如何篩選營養缺陷型微生物

A. 營養缺陷性的定義是什麼篩選缺陷型菌株的一般步驟是什麼並舉例說明如何檢出缺陷型

營養缺陷型（auco troph）：因喪失合成某些生活必需物質的能力，不能在基本培養基上生長的，突變型菌株。營養缺陷型auxotroph 指微生物等不能在無機鹽類和碳源組成的合成培養基中增殖，必須補充一種或一種以上的營養物質才能生長。一如胸間氮苯缺陷型所表現的那樣。另外對這樣的性質則稱為營養缺陷性（auxotrophy）。營養缺陷型是作為原養型的對應詞來使用。

B. 如何得知某微生物是否為哪種氨基酸的異養型微生物

通常稱這種微生物為「某氨基酸營養缺陷型菌株」。就是這種微生物不具有(或失去了)合成某種氨基酸的能力，必須從外界吸收這種氨基酸才能生長。
要鑒別這種微生物是否為某種氨基酸的營養缺陷型，一般是用這種氨基酸的結構類似物代替這種氨基酸，添加到培養基中。
氨基酸的結構類似物在結構上與這種氨基酸相似，可使微生物錯認為是這種氨基酸並進行肽鏈合成，但又不具備這種氨基酸的功能，合成的肽鏈沒有其應有的功能，微生物不能正常生長。
如果微生物能夠在這種培養基上生長，它就不是該氨基酸的營養缺陷型。如果在這種培養基上不能正常生長，它就有可能是這種氨基酸的營養缺陷型。

C. 微生物篩選營養缺陷型有什麼意義

微生物中篩選營養缺陷型一般有兩個意義：
1、營養缺陷型有可能是突變體，要篩選基因突變體第一步一般都會從營養缺陷開始。
2、主要應用於篩選轉基因受體。

D. 培養營養缺陷型微生物的培養基

答案選B
基本培養基：凡能滿足某一菌種野生型和原養型菌株營養要求的最低成分的組合培養基.
完全培養基：在基本培養基中加入一些富含生長因子的物質,以滿足該微生物各種營養缺陷型要求.
補充培養基：在基本培養基中有針對性地加上某一種或幾種其自身不能合成的成分,以滿足相應營養缺陷型生長的培養基.
限量補充培養法：把誘變處理後的細胞接種在含有微量（＜0.01%）蛋白腖的基本培養基平板上,野生型細胞就迅速長成較大的菌落,而營養缺陷型則緩慢生長成小菌落.若需獲得某一特定營養缺陷型,可再在基本培養基中加入微量的相應物質.
在基本培養基中加入抗生素,野生型菌株被殺死,營養缺陷型不能在基本培養基中生長而被保留下來.題目是問「常在什麼培養基中加入」注意「常」字.其實其他培養基也可以.

E. 微生物篩選營養缺陷型有什麼意義

在理論研究中，營養缺陷型不僅被廣泛應用於闡明微生物代謝途徑上，而且在遺傳學的研究中具有特殊的地位。在轉化、轉導、原生質體融合、質粒和轉座因子等遺傳學研究中，營養缺陷型是常用的標菌種。此外，營養缺陷型菌株還是研究基因的結構與功能常用的材料。在生產實踐中，營養缺陷型可以用來切斷代謝途徑，以積累中間代謝產物；也可以阻斷某一分支代謝途徑，從而積累具有共同前體的另一分支代謝產物；營養缺陷型還能解除代謝的反饋調節機制，以積累合成代謝中某一末端產物或者中間產物；也可將營養缺陷型菌株作為生產菌株雜交、重組育種的遺傳標記。營養缺陷型菌株廣泛應用於核苷酸及氨基酸等產品的生產。1、阻斷代謝途徑，積累中間代謝產物2、阻斷分支代謝，改變代謝方向，積累另一終端代謝產物3、解除反饋抑制，積累代謝產物4、利用滲漏缺陷型進行代謝調控育種.

F. 微生物問題：營養缺陷性的篩選方法有什麼舉例說明。。

營養缺陷型微生 物是 指經過誘變處理,使某一菌株喪失合成某些 必需 的營養物質(氨基酸、維生素和鹼基等)的能力,從而必須在培養 基中加人相應 的營養成 分才能 正常生 長 的變異菌株。

分離：
1、青黴素濃縮法。
青黴素 能抑 制細菌 細胞壁 的合 成,因此,用青黴素只能殺死生 長繁殖 中的細 菌,而 不能殺死停 止分裂 的細菌。在 只能使野生 型生長而不 能使 突變型 生長 的選 擇性液體 培養 基中加人青黴 素,野生型被 青黴 素殺死,突變 型 則不被 殺死 而得 以 濃縮。

2、菌絲過濾法。
先用 誘變 劑處理 真菌 (如脈 胞菌 ) 的分生抱子,然 後接 種到液體培養基 中,不 斷給營養液通 氣
,刺激分生抱子生長,並 防止它們相互結合在一起。大約 經過l d 的培養,分生抱子萌發,長 出菌絲。然 後用棉 花把 萌發 了的分生抱子過 濾掉,未萌發的分 生抱 子 (死亡 的、需要 較 長 時間萌 發 的和突變為營養缺 陷型 的分 生抱 子 ) 則仍 留在 培養 液 中,以後 每隔一段時間進行過濾
,連續若 干次後,所剩下 的就都是 缺陷 型的或死亡 的分生抱子。通過補充各種成分 鑒定缺陷型

檢出：
影印接種法。採用一種 特製的工具—「印章」 ,將 在完全培養基上長 出的菌 落的平 皿上「印」一 下,然 後分 別在 完全培養基和基本培 養基 的相 應位 置上 各 印一下,若 在 完全 培養基上生長,而在基本培養基上 不生 長,即認為是營養缺 陷型

G. 論述獲得微生物營養缺陷型菌株的方式

採用輻射，化學試劑等因素處理細菌，以提高其變異幾率，關鍵步驟是進行營養缺陷型微生物的篩選工作，營養缺陷型是指通過誘變產生的，由於發生了喪失某酶合成能力的突變，因而只能在加有該酶合成產物的培養基中才能生長的突變株。營養缺陷型的篩選與鑒定涉及下列幾種培養基：基本培養基（MM，符號為[-]）是指僅能滿足某微生物的野生型菌株生長所需的最低成分的合成培養基。完全培養基(CM，符號為[+])是指可滿足某種微生物的一切營養缺陷型菌株的營養需要的天然或半合成培養基。補充培養基（SM，符號為[A]或[B]等）是指在基本培養基中添加某種營養物質以滿足該營養物質缺陷型菌株生長需求的合成或半合成培養基。

營養缺陷型菌株不僅在生產中可直接作發酵生產核苷酸、氨基酸等中間產物的生產菌，而且在科學實驗中也是研究代謝途徑的好材料和研究雜交、轉化、轉導、原生質融合等遺傳規律必不可少的遺傳標記菌種。

營養缺陷型的篩選一般要經過誘變、淘汰野生型、檢出和鑒定營養缺陷型四個環節。現分述如下：

第一步，誘變劑處理：與上述一般誘變處理相同。

第二步，淘汰野生型：在誘變後的存活個體中，營養缺陷型的比例一般較低。通過以下的抗生素法或菌絲過濾法就可淘汰為數眾多的野生型菌株即濃縮了營養缺陷型。

抗生素法 有青黴素法和制黴菌素法等數種。青黴素法適用於細菌，青黴素能抑制細菌細胞壁的生物合成，殺死正在繁殖的野生型細菌，但無法殺死正處於休止狀態的營養缺陷型細菌。制黴菌素法則適合於真菌，制黴菌素可與真菌細胞膜上的甾醇作用，從而引起膜的損傷，也是只能殺死生長繁殖著的酵母菌或黴菌。在基本培養基中加入抗生素，野生型生長被殺死，營養缺陷型不能在基本培養基中生長而被保留下來。

菌絲過濾法 適用於進行絲狀生長的真菌和放線菌。其原理是：在基本培養基中，野生型菌株的孢子能發芽成菌絲，而營養缺陷型的孢子則不能。通過過濾就可除去大部分野生型，保留下營養缺陷型。

第三步，檢出缺陷型：具體方法很多。用一個培養皿即可檢出的，有夾層培養法和限量補充培養法；在不同培養皿上分別進行對照和檢出的，有逐個檢出法和影印接種法。可根據實驗要求和實驗室具體條件加以選用。現分別介紹如下：

夾層培養法 先在培養皿底部倒一薄層不含菌的基本培養基，待凝，添加一層混有經誘變劑處理菌液的基本培養基，其上再澆一薄層不含菌的基本培養基，經培養後，對首次出現的菌落用記號筆一一標在皿底。然後再加一層完全培養基，培養後新出現的小菌落多數都是營養缺陷型突變株。

限量補充培養法 把誘變處理後的細胞接種在含有微量（＜0.01%）蛋白腖的基本培養基平板上，野生型細胞就迅速長成較大的菌落，而營養缺陷型則緩慢生長成小菌落。若需獲得某一特定營養缺陷型，可再在基本培養基中加入微量的相應物質。

逐個檢出法 把經誘變處理的細胞群塗布在完全培養基的瓊脂平板上，待長成單個菌落後，用接種針或滅過菌的牙簽把這些單個菌落逐個整齊地分別接種到基本培養基平板和另一完全培養基平板上，使兩個平板上的菌落位置嚴格對應。經培養後，如果在完全培養基平板的某一部位上長出菌落，而在基本培養基的相應位置上卻不長，說明此乃營養缺陷型。

影印平板法 將誘變劑處理後的細胞群塗布在一完全培養基平板上，經培養長出許多菌落。用特殊工具——「印章」把此平板上的全部菌落轉印到另一基本培養基平板上。經培養後，比較前後兩個平板上長出的菌落。如果發現在前一培養基平板上的某一部位長有菌落，而在後一平板上的相應部位卻呈空白，說明這就是一個營養缺陷型突變株。

第四步，鑒定缺陷型：可借生長譜法進行。生長譜法是指在混有供試菌的平板表面點加微量營養物，視某營養物的周圍有否長菌來確定該供試菌的營養要求的一種快速、直觀的方法。用此法鑒定營養缺陷型的操作是：把生長在完全培養液里的營養缺陷型細胞經離心和無菌水清洗後，配成適當濃度的懸液（如107～108個／ml），取0.1ml與基本培養基均勻混合後，傾注在培養皿內，待凝固、表面乾燥後，在皿背劃幾個區，然後在平板上按區加上微量待鑒定缺陷型所需的營養物粉末（用濾紙片法也可），例如氨基酸、維生素、嘌呤或嘧啶鹼基等。經培養後，如發現某一營養物的周圍有生長圈，就說明此菌就是該營養物的缺陷型突變株。用類似方法還可測定雙重或多重營養缺陷型。

H. 微生物篩選營養缺陷型有什麼意義 如題 重點說科研方面的意義 謝謝

微生物中篩選營養缺陷型一般有兩個意義：
1、營養缺陷型有可能是突變體,要篩選基因突變體第一步一般都會從營養缺陷開始.
2、主要應用於篩選轉基因受體.

I. 營養缺陷型菌株的獲得

營養缺陷型是一種生化突變菌株，它的出現是由基因突變引起的。遺傳信息的載體是一系列為酶蛋白編碼的核酸系列，如果核酸系列中某鹼基發生突變，由該基因所控制的酶合成受阻，該菌株也因此不能合成某種營養因子，使正常代謝失去平衡。
營養缺陷型菌株的篩選一般包括誘發突變、後培養、淘汰野生型、檢出缺陷型和鑒別缺陷型、生產能力測試等主要步驟。
在篩選營養缺陷型突變株的工作中，常用三種培養基：一是基本培養基，它是僅能滿足微生物野生型菌株生長要求的培養基。第二種是完全培養基，它是能滿足某微生物所有營養缺陷型菌株營養要求的天然或半合成培養基。第三種是補充培養基，凡是只能滿足某種營養缺陷型生長需要的合成培養基么就稱為補充培養基。
1.用於誘發營養缺陷型的誘變劑有亞硝基胍,紫外線,亞硝酸等,其中亞硝基胍的誘發突變率極高,一般可達10%以上,另外,隨著誘變劑量的提高突變頻率也增加.
2.在誘變之後存活的菌體中,存活的營養缺陷型菌株的數量很少,而野生型細胞卻大量存在,所以常採用抗生素法和菌絲過濾法來篩選營養缺陷型菌株.
3.經過第二步,野生型的細胞和營養缺陷型細胞數量比例發生很大變化,但是終究還是混合體,要設法把缺陷型菌株從群體分離檢出,可用點植對照法,影印法,夾層法,限量補充培養法來分離.
4.缺陷型菌株的鑒定,實際是測定營養缺陷型菌株所需的生長因子種類.鑒定的方法可分為兩大類:一種方法是在一個平皿中加入一種營養物質以測定多株缺陷型菌株(10-50)對該生長因子的需求情況.第二種方法是在同一個平皿上測定一種缺陷型菌株對許多生長因子的需求情況,成為生長譜法.