分離生物大分子的注意事項有哪些

❶ 分離，純化生物大分子的依據是什麼其相應的方法和原理是什麼

生物大分子的分離純化方法多種多樣，主要是利用它們之間特異性的差異，如分子的大小、形狀、酸鹼性、溶解性、溶解度、極性、電荷和與其他分子的親和性等。
 各種方法的基本原理可以歸納為兩個方面：
 ①利用混合物中幾個組分分配系數的差異，把它們分配到兩個或幾個相中，如鹽析、有機溶劑沉澱、層析和結晶等；
 ②將混合物置於某一物相（大多數是液相）中，通過物理力場的作用，使各組分分配於不同的區域，從而達到分離的目的，如電泳、離心、超濾等。
 目前純化蛋白質等生物大分子的關鍵技術是電泳、層析和高速與超速離心。

❷ 物質分離純化的總體思路是什麼在進行生物大分子的分離純化時應該注意什麼

酶分離純化的一般原則是：保證酶的活性正常保持，不失活，避免在極端條件下操作，如有必要還要添加一定的保護劑。
雖然酶大多是蛋白質，但少數具有生物催化功能的分子並非為蛋白質，有一些被稱為核酶的RNA分子也具有催化功能。此外，通過人工合成所謂人工酶也具有與酶類似的催化活性，包括人工合成的DNA。 有人認為酶應定義為具有催化功能的生物大分子，即生物催化劑。
酶的催化活性會受其他分子影響：抑制劑是可以降低酶活性的分子；激活劑則是可以增加酶活性的分子。有許多葯物和毒葯就是酶的抑制劑。酶的活性還可以被溫度、化學環境（如pH值）、底物濃度以及電磁波（如微波）等許多因素所影響。

❸ 如何進行生物大分子的分離提純

用凝膠過濾層析法
是最好的方法之一。
可以分離不同大小的物質例如蛋白質混合物、膠體混合物等等。
大分子物質先出來，小分子物質後出來。

❹ 請問分子生物學實驗室一般有哪些注意事項

很多試劑是有毒的
1，進行核酸電泳的地方
有EB，強致癌
2，蛋白電泳的地方
有丙烯醯胺，神經毒劑
兩個東西都是通過皮膚吸收
要小心

❺ 提取生物大分子的基本思路是什麼對於dna的粗提取而言

提取生物大分子的基本思路是將被分離的生物大分子與其他物質分開，並加以純化。

在DNA的粗提取實驗中，其原理是DNA在0.14mol/L的氯化鈉溶液中溶解度最低，而蛋白質此時的溶解度高的特點，可以使DNA與蛋白質分離，形成沉澱析出，通過過濾，得到粗提取的濾出物DNA。再利用DNA不溶於酒精，但細胞中的其他物質可溶於酒精的特點，進一步提取出含雜質較少的DNA。

❻ 拮抗微生物分離純化的注意事項

拮抗微生物分離純化的注意事項：注意防止交叉污染。

操作無菌，先粗篩根據不同的微生物對底物的應用，後復篩定量測相應的酶活。無菌操作、純培養技術、單孢分離技術、細胞染色技術、顯微觀察技術，這些是微生物分離純化操作所必須的技術，也是必須注意的問題。

分離技術主要是稀釋和選擇培養。

稀釋是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體，使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞，並使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法。

如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時，需要結合使用選擇培養法，即選用僅適合於所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體，改變群體中各類微生物的比例，以達到分離的目的。

❼ 設計從生物樣品中分離純化生物大分子實驗的原則

這個問題比較大
首先你要確認要分離的生物大分子是什麼
核酸\蛋白質\多糖\脂類
各種生物大分子的提取和純化路線不一樣,請標明.
蛋白質多採用層析或者聚丙烯醯胺凝膠電泳的方法來分離，如果說實驗條件不理想，也可以採用鹽析的辦法，但是只能活得粗提取液，層析的辦法有很多種，最好的是採用親和層析，當然前提是你要找到合適的載體和配基，聚丙烯醯胺凝膠電泳可以適合很多種分離方法，如果按照等電點分離，則可採用等電聚焦，如果使用分子量大小進行分離，則可採用SDS-PAGE，當然，也可以採用雙向電泳，同時利用等點點和分子量進行分離。

❽ 在微生物實驗中分離純化操作過程中注意哪些問題

無菌操作、純培養技術、單孢分離技術、細胞染色技術、顯微觀察技術，這些是微生物分離純化操作所必須的技術，也是必須注意的問題。

❾ 分子生物學實驗室一般有哪些注意事項

目前，分子生物學飛速發展，分子生物學相關的理論和技術已深入到生命科學的各個領域，一些常用的技術，如基因組DNA的分離純化，質粒DNA的抽提及純化，RNA的提取，PCR擴增，Southern blot等成為分子生物學研究的強有力工具，為分子生物學的發展起了巨大的推動作用，然後，這些實驗操作技術都涉及到氯仿、DEPC、同位素等有毒有害或具放射性的物質，對環境和人身安全也造成巨大的威脅。因此，弄清這些有害有毒物質的作用，加強實驗室安全管理，建立良好的制度和處理，保證分子生物學實驗室成為真正的科研陣地。
放射性物質的處理：放射性同位素技術具有靈敏、簡便和廉價等優點，在分子生物學實驗室應用普遍，但由於放射性同位素的輻射會給人體造成損傷，如果使用不當或操作不規范，會造成環境污染，甚至損傷人員。在進行同位素操作時一定要注意個人防護，包括使用隔離、專用衣帽手套及防護背心、擋板等。對放射性同位素的污染進行安全性教育，實行責任到人的做法，對放射性物質統一保管、集中存放、集中處理的做法。在定購同位素時，根據需要量進行訂購。α-31p半衰期為14.5天，在southern blotting應用較廣，是危害較大的放射性物質。DNA雜交時，在探針標記、洗膜等幾個階段都涉及同位素。對含α-31p固體廢物，放入鐵皮箱10個半衰期(約半年)後埋到指定的地點：對於含α-31p濃度較高的液體廢物(如首次洗膜液)，在厚實的朔料桶放置8個半衰期後倒入專用的下水道；含α-31p濃度較低的液體廢物(如二、三次洗膜液)，則直接倒入專用的下水道。

4.3常見的有毒物質的處理：溴化乙錠、Trizol、丙烯醯氨、DEPC、甲醯氨等毒性高、環境危害大的物質，分類收集後統一處理。

4.3.1 EB(Ethidiunl bromide，溴化乙錠)：EB是一種強烈誘變劑並有中度毒性，應戴手套操作，對於含有EB的溶液也不應直接倒下水道，用後妥善凈化處理：EB含量大幹0.5μg/ml溶液先用水將EB濃度稀釋至0.5μg/ml以下，每100ml溶液加入100mg活性碳。不時輕輕搖盪混勻，室溫放置1小時，濾紙過濾將活性碳與濾紙密封在塑料袋中作為有害廢物丟棄。或用專用一次性染料清除袋(Gene有限公司)吸附過夜，再焚燒袋子即可。EB接觸物，如抹布、槍頭等埋入地下。

4.3.2 Trizol：提取組織和細胞RNA的一種重要試劑，在提取RNA時一定要在通風進行。如皮膚接觸Trizol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，廢液埋入地下。

4.3.3 DEPC(Diethylprocarbonate，二乙基焦碳酸酯)：RNA酶的強抑制劑，一種潛在的致癌物質。操作時戴口罩。在通風櫥中進行。沾到手上立即沖洗，廢液通過廢液道排泄。

4.3.4 CHCl3(ChIoroform，氯仿)：常用於DNA和RNA提取，對皮膚、眼睛、黏膜和呼吸道有強烈的刺激作用和腐蝕性，易損害肝和腎。操作時戴手套在通風櫥里進行，廢液收集後埋入地下。

4.3.5 Acrylamide(丙烯醯胺)：DNA測序、SSR及蛋白質分離等技術中作電泳支持物，具神經毒性，聚合後毒性消失。操作時戴手套在通風櫥內進行，聚合後的聚丙烯醯胺凝膠沒有毒性，可隨普通垃圾一起扔掉，千萬不要倒入下水道。

❿ 生物大分子的制備前要做好哪些准備工作

生物大分子的制備前要做好哪些准備工作
生物大分子的制備通常可按以下步驟進行：
①確定要制備的生物大分子的目的和要求,是進行科研、開發還是要發現新的物質.
②建立相應的可靠的分析測定方法.主要有兩類：即生物學和物理、化學的測定方法.生物學的測定法主要有酶的各種測活方法、蛋白質含量的各種測定法、免疫化 學方法、放射性同位素示蹤法等；物理、化學方法主要有比色法、氣相色譜和液相色譜法、光譜法、電泳法、以及核磁共振等.
③通過文獻調研和預備性實驗,掌握生物大分子目的產物的物理化學性質.
④生物材料的破碎和預處理.
⑤分離純化方案的選擇和探索,這是最困難的過程.制備生物大分子的分離純化方法多種多樣,如鹽析、有機溶劑沉澱、層析和結晶、電泳、離心、超濾等.目前純 化蛋白質等生物大分子的關鍵技術是電泳、層析和高速與超速離心.在實際工作中往往要綜合運用多種方法,才能制備出高純度的生物大分子.
⑥生物大分子制備物的均一性（即純度）的鑒定.蛋白質和酶製成品純度的鑒定最常用的方法是：SDS－聚丙烯醯胺凝膠電泳和等電聚焦電泳,如能再用高效液相 色譜（HPLC）和毛細管電泳（CE）進行聯合鑒定則更為理想,必要時再做N－末端氨基酸殘基的分析鑒定.核酸的純度鑒定通常採用瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯 醯胺凝膠電泳,但最方便的還是紫外吸收法,即測定樣品在pH 7.0時260nm與280nm的吸光度（A260和A280）,從A260/A280的比值即可判斷核酸樣品的純度.
⑦產物的濃縮,乾燥和保存.