技術用於細菌的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要准確的多,是細菌分類學的一個發展方向.加之分子雜交技術的高敏感性,分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景.細菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個基因.（各種細菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要採取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段後分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫.然後用多種其它菌種的DNA作探針來篩選,產生雜交信號的克隆被剔除,最後剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段.將此重組質粒標記後作探針進一步鑒定,亦可經DNA序列分析鑒定其基因來源和功能.）括弧里比較重要!

㈥ dna探針技術的原理

DNA探針利用同位素、生物素等標記的特定DNA片斷，該片斷可大至寄生蟲基因組DNA，小至20個鹼基。當DNA探針與待測的非標記單鏈DNA（或RNA）按鹼基順序互補結合時，以氫健將2條單鏈連接而形成標記DNA-DNA（或標記DNA-RNA）的雙鏈雜交分子。將未配對結合的核苷酸溶解後用檢測系統（放射自顯影或酶檢測等）檢測雜交反應結果。由於DNA分子鹼基互補的精確性，單鏈DNA探針僅與樣品中變性處理的DNA單鏈出現配對雜交，由此決定了探針的特異性；用放射性同位素（如32P）或生物素標記探針，使雜交試驗同時具有高度的敏感性。

㈦ 基因探針是什麼

基因探針（probe）又稱「寡核苷酸探針」，簡稱「探針」，就是一段與目的基因或DNA互補的特異核苷酸序列，它可以包括整個基因，也可以僅僅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之轉錄而來的RNA。

1．探針的來源 DNA探針根據其來源有3種：一種來自基因組中有關的基因本身，稱為基因組探針（genomic probe）；另一種是從相應的基因轉錄獲得了mRNA，再通過逆轉錄得到的探針，稱為cDNa 探針（cDNa probe）。與基因組探針不同的是，cDNA探針不含有內含子序列。此外，還可在體外人工合成鹼基數不多的與基因序列互補的DNA片段，稱為寡核苷酸探針。

2．探針的制備 進行分子突變需要大量的探針拷貝，後者一般是通過分子克隆（molecular cloning）獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復製品。當制備基因組DNA探針進，應先制備基因組文庫，即把基因組DNA打斷，或用限制性酶作不完全水解，得到許多大小不等的隨機片段，將這些片段體外重組到運載體（噬菌體、質粒等）中去，再將後者轉染適當的宿主細胞如大腸肝菌，這時在固體培養基上可以得到許多攜帶有不同DNA片段的克隆噬菌斑，通過原位雜交，從中可篩出含有目的基因片段的克隆，然後通過細胞擴增，制備出大量的探針。

為了制備cDNA 探針，首先需分離純化相應mRNA，這從含有大量mRNA的組織、細胞中比較容易做到，如從造血細胞中制備α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板後，在逆轉錄酶的作用下，就可以合成與之互補的DNA(即cDNA)，cDNA與待測基因的編碼區有完全相同的鹼基順序，但內含子已在加工過程中切除。

寡核苷酸探針是人工合成的，與已知基因DNA互補的，長度可從十幾到幾十個核苷酸的片段。如僅知蛋白質的氨基酸順序量，也可以按氨基酸的密碼推導出核苷酸序列，並用化學方法合成。

3.探針的標記 為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交，有必要對探針加以標記，以便在結合部位獲得可識別的信號,通常採用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。最常用的探針標記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當濃度的DNA酶Ⅰ（DNAseⅠ）在探針DNA雙鏈上造成缺口，然後再藉助於DNA聚合酶Ⅰ（DNa poly merasⅠ）的5』→3』的外切酶活性，切去帶有5』磷酸的核苷酸；同時又利用該酶的5』→3』聚酶活性，使32P標記的互補核苷酸補入缺口，DNA聚合酶Ⅰ的這兩種活性的交替作用，使缺口不斷向3』的方向移動，同時DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標記的核苷酸所取代。

探針的標記也可以採用隨機引物法，即向變性的探針溶液加入6個核苷酸的隨機DNA小片段，作為引物，當後者與單鏈DNA互補結合後，按鹼基互補原則不斷在其3』OH端添加同位素標記的單核苷酸，這樣也可以獲得比放射性很高的DNA探針。

㈧ 生物名詞解釋 探針

是DNA探針么?
高中生物第3冊中有啊
DNA探針技術又稱分子雜交技術，是利用DNA分子的變性、復性以及鹼基互補配對的高度精確性，對某一特異性DNA序列進行探查的新技術。DNA探針是利用同位素、生物素等標記的特定DNA片斷，該片斷可大至寄生蟲基因組DNA，小至20個鹼基。當DNA探針與待測的非標記單鏈DNA（或RNA）按鹼基順序互補結合時，以氫健將2條單鏈連接而形成標記DNA-DNA（或標記DNA-RNA）的雙鏈雜交分子。將未配對結合的核苷酸溶解後用檢測系統（放射自顯影或酶檢測等）檢測雜交反應結果。由於DNA分子鹼基互補的精確性，單連DNA探針僅與樣品中變性處理的DNA單鏈出現配對雜交，由此決定了探針的特異性；用放射性同位素（如32P）或生物素標記探針，使雜交試驗同時具有高度的敏感性。