❶ 生物學實驗中用到的玻片標本有三種
切片 塗片 裝片
❷ 求:高中生物實驗實驗方法匯總
專題七 實驗專題復習
一、常規實驗的復習:
1、實驗中常用器材和葯品的使用:
一般實驗設計此類題目會提供所需的器材和葯品。因此,如果能夠熟悉這些常用器材和葯品的用途和使用方法,往往能從中發現實驗設計的思路和方法,甚至具體的實驗步驟。現在總結如下:
NaOH:用於吸收CO2或改變溶液的pH。 Ca(OH)2:鑒定CO2
HCl:解離或改變溶液的pH。 NaHCO3:提供CO2
濾紙:過濾或紙層析。 紗布或尼龍布:過濾
斐林試劑:可溶性還原性糖的鑒定。 碘液:鑒定澱粉。
蘇丹Ⅲ、Ⅳ:脂肪的鑒定。 雙縮脲試劑:蛋白質的鑒定。
二苯胺試劑:鑒定DNA。 檸檬酸鈉:血液抗凝劑。
NaCl:配製生理鹽水及其它不同濃度的鹽溶液,可用於動物細胞內液或用於提取DNA。
瓊脂:激素或其它物質的載體,用於激素的轉移或培養基。
亞甲基藍:用於活體染色或檢測污水中的耗氧性細菌(細菌的氧化可使之褪色)。
酒精:用於消毒處理、提純DNA、葉片脫色及配製解離液。
蔗糖:配製蔗糖溶液,用於測定植物細胞液濃度或觀察質壁分離和復原。
龍膽紫溶液或醋酸洋紅或改良苯酚品紅染液:鹼性染料,用於染色體染色。
卡諾氏液:固定細胞形態
2、常規實驗方法:
(1)顯微觀察法,如觀察植物細胞有絲分裂、觀察葉綠體和細胞質流動、觀察植物細胞質壁分離和復原實驗等。
(2)觀色法,如觀察動物毛色和植物花色的遺傳等。
(3)原子示蹤法,如噬菌體浸染細菌的實驗,用18O2和14CO2追蹤光合作用中氧原子和碳原子轉移途徑的實驗等。
(4)等組實驗法,如小麥澱粉酶催化澱粉水解的實驗,發現生長素的燕麥胚芽鞘實驗等。
(5)加法創意法,如用飼喂法研究甲狀腺激素,用注射法研究動物胰島素和生長激素,用移植法研究性激素等。
(6)減法創意法,如用閹割法、摘除法研究性激素、甲狀腺激素和生長激素的實驗,雌蕊受粉後除去正在發育著的種子等。
(7)雜交實驗法,如孟德爾發現遺傳定律的植物雜交、測交的實驗,小麥的雜交等。
(8)化學分析法,如番茄和對Ca和Si選擇吸收,葉綠體中色素的提取和分離實驗等。
(9)理論分析法,如大、小兩種草履蟲競爭的實驗,植物根向地生長、莖背地生長的實驗,植物向光性實驗等。
(10)模擬實驗法,如滲透作用的實驗裝置,分離定律的模擬實驗等。
上述內容基本上可以包括一般的實驗方法,通過這次復習理解了這些方法,將有助於認識、分析和設計新的實驗內容。此外,上述多數的實驗方法有一個共同的特點:就是實驗結論的得出,都是一個邏輯推理的過程,或者說都是一個透過現象看到本質的思維推理的過程。因此,在復習中要充分體會和體驗這種過程。可以說,構建實驗的方法體系,為分析、解決、設計新的實驗,以及形成實驗能力,奠定了良好的方法基礎和思維基礎。
3、實驗中常用的一些基本的實驗方法和技術:
熟悉常用的實驗方法和技術,理解每種方法和技術的適用情況並熟練掌握其操作技能,以便在設計實驗時能進行遷移和利用,主要包括以下幾個方面:
(1)關於光學顯微鏡的使用:[來源:Zxxk.Com]
顯微鏡的取送:①右手握鏡臂;②左手托鏡座;③置於胸前。
顯微鏡的旋轉:①鏡筒朝前,鏡臂朝後;②置於觀察者座位前的桌子上,偏向身體左側,便於左眼向目鏡內觀察;③置於桌子內側,距桌沿5cm左右。
對光:①轉動粗准 焦螺旋,使鏡筒徐徐上升,然後轉動轉換器,使低倍物鏡對准通光孔;②用手指轉動遮光器(或片狀光圈),使最大光圈對准通光孔,左眼向目鏡內注視,同時轉動反光鏡,使其朝向光源,使視野內亮度均勻合適。
低倍物鏡的使用:①用手轉動粗准焦螺旋,使鏡筒徐徐下降,同時兩眼從側面注視物鏡鏡頭,當物鏡鏡頭與載物台的玻片相距2~3mm時停止。②用左眼向目鏡內注視(注意右眼應該同時睜著),並轉動粗准焦螺旋,使鏡筒徐徐上升,直到看清物象為止。如果不清楚,可調節細准焦螺旋,至清楚為止。
高倍物鏡的使用:使用高倍物鏡之前,必須先用低倍物鏡找到觀察的物象,並調到視野的正中央,然後轉動轉換器再換高倍鏡。換用高倍鏡後,視野內亮度變暗,因此一般選用較大的光圈並使用反光鏡的凹面,然後調節細准焦螺旋。觀看的物體數目變少,但是體積變大。
反光鏡的使用:反光鏡通常與遮光器(或光圈)配合使用,以調節視野內的亮度。反光鏡有平面和凹面。對光時,如果視野光線太強,則使用反光鏡的平面,如果光線仍舊太強,則同時使用較小的光圈;反之,如果視野內光線較弱,則使用較大的光圈或使用反光鏡的凹面。
鏡頭的擦拭:①用專門的擦鏡紙;②擦鏡頭時,先將擦鏡紙折疊幾次,然後朝一個方向擦,不可來回擦或轉動擦;③如果鏡頭被油污污染,則可在擦鏡紙上滴幾滴二甲苯,然後按上述方法擦拭。
顯微鏡的放大對象:是物體的長和寬,不是面積,更不是體積。
顯微鏡的焦距問題:物鏡離裝片的遠近,准焦螺旋的使用。
顯微鏡使用時物象移動方向:相反,即物象在視野何方,則裝片即向該方向移動。
顯微鏡使用時異物的判斷:目鏡、物鏡或裝片上,通常通過移動玻片(是否在玻片上),轉動目鏡(是否在目鏡上)來判斷,剩下在物鏡鏡上。
實驗後顯微鏡的安置:顯微鏡使用完畢後,應將玻片取嚇,將其機械部分用白紗布擦拭乾凈;轉動轉換器,讓兩個物鏡偏於兩旁;轉動粗准焦螺旋,使鏡筒下降至最低點,將反光鏡豎起,蒙上紅綢布,然後將顯微鏡鎖入箱內。
(2)臨時裝片、切片和塗片的製作:適用於顯微鏡觀察,凡需在顯微鏡下觀察的生物材料,必須先製成臨時裝片、切片和塗片,如「觀察植物細胞的質壁分離和復原」中要製作洋蔥表皮細胞的臨時裝片,在「生物組織中脂肪的鑒定」中要製作花生種子的切片,在「觀察動物如人體血液中的細胞」中要製作血液的塗片等等。
(3)研磨,過濾:適用於從生物組織中提取物質如酶、色素等,要求學生熟練掌握研磨、過濾的方法,如研磨時要先將生物材料切碎,然後加入摩擦劑(常用二氧化硅)、提取液和其它必要物質,充分研磨之後,往往要進行過濾,以除去渣滓,所用過濾器具則根據需要或根據試題中提供的器材加以選用,如可用濾紙、紗布、脫脂棉、尼龍布等。
(4)解離技術:適用於破壞細胞壁,分散植物細胞,製作臨時裝片。
(5)恆溫技術:適用於有酶參加的生化反應,一般用水浴或恆溫箱,根據題目要求選用。
(6)紙層析技術:適用於溶液中物質的分離。主要步驟包括制備濾紙條、劃濾液細線、層析分離等。
(7)植物葉片生成澱粉的鑒定:適用於光合作用的有關實驗,主要步驟包括飢餓處理、光照、酒精脫色、加碘等。
另外還有根尖培養、幼小動物的飼養、植物必需元素的鑒定、同位素示蹤技術等。
二、教材實驗歸類
(一)顯微觀察類
實驗名稱 細胞的狀態 染色劑 生物材料
觀察DNA.RNA
在細胞中的分布 死細胞 甲基綠
吡羅紅 人的口腔上皮細胞
觀察線粒體 [來源:學科網][來源:學&科&網][來源:Zxxk.Com] 活細胞 健那綠 [來源:學科網]
觀察細胞的 減數分裂 死細胞 無(為固 定裝片) 蝗蟲精母細胞
低溫誘導染色體加倍 死細胞 改良苯酚品紅染液 洋蔥根尖細胞
觀察細胞的
有絲分裂 死細胞 龍膽紫(或
醋酸洋紅)
觀察多種
多樣的細胞 活或死細胞
酵母菌細胞、水綿細胞、葉的保衛細胞、魚的紅細胞等
觀察葉綠體 活細胞 蘚類的葉(或菠菜葉、黑藻葉)
觀察植物細胞的
質壁分離與復原 活細胞 紫色洋蔥鱗片葉表皮細胞
說明:(1)以上實驗除了「觀察植物細胞的質壁分離與復原」使用低倍鏡即可外,其餘均需使用高倍鏡。(2)鑒定類實驗中的「脂肪的切片法鑒定」、探究性實驗中的「培養液中酵母菌種群數量的動態變化」都需用顯微鏡觀察。
(二)鑒定類實驗
1.實驗歸類
實驗名稱 鑒定對象 試劑 顏色 生物材料 備注
澱粉的鑒定 澱粉 碘液 藍色 脫色的葉片 無
還原糖的鑒定 還原糖 斐林試劑 磚紅色沉澱 蘋果或梨
的勻漿等 甲乙液現混
現用、水浴
加熱
脂肪的
鑒定 脂肪 蘇丹Ⅲ
(或Ⅳ)
染液 橘黃(或
紅)色 花生種
子切片 需用高倍
鏡觀察
蛋白質
的鑒定 蛋白質 雙縮脲
試劑 紫色 豆漿、稀
蛋清等 先加A液,
後加B液,
搖勻後使用
尿糖的
檢測 葡萄糖 葡萄糖
試紙 有色 水、葡萄
糖溶液、
三份模擬
「尿樣」 無
葉綠體中
色素的提取
和分離 四種色素 提取液:無水乙醇;分離液:層析液 胡蘿卜素:
橙黃色;葉
黃素:黃色;
葉綠素a:
藍綠色;葉
綠素b:黃
綠色 新鮮的綠
葉(如菠
菜葉) 加入二氧化硅是為了研磨得更充分;碳酸鈣可防止研磨中色素被破壞
2.注意問題
(1)有關蛋白質的鑒定
①若用蛋清進行蛋白質鑒定時,需將雞蛋清用水稀釋,通常是0.5 m L蛋白液加入5 mL水,攪拌均勻。如果蛋白液稀釋程度不夠,與雙縮脲試劑發生反應後會粘固在試管的內壁上,使反應不容易徹底,並且 試管也不容易刷洗干凈。
②鑒定蛋白質時,向樣液中加入2 mL雙縮脲試劑A搖勻,再向樣液中加入3~4滴雙縮脲試劑B搖勻。其中雙縮脲試劑B不能過量,因為過量的雙縮脲試劑B會與試劑A反應,使溶液呈藍色,從而掩蓋生成的紫色。
(2)葉綠體中色素的提取和分離
①區分色素提取和分離的原理:色素提取的原理——無水乙醇提取法;色素分離的原理——紙層析法。
②注意事項:a.濾液細線要畫得細且直,以防止色素帶重疊而影響分離效果;待濾液乾燥後要再畫一兩次,目的是積累更多的色素,使分離後的色素帶明顯。b.分離色素時,層析液不能沒及濾液細線,以防止色素溶解於層析液中而無法分離。
(三)調查類實驗
實驗名稱 調查常見的人類遺傳病 土壤中動物類群豐富度的研究
調查對象 隨機確定的人群;一定數量的家族 生活在土壤中的小動物
調查方法 匯總法 用取樣器取樣進行採集
統計方法 發病率=(患病人數/被調查人數)×100% 記名計演算法;目測估計法
注意事項 ①調查時,最好選取群體中發病率較高的單基因遺傳病,如紅綠色盲、白化病等;②調查某種遺傳病的發病率時,要隨機抽樣調查,且要保證調查的群體足夠大 ①取樣時應注意隨機取樣,避免人為心理作用;②動物類群因所取地段不同,可能差異較大;③樣土塑料袋上標明取樣的地點和時間;④不知名的動物標記為「待鑒定XX」;⑤調查的指標是動物種類的豐富度和數量豐富度
(四)探究類實驗
實驗名稱 自變數 因變數 無關變數
通過模擬實驗探究膜的透性 半透膜兩
側溶液的
濃度差 漏斗玻璃管液面的上升高度 半透膜的種類、開始時的液面、溫度等條件
探究溫度對澱粉酶活性的影響 不同溫度
(至少三種) 酶的活性(加碘液後溶液顏色的變化) pH、底物量、酶量、試管的潔凈程度、反應時間、操作程序等
探究pH對過氧化氫酶活性的影響 不同pH
(至少三種) 酶的活性(氣泡的數量或帶火星的衛生香燃燒的猛烈程度) 溫度、底物量、酶量、試管的潔凈程度、反應時間、操作程序等
探究酵母菌的呼吸方式 氧的有無 CO2生成量(澄清石灰水的混濁程度等);酒精的產生(重鉻酸鉀檢測) 葡萄糖溶液、石灰水的量、溫度、pH、錐形瓶的潔凈程度、連接導管的大小等
模擬探究細胞表面積與體積的關系 細胞體積的大小 物質運輸的效率 瓊脂塊的一致性、NaOH溶液的量、浸泡的時間、測量的准確性等
探究生長素類似物促進插條生根的最適濃度 不同濃度
的生長素
類似物 扦插枝條的生根數量或長度 實驗材料的一致性、激素濃度的准確性、處理時間的一致性等
探究培養液中酵母菌數量的動態變化 時間 酵母菌種群數量 培養液的成分、培養條件、空間等
探究水族箱中的群落的演替 時間 群落的演替 水族箱的培養條件和環境等
2.注意問題
1)探究溫度(pH)對酶活性的影響時,必須在達到預設的溫度(pH)的條件下,再讓反應底物與酶接觸,避免在未達到預設的溫度(pH)時反 應底物已與酶接觸發生反應,影響實驗結果。
(2)探究酵母菌的呼吸方式時:①新配製的質量分數為5%的葡萄糖溶液先加熱煮沸(殺死裡面的微生物、除去溶液中的空氣),等冷卻(防止高溫殺死酵母菌)後再將食用酵母菌加入;
②酵母菌培養液應封口放置一段時間後,待酵母菌將瓶內的氧氣消耗完,再連通盛有澄清石灰水的錐形瓶,以保證檢測到的一定是酵母菌無氧呼吸產生的CO2使澄清的石灰水變混濁。
(3)探究生長素類似物促進插條生根的最適濃度
①裝置的設計應有利於觀察,如觀察促進生根的實驗可以用水培法。
②所設組別除不同濃度的生長素類似物處理外,還要增加一組蒸餾水處理的做空白對照。
(4)探究培養液中的酵母菌數量的動態變化
①從試管中吸出培養液進行計數之前,要輕輕震盪幾次,使酵母菌均勻分布,以確保計數准確,減少誤差。
②該探究不需要設置對照,因為隨著時間的延續,酵母菌種群數量的變化,在時間上形成前後自身對照,但要獲得准確的實驗數據,必須重復實驗,求得平均值。
③對於壓在小方格界線上的酵母菌,應只計算相鄰兩邊及其頂角的酵母菌。
④實驗結束後,用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計數板的做法是錯誤的,正確的方法是浸泡和沖洗。
三、實驗題解答思路和基本解題技巧:
1、認真審題——審准實驗目的和原理:
明確驗證的「生物學事實是什麼,」或「生物學事實」的哪一方面;實驗所依據的生 物學(或其它知識)原理是什麼。如「探索酶活性與溫度關系」的實驗原理為澱粉遇碘變藍,澱粉酶可催化澱粉水解為麥芽糖,麥芽糖遇碘不變藍。
2、找出自變數(實驗變數或實驗條件)和因變數(反應變數):
找出自變數(實驗變數或實驗條件)和因變數(反應變數),以及影響本實驗的無關變數,然後構思實驗變數的控制方法和實驗結果的獲得手段。如驗證「CO2是光合作用合成有機物的必需原料」,首先明確該實驗的條件是CO2,結果是光合作用(合成有機物),影響結果的條件變化應該是CO2的有無兩種情況,那麼對照的設計就應該為空白對照。影響實驗結果的無關變數有溫度、pH、實驗用植物的生長狀況、飢餓處理的環境、吸收CO2的NaOH的量及濃度等因素,這些無關變數中任何一種因素的不恰當處理都會影響實驗結果的准確性和真實性,因此實驗中必須嚴格控制無關變數,做到平衡和消除無關變數對實驗結果的影響。常常採用對照的方法——即在保證各實驗組和對照組的無關變數相同的條件下,觀察實驗變數(實驗條件)的不同情況對反應變數(實驗結果)的影響。
3、實驗對象和實驗條件:
實驗所用的生物學材料,如光合作用所用的葉片、驗證質壁分離所用的成熟植物細胞、鑒定脂肪所用的花生種子等。
實驗條件是完成這一實驗所必需的理化條件及生物學處理方法,如光照、溫度、pH、酶、緩沖劑、離心等。
4、設計實驗方法和步驟:
這一環節要遵循科學性原則、可操作性原則、設計對照原則、單一變數原則、可重復性原則,使實驗有可信度和說服力。
注意:①後面步驟中要用到的東西,如果題目沒有給出,則必須在前面的步驟中准備好,如實驗中要用蔗糖液,而題目中只給出蔗糖,我們就要先配製好蔗糖液;②題目中如果已經給好(如給的是配好的試劑),則不能再配製了。
5、預測實驗結果或分析實驗結果:
二者是有區別的:①預測實驗結果——根據實驗原理和事物間的相互關系,進行理性分析,從而預先猜測可能是什麼樣的結果、有幾種結果可能性,都要事先預測到;②分析實驗結果——是從結果出發去尋找事物間的相互關系,或者推導出一般性的結論或規律等。它是分析應有的實驗結果,對意料之外的結果乃至失敗的情況作出恰當的分析和推論。
二者是相反的兩個過程:因此解決此類問題時要根據題意注意用詞的科學性和准確規范性。當然無論是預測實驗結果還是分析實驗結果,都要既考慮最後的結果,也要考慮中間步驟的結果。
6、注意事項和補救措施:
實驗中若要使用有毒物質,應怎麼使用?加熱酒精應採用水浴法隔水加熱。一旦燃燒怎麼辦?這些注意事項都應該在實驗前有所准備,這些方面常常需要相關學科實驗能力的滲透。
實驗完畢後如果時間容許,還應該從以下方面來回顧回顧:
①實驗原理及方法是否符合題 目要求(正確性 );
②實驗步驟是否科學,有無少做了步驟或順序顛倒的現象;
③有無充分利用實驗條件或超出題目給的實驗條件;
④有無設置對照(參照系)或可能造成誤差;
⑤有無更為簡單的實驗方案——創新實驗得分;
⑥實驗是否具有偶然性——是否符合可重復性原則;
⑦實驗能否順利完成;
⑧實驗的安全性如何。
四、設計型實驗題:
由於高考側重於對實驗能力的考查,設計型實驗題是近幾年高考的一個熱點。因此,我們對實驗的復習,應該立足於對基本實驗方法、實驗技能、實驗思維的強化和鞏固著手,培養我們的實驗分析、實驗改錯、實驗設計等實驗能力。
所謂設計型實驗題——就是要求考生設計實驗原理,選擇實驗器材,安排實驗步驟,設計數據處理的方法及分析實驗現象。包括設計實驗方案、設計實驗步驟、設計實驗改進方法等。主要 考查我們是否理解實驗原理和會分析實驗結果,是否具有靈活運用實驗知識的能力,是否具有在不同情景下遷移知識的能力。
1、生物學實驗的一般程序:
一個完整的生物學實驗包括以下七個基本步驟:
(1)實驗名稱、目的:指出是什麼實驗,明確實驗要解決什麼問題。
(2)假設:是「可能會怎麼樣」,對可見現象提出一種可檢測的解釋。具體為:
(3)預期:在檢測提出的假設以前,先提出實驗的預期結果(一個或幾個假定的結果),若預測沒有實現,則說明假設 不成立;若預測得到實現,則假設成立。
(4)實施實驗過程:根據實驗目的和提出的假設,來設計實驗的具體方法步驟,並按設計的方案進行操作。
(5)觀察和收集數據:客觀如實地觀察、記錄實驗的現象,得出實驗結果,並通過一定方式將實驗結果呈現出來。
(6)分析、推論:對記錄的數據(包括現象、結果)進行整理分析,進行推導得出結論。
(7)交流:寫出實驗報告。
2、生物學實驗設計的要求:
(1)在實驗設計之前,應掌握所研究問題的性質,具備必要的理論知識和基本的實驗技能和技術。
(2)要有明確的實驗目的,根據目的確定研究內容。
(3)實驗設計要科學合理,注意設計合適的實驗變數,控制其他變數,盡量減少實驗誤差,確保實驗得出明確的結果。
(4)設計實驗要注意設置對照,適當增加重復,保證實驗的准確性。
(5)實驗取樣要注意典型性和代表性。
(6)實驗設計要考慮運用統計學進行分析的可能性。分析的樣本要有一定的數量,使所得數據具有代表性和可靠性。
❸ 醫院做的切片檢查是怎麼進行的
從患者身體的病變部位取出小塊組織(根據不同情況可採用鉗取、切除或穿刺吸取等方法)或手術切除標本製成病理切片,觀察細胞和組織的形態結構變化,以確定病變性質,作出病理診斷。
為探討器官、組織或細胞所發生的疾病過程,可採用某種病理形態學檢查的方法,檢查他們所發生的病變,探討病變產生的原因、發病機理、病變的發生發展過程,最後做出病理診斷。
(3)生物學上哪些可以做切片擴展閱讀:
切片檢查已經大量應用於臨床工作及科學研究。在臨床方面主要進行屍體病理檢查及手術病理檢查。手術病理檢查的目的。
為了明確診斷及驗證術前的診斷,提高臨床的診斷水平;診斷明確後,可決定下步治療方案及估計預後,進而提高臨床的治療水平。通過臨床病理分析,也可獲得大量極有價值的科研資料。
單純形態學觀察進行病理診斷的方法,即純定性的方法、形態學的方法僅能進行粗略的定量估計,如根據瘤細胞的核分裂數目,尤其是病理性核分裂來判斷惡性腫瘤的惡性變 。
❹ 生物科學專業一般要做哪些實驗涉及的動物有哪些要不要解剖蛔蟲啊
一般生物科學專業是有解剖課的,內容涉及昆蟲、魚類、鳥類、哺乳類,具體與你們學校所在地理位置有關。
俺學生物的時候,解剖課第一節,就是解剖蛔蟲。警告樓主解剖完蛔蟲後千萬不要吃面條。
其實最惡心的是解剖果蠅的幼蟲,也就是蛆。(這個和個人好惡有關)
除了解剖實驗以外,生物專業的還有分子實驗、細胞實驗、植物實驗、野外試驗等等,除此之外,化學實驗、物理實驗等相關實驗也是要做的,總之,你的生活將在實驗中度過。(這個也許和學校也有關系)
❺ 生物切片怎麼做
①用紗布將玻片擦拭乾凈;
②在潔凈的載玻片上滴一滴清水(動物細胞用0.9%的生理鹽水),水量不宜過多,也不能太少; ③從生物體上取材,放在水滴中;
④對撕取的薄膜要展平,挑取的材料要塗抹幾下,避免細胞重疊,看不清細胞機構;
⑤用鑷子夾起蓋玻片,使它的一側先接觸載玻片上的水滴(為防止產生氣泡),然後緩緩地蓋在要觀察的材料上;
⑥在蓋玻片的一側滴加染液;
⑦在與滴染液相對的一側用吸水紙吸取多餘的染液。
(純手工碼字,希望滿意)
❻ 跪求,真的很感謝 ,石蠟切片製作中 ,封片前制好的切片需要再次脫水嗎。為什麼
需要。
切片一系列工作完成後,就要進行染色和封片了。由於要染色的切片尚包在石蠟中,而所用的染色液都為水溶液,因此在染色之前,必須再度復水。與固定的組織塊脫水、透明的步驟相反,石蠟切片先在二甲苯中溶去石蠟,再經過各級酒精,下行至水。
染色後,如果組織片中有水分,則光不宜通透,在顯微鏡下觀察不清組織的結構,所以必須經過脫水。
給你我們學校的實驗講義看看吧~希望對你有幫助~有不懂的地方問我~
實驗一 石蠟包埋切片技術
實驗目的:1、學習石蠟包埋切片技術的基本原理和基本步驟;
2、掌握石蠟包埋切片技術。
實驗原理:
大家在生物學實驗時,曾經觀察過動物組織和植物組織的切片。通過光學顯微鏡,我們可以觀察到細胞內部的結構(例如細胞核、細胞質、肌肉組織的橫紋等)、細胞相互間的聯系以及組織的構成等。那麼,如何來製作這種切片呢?其過程是比較復雜的,我們利用3—4次實驗來學習組織切片的製作。
大家知道,我們要在顯微鏡下研究生物體的內部結構,在自然狀態下是無法觀察的,因為整個動、植物體大部分都是不透明的,不能直接在顯微鏡下觀察,一定要經過特殊的處理,使要觀察的材料先減少它的厚度和體積,使光線能透過才能用顯微鏡觀察。通常應用的有兩種方法:一種是非切片法,即用物理或化學的方法將生物體組織分離成為單個細胞或薄片,例如我們在生物學實驗曾做過口腔上皮的觀察、洋蔥鱗莖表皮的觀察。這種方法的不足之處在於細胞彼此間相互的聯系不一定觀察到。另外一種為切片法,即用刀將標本切成薄片。
非切片法比較簡單,一學就會,我們這里不作介紹。
切片法也分徒手切片法和切片機切片法。最簡單的切片法是將新鮮植物材料直接用刀切成薄片,稱之為徒手切片法。切片機切片法是用特殊的切片機來切片,切片的厚度可薄到幾個微米。因此,切片機的發明與應用也是細胞學誕生的重要因素。
切片機切組織用的也是刀(切片刀),所要切的組織要有一定的軟硬度,如刀切肉(新鮮、冷凍)。但大部分生物材料比較柔軟,所以為了能切出薄片,必須先使所切材料有一定的軟硬度。一些包埋劑可以達到這個目的,如石蠟,它融化時可滲入到組織內部;凝固時,使整個組織有一定的軟硬度,正好能切出很薄的切片,故稱為石蠟包埋切片法。另外還有火棉膠包埋切片法(火棉膠做包埋劑)、冰凍切片法(使組織冷凍到一定的硬度)等。其中最常用的切片方法還是石蠟包埋切片法,我們這里重點學習石蠟包埋切片技術。
實驗器材:
(一)小鼠、小廣口瓶、標簽、量筒、燒杯、95%酒精、無水酒精、蒸餾水、手術刀、剪刀、鑷子、平皿、石蠟塊、濾紙、甲醛液、苦味酸、冰醋酸、移液管、洗耳球。
(二)恆溫箱、融蠟、紙盒、燙板、支架、酒精燈、火柴、小鑷子、濾紙。(擦載玻片、磨刀、液體石蠟)。
(三)手術刀、木板、酒精燈、火柴、鋸條、木塊、塑料板、切片刀、切片機、毛筆、小鑷子、載玻片、蛋白甘油、恆溫水浴箱、溫度計、大白盤。
實驗步驟:
製作小鼠肝、脾、腎、小腸等切片。
1、取材:取材是指從動物或植物體上割取所要觀察的組織材料,比如植物的莖、葉,動物的肝臟、小腸等。
取材時應注意以下幾點:
(1)新鮮:在割取材料時應愈快愈好,否則動植物體的細胞成分、結構及分布等就會發生改變。
(2)防止人為損傷:如生拉硬拽、擠壓等,以免出現人為損傷。
(3)大小:0.5 cm × 0.5 cm × 0.2cm。
2、固定:機體死亡或組織離體後,組織細胞由於血液供應停止,即可發生缺氧,導致生物氧化過程停止。相反,細胞內的無氧酵解酶類活躍,使組織內蛋白質、糖、脂肪降解,導致組織發生自溶。另外,組織也可因污染細菌而發生腐敗。因此,為了使細胞和組織結構保持生活時的狀態,必須進行適當的固定。固定的目的在於保存組織內細胞的形態、結構及其組成,使其與生活時相似。
固定組織的物質——固定劑——具有凝固或沉澱組織蛋白的作用,因此能抑制酵解酶類的活動和細菌的繁殖,從而呈現對組織的固定作用。
固定劑的種類很多,最常見的有乙醇、甲醛、冰醋酸、苦味酸、鉻酸、重鉻酸鉀、氯化汞和鋨酸等8種。各種固定劑對蛋白質、脂肪、糖等作用不同,因此,單一的固定劑不能保存所有的成分,故多用混合固定劑。
各種書籍對固定劑的介紹特別多,如化學性質、固定的原理、固定組織的優缺點等,由於時間的所限,我們這里不作詳細介紹,僅介紹幾種常見的固定液及其配方和用途。
(1)10%福爾馬林液:1份甲醛液 + 9份蒸餾水
市場上出售的甲醛液約含37-40%的甲醛,10%福爾馬林液實際上僅含3.7-4.0%的甲醛。
適用范圍:各種組織。但是經10%福爾馬林液固定的組織,細胞核染色較好,而細胞質染色較差。
處理:組織塊一般固定16-24h,長時間亦可,甚至可用來長期保存組織塊。短時間固定的組織塊不需水洗,可直接轉入70%酒精脫水。
(2)Bouin氏液:苦味酸飽和水溶液(1.22%) 75ml (15)
甲醛液 25ml (5)
冰醋酸 5ml (1)
適用范圍:各種動物組織及植物組織的根尖,是動物組織良好的固定液。
處理:固定24h,也可在此液長期保存。流水沖洗或不經水洗直接入70%酒精脫水。
(3)Zenker氏液: 甲液:氯化汞(升汞) 5g
重鉻酸鉀 2.5g
硫酸鈉 1g
蒸餾水 100ml
乙液:冰醋酸 5ml
使用前將甲、乙兩液混合。
適用范圍:為一般動物組織的優良固定液,經其固定的組織,細胞核及細胞質染色頗為清晰。
處理:固定時間為16-24h,然後流水沖洗一夜以洗去氯化汞,再入70%酒精脫水。切片染色前要用碘液除去汞沉澱。
(4)Gendre氏液: 苦味酸飽和酒精液(8.96g/100ml95%酒精) 85ml
甲醛液 10ml
冰醋酸 5ml
適用范圍:用於檢查動物組織中的糖原(因為糖原溶於水)。
處理:固定3-6h,直接轉入95%酒精脫水。
(5)Carnoy氏液: 無水乙醇 60ml
三氯甲烷 30ml
冰醋酸 10ml
適用范圍:用於檢查動物組織的核酸、糖原等。
處理:固定2-6h,直接轉入95%酒精脫水。
還有多種多樣的其它固定液。固定液的選擇應根據所要固定的材料以及檢查的目的而定。
3、沖洗:材料自固定液中取出後,需立即沖洗,使其中所有的固定液全部除去,以妨礙染色。
有些固定液,如10%福爾馬林液、Bouin氏液固定的材料,若時間較短的話可不必沖洗。但時間過長亦需沖洗。
沖洗的方法:組織塊放在瓶內,膠管插入瓶內接通自來水,瓶口用紗布包住。流水沖洗一夜,即能達到沖洗的目的。
4、脫水:脫水的目的在於使組織中的水分完全除去。因為組織塊將來要在石蠟
中包埋,而水和石蠟是不相溶的。必須經過脫水後,才能進入包埋階段。
常用的脫水劑有乙醇、丙酮、正丁醇等,最常用的還是乙醇。利用脫水劑吸水的特性,在各級濃度脫水劑中逐漸吸取組織中的水分。乙醇脫水的過程一般從70%乙醇開始,經80%、90%、95%、100%(二次)而完成脫水過程。每向後轉移前,須先將組織塊上的液體用吸水紙吸干,以免影響後續乙醇的濃度。
脫水時應注意:(1)在高濃度或無水乙醇中,每級停留的時間不宜太長,否則可使組織收縮變脆,影響切片;(2)如需過夜,應停留在70%乙醇中,也可長期保存,可防止因時間倒不開而影響後續步驟。
5、透明:脫水後是否可以進入包埋呢?但因脫水劑與石蠟也不相溶,因此在包
埋前,需要一種既能溶於脫水劑又能溶於石蠟的物質——透明劑——來起中間置
換作用。
所以,透明的目的在於使組織中的乙醇或丙酮被透明劑所代替,以使石蠟能很順利地進入組織中。另外,還能增強組織的折光系數,故稱透明劑。
透明劑的種類很多,常用的有二甲苯、甲苯、苯等。二甲苯為最常用的透明劑,二甲苯能溶於醇及醚,亦為石蠟溶劑,但不溶於水,它的透明力很強。
透明過程:一般經過1/2二甲苯-1/2無水乙醇,兩次二甲苯。
透明徹底的標准:胃、腸、結締組織等比較透明;肝、腎、心、肌肉等組織呈暗紅色浸油狀態,則說明脫水、透明良好。如果組織進入二甲苯30min以後還不變色,或中心有白色,說明水分未脫凈,應返回無水乙醇繼續脫水。透明這一步至關重要,若透明時間不足,則石蠟進不去,不能切片;若透明時間過長,則使組織收縮變脆、變硬,切片易碎。這一步要靠經驗。
6、浸蠟:浸蠟就是將石蠟透入整個組織的過程。
所謂石蠟包埋切片法,是用石蠟來浸透、包埋組織塊,再進行切片和染色的
製片方法。
石蠟為最常用的包埋劑,有幾種不同熔點的石蠟,通常所用的石蠟的熔點為54-58℃。
浸蠟過程:在60℃的溫箱內已融化的石蠟中經兩次各1h,使石蠟浸透組織。
浸蠟時注意溫度不宜過高,浸蠟時間亦不宜過長,否則會引起組織變硬、變脆,影響切片。
7、包埋:包埋就是被石蠟浸透的組織連同溶化的石蠟,一起倒入一定形狀的器皿(如紙盒、平皿)中,然後使其凝固成蠟塊的過程。
包埋的過程:(1)折疊紙盒;
(2)用酒精燈加熱溫台及紙盒;
(3)往紙盒中倒入溶化的石蠟;
(4)放入組織塊,切面向下,並撥正位置;
(5)蠟塊凝固。
從取材到包埋是一個連續的過程,往往連續幾天,如果沒有計劃、沒有完善的安排,就有可能和其他上課時間發生沖突,或造成半夜出勤。有時單憑記憶,把前後順序顛倒或超過了規定時間,會造成實驗失敗。因此需預先編制一個日程表。
【建議時間】
乙醇脫水:70%:16:30
80%:第二天7:20
90%:9:20
95%:11:00
100%(Ⅰ):12:00
100%(Ⅱ):13:00
透明:1/2二甲苯-1/2無水乙醇:14:00
二甲苯(Ⅰ):14:20
二甲苯(Ⅱ):14:40
浸蠟:石蠟(Ⅰ):15:00
石蠟(Ⅱ):16:00
包埋:17:00
注意事項:(1)動作要迅速;(2)融蠟別滴到桌面、地上。
8、切片:在包埋後,就可以進行切片。在切片之前,還需對包埋好的組織塊進行修整,並貼附於木塊上,才能進行切片。
修塊:以每一組織塊為單位,用小刀將組織塊大體修成長方形或梯形,組織的周圍須留1-2mm寬的蠟邊。
固著:用酒精燈燒熱金屬片,將組織塊切面的對立面稍燙熔一下,並立即貼於木塊上。
切片機的構造:
切片機是用來做各種組織切片的一種儀器,其樣式很多,性能也不一樣,一般可分為兩大類型,即滑行式切片機與旋轉式切片機。我們使用的是旋轉式切片機。其主要結構分為3部分:(1)控制切片厚度的微動裝置;(2)供裝置切片刀的夾刀部分;(3)供裝置組織塊的夾物部分。旋轉輪每旋轉一次,微動裝置就按所調節好的切片厚度以水平方向將組織塊向前推進一片的厚度。
切片操作:
(1)固定切片刀:刀刃向上,保持水平。調好角度,一般在4-6度。
(2)固定組織塊。
(3)調整所需要的切片厚度:一般在6-10微米。
(4)移動持刀器,或拔開齒輪上的牽引鉤,前後轉動齒輪以移動組織塊固定器,調節組織塊表面和刀刃的距離,以剛要接近時為止。
(5)調整組織塊與刀刃之間的角度和位置:組織塊的切面及上下邊須與刀刃平行。
(6)粗切:右手搖輪,左手轉動齒輪,慢慢將組織塊切到組織本身。
(7)切片:右手轉動搖輪,轉一圈可切下一片,切第二片與第一片連在一起,即成連續切片。左手用鑷子或毛筆提起切片的下端,輕輕向自身方向拽,使切片成連續的帶狀。
(8)展片:停止切片,右手用另一支毛筆輕輕將蠟帶跳起,靠刀刃的一面向下,慢慢接觸40-45℃的水面,藉助水的表面張力使其在水面展開。如有小的皺褶,用小鑷子輕輕分開。應注意:水溫過高,易使切片全部融化;水溫過低,切片不宜伸展。
(9)貼片:即將切片貼在載玻片上。先將連續切片分成一片或小段。將載玻片1/2處均勻塗一層薄薄的蛋白甘油(等量的雞蛋清和甘油混合而成,防止脫片。切勿塗得過多!),將載玻片垂直插入水中,以塗有蛋白甘油的面貼近組織片,提起載玻片使組織片貼附在載玻片上。用小鑷子將切片擺在載玻片1/3和2/3的交界處,並擺正位置。然後在52-60℃恆溫箱烤乾。
整個石蠟包埋切片技術至此全部結束。
實驗二 蘇木精-伊紅染色
實驗目的:1、了解染色的基本原理和基本方法;
2、掌握蘇木精-伊紅染色方法。
實驗原理:
一、染料的一般知識
1、染料的染色原理:(1)化學作用:染料的性質有酸、鹼、中性之別,那麼組織中的鹼性部分(如細胞質)易和酸性染料親和而發生作用,組織中的酸性部分(如染色質)易和鹼性染料親和而發生作用。(2)物理作用:指吸附或溶解作用。組織蛋白和某些染料有相互吸附的作用。
2、媒染劑、促染劑和分化劑
媒染劑:某些天然染料(如蘇木精),本身無著色性,要與其他物質結合後才具有著色性,這些被結合的物質稱為媒染劑,如許多鐵鹽、鉻鹽及鉀鹽等。
促染劑:是促進染料著色性的物質,如冰醋酸是伊紅的促染劑。
分化劑:能使切片上需要顯示的結構清晰,而使不需要顯示的結構脫去顏色的物質。如1%鹽酸酒精。
一、蘇木精-伊紅染色(H.E染色)
所做出的石蠟包埋切片可應用的染色方法很多,應根據不同的檢查目的而選用不同的染色方法。而最為常用的染色法為H.E染色。
1、蘇木精(蘇木素、蘇木紫)(hematoxylin):為從蘇木中提取。蘇木精本身不是染料,不能直接染色,必須經氧化才能染色。可以在空氣中自然氧化,但需時很長,所以一般都是加氧化劑(如碘酸鈉)氧化。同時,被染材料又須經媒染劑作用後才有著色能力,所以在配製蘇木精染液時,都加有媒染劑。蘇木精液主要著染細胞核。
有數種不同配方的蘇木精液。
Mayer(梅耶)氏蘇木精液:
蘇木素 1g
硫酸鋁鉀 50g (媒染劑)
碘酸鈉 0.2g
水合氯醛 50g
檸檬酸 1g
蒸餾水 1000ml
2、伊紅(曙紅)(eosin):又分幾種,如伊紅Y、伊紅B等。
伊紅對細胞質、肌纖維、膠原纖維具有著色性。
一般用0.5%伊紅/70%乙醇液或1%伊紅水溶液。
由於蘇木精著染細胞核,伊紅著染細胞質,所以這種方法稱為雙重對比染色法。
實驗材料:石蠟切片、蓋玻片、小鑷子、大鑷子、樹膠、濾紙、紗布、染色缸、二甲苯、乙醇系列、Mayer氏蘇木精液、0.5%伊紅酒精液(或1%伊紅水溶液)、1%鹽酸酒精、蒸餾水、顯微鏡。
實驗步驟:
1、切片脫蠟、復水:
由於要染色的切片尚包在石蠟之中,而所用的染色液都為水溶液,因此在染色之前,必須再度復水。與固定的組織塊脫水、透明的步驟相反,石蠟切片先在二甲苯中溶去石蠟,再經過各級酒精,下行至水。
把玻片放入盛有二甲苯的染色缸中以溶去石蠟(20min),再經第二缸二甲苯(10min)。經100%、95%、90%、80%、70%各級酒精、蒸餾水入水,每級3-5min。
2、入蘇木精液染5-7min。
3、流水洗去附著染液,(在1%鹽酸酒精中蘸3-4下),然後流水沖洗20min使切片由淡紅色變為灰蘭色。
4、入伊紅染液5-7min。
5、脫水、透明:
如果組織片中有水分,則光不宜通透,在顯微鏡下觀察不清組織的結構,所以必須經過脫水。透明劑能增強組織的折光系數。這樣,才能在顯微鏡下觀察。
在70%、80%、90%的酒精中每級各蘸3—4下,再經95%、100%Ⅰ、100%Ⅱ梯度酒精,每級各5min。在二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中分別透明10min。
6、封片:
從二甲苯中取出載玻片,未等二甲苯揮發,在組織切片上滴加適量樹膠,上面再加蓋玻片(傾斜放下)封固。
封片目的:(1)便於保存;(2)應用合適折光率的封藏劑使組織結構能在鏡下很清晰地顯示出來。
結果:細胞核呈藍色至深藍色,細胞質呈淡紅色或紅色。
作業:1、為什麼生物體的組織要經過如此繁瑣的步驟才能觀察其組織結構?
2、查閱文獻,有哪些文章採用石蠟包埋切片和H.E.染色?
3、通過查閱文獻,談一下石蠟包埋切片和H.E.染色的用途。
❼ 生物學上切片和裝片有什麼區別切片和裝片都有哪些種類
兩個概念。。。
切片是把材料製作成能用顯微鏡觀察的薄片,一般有徒手,石蠟,冷凍等
裝片是做到載玻片上去,一般是普通裝片,塗片,等
❽ 中國哪些高校生物可以用顯微鏡觀察小腸橫切
中國哪些高校生物可以用顯微鏡觀察小腸橫切的問題是這樣的。
只要有醫學專業生物學專業的高校都可以觀察小腸橫切。
如果單純為了觀察小腸橫切,
不必追求大學里去看,
初學生物實驗室就可以做到。
初中生物實驗室都有顯微鏡,
也有小腸橫切永久切片,
這里就完全可以觀察。
❾ 生物學上切片和裝片有什麼區別切片和裝片都有哪些種類
你好!
切片是要用刀切的,有徒手切片和切片機切片兩種
裝片不需要切,一般是撕或是整個裝上,分為臨時裝片和永久裝片
如果對你有幫助,望採納。
❿ 細胞生物學一般做些什麼實驗
細胞原代培養,傳代培養,流式細胞儀測定細胞數目及檢測凋亡細胞等等。