如何分離微生物細胞

⑴ 微生物的分離平板塗布法和平板劃線法分離微生物的區別

微生物的分離平板塗布法和平板劃線法分離微生物的區別
由接種環以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表面得到單菌落。
先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然後分別取不同稀釋液少許，與已溶化並冷卻至 45 ℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出出菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。 稀釋塗布法：
優點：可以計數，可以觀察菌落特徵。
缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不幹燥效果不好，容易蔓延。
一般用於平板培養基的回收率計數！！

⑵ 如何從復雜的土壤樣本中分離我們所需要的目標微生物

如何從復雜的土壤樣本中分離我們所需要的目標微生物？
有機肥之中有機質的分解轉化是一個復雜的過程，微生物活動在分解轉化過程之中起著重要作用。土壤環境非常適合微生物活動，所以土壤之中天然微生物數量最多。因為土壤之中微生物種類繁多，數量大；一克土壤之中，微生物有幾十種到幾百種，幾億到幾十億個，土壤微生物繁殖迅速，在有機質的轉化和分解之中起著重要作用。土壤微生物包括細菌、放線菌、真菌和藻類。

（1）細菌



細菌是一種單細胞微生物，是土壤之中分布最廣、數量最多的微生物。細菌有三種基本形態：球形、桿狀和螺旋形；有球菌、桿菌和螺旋體（40種）；包括弧菌&41；三種類型。土壤細菌按其營養類型可分為自養菌、兼性自養菌和異養菌。

（2） 真菌



土壤真菌分布廣泛，適應廣泛的酸性條件，在PH4.0條件之下生長良好，對森林土壤有機質的轉化起著重要作用。土壤真菌是異養的。它們必須從土壤有機質之中獲取能量和碳源，並在發育過程之中需要良好的供氧。根據真菌與樹木的關系及其營養類型，真菌可分為腐生真菌、寄生真菌和共生真菌。

（3） 放線菌



放線菌是細長的菌絲體，呈分枝狀或放射狀。它們在土壤之中僅次於細菌。大多數是腐生植物。許多放線菌能分解纖維素、澱粉、脂肪、木質素和蛋白質。

⑶ 微生物獲得純培養的方法理論依據是什麼

微生物純培養的方法
一、固體培養基分離
1、稀釋倒平板
特點：菌落分離較為均勻，進行微生物計數結果相對准確。但操作相對麻煩，熱敏感菌有時易被燙死，而嚴格好氧菌也可能因被固定在培養基中生長受到影響。
2、塗布平板法
特點：操作相對簡單，是較常使用的常規方法。但有時會因塗布不均勻使某些部位的菌落不能分開，進行微生物計數時需對稀釋和塗布過程的操作特別注意，否則不易得到准確的結果。
3、平板劃線法
特點：操作簡單，多用於對已有純培養的確認和再次分離。
應用：這三種方法可用於所有能在固體培養基表面形成菌落的微生物的純培養分離。並且，通過選用適當的選擇平板及培養條件，可直接分離各種具有特定生理特徵的微生物。和厭氧罐或厭氧手套箱技術結合，這3種方法也可用於獲得各種厭氧菌的純培養。
4、稀釋搖管法
特點：稀釋倒平板法的一種變通形式，但由於菌落形成在瓊脂柱的中間，觀察和挑取都相對困難。
應用：在缺乏專業的厭氧操作設備的情況下對嚴格厭氧菌進行分離和觀察。
二、液體培養基分離
1、稀釋法
特點：工作量大，是否獲得純培養需依靠統計學的推測。
應用：不能或不易在固體培養基上生長的微生物進行純培養分離或數量統計。
2、富集培養
特點：一般不能直接獲得微生物的純培養，在通過富集培養使原本在自然環境中佔少數的微生物的數量大大提高後，需再通過平板法進行相應微生物純培養的分離和檢測。 應用：
（1）根據某種微生物的特殊生長要求，按照意願從自然界中對這種微生物進行有針對性的有效分離；
（2）分離培養出由科學家設計的特定環境中能生長的微生物，盡管我們並不知道什麼微生物能在這種特定的環境中生長。
三、顯微操作
單細胞（孢子）挑取
特點：分離過程直觀，可靠，但對儀器和操作技術要求較高，多限於高度專業化的科學研究。而挑取的微生物單細胞或孢子需經固體或液體培養基培養後才能獲得其純培養物。 應用：從樣品中直接分離所需的微生物細胞或孢子，獲得其純培養。

⑷ 分離純化微生物的方法有哪些各方法適用分離什麼菌種

主要有：劃線法、倒平板法、塗布法，根據分離的菌種選擇不同的培養基。

稀釋混合倒平板法、稀釋塗布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用，不需要特殊的儀器設備，分離純化效果好。

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學的研究及應用中，不僅需要通過分離。

分離技術

主要是稀釋和選擇培養，稀釋是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體，使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞，並使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法。

如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時，需要結合使用選擇培養法，即選用僅適合於所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體，改變群體中各類微生物的比例，以達到分離的目的。為保證分離到的微生物是純培養，分離時必須用。

以上內容參考：網路-微生物分離純化

⑸ 我想知道細胞破碎的方法及各種方法的原理和優缺點

機械法：主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法，常用的器械有組織搗碎機、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。
1. 組織搗碎機
將材料配成稀糊狀液，放置於筒內約1/3體積，蓋緊筒蓋，將調速器先撥至最慢處，開動開關後，逐步加速至所需速度。一般用於動物組織、植物肉質種子、柔嫩的葉芽等，轉速可高達10000rpm/M以上。由於旋轉刀片的機械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
2. 勻漿器
先將剪碎的組織置於管中，再套入研桿來回研磨，上下移動，即可將細胞研碎。勻漿器的研缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。製作勻漿器的材料，除玻璃外，還可以用硬質塑料、不銹鋼、人造熒光樹脂等。此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高，適用於量少和動物臟器組織。
存在的問題；較易造成堵塞的團狀或絲狀真菌，較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細胞器，質地堅硬，易損傷勻漿閥，也不適合用該法處理。
3. 研缽
多用於細菌或其他堅硬植物材料，研磨時常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨劑，以提高研磨效果。
4. 細菌磨
是一種改良了的研磨器，比研缽具有更大的研磨面積，而且低部有出口。操作時先把細菌和研磨粉調成糊狀，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可將細菌細胞完全磨碎。

物理法：主要通過各種物理因素使組織細胞破碎的方法。在生化制備中常用的方法有：
1. 反復凍溶法
原理：因突然冷凍，細胞內冰晶的形成及 胞內外溶劑濃度的突然改變而破壞細胞。
方法：將待破碎的細胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復幾次，由於細胞內冰粒形成和剩餘細胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細胞結構破碎。
特點：此法適用於組織細胞，多用於動物性材料，對微生物細胞作用較差。
2. 急熱驟冷法
將材料投入沸水中，維持85-90分鍾，至水浴中急速冷卻，此法可用於細菌及病毒材料。
3. 超聲波處理
用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震盪破裂，此法多適用於微生物材料，用大腸桿菌制備各種酶，常選用50-100毫克菌體/毫升濃度，頻高於15～20KHz的超聲波在高強度聲能輸入下可以進行細胞破碎。其破碎機理：可能與空化現象引起的沖擊波和剪切力有關。超聲破碎的效率與聲頻、聲能、處理時間、細胞濃度及首種類型等因素有關。
特點：操作簡單，重復性較好，節省時間；多用於微生物和組織細胞的破碎。
存在問題：超聲波破碎在實驗室規模應用較普遍，處理少量樣品時操作簡便，液量損失少，但是超聲波產生的化學自由基團能使某些敏感性活性物質變性失活。而且大容量裝置聲能傳遞，散熱均有困難，應採取相應降溫措施。對超聲波敏感和核酸應慎用。空化作用是細胞破壞的直接原因，同時會產生活性氧，所以要加一些巰基保護劑。

化學及生物化學法：
1. 自溶法
在一定PH和適當的溫度下，利用組織細胞內自身的酶系統將細胞破碎的方法。此過程需較長時間，常用少量防腐劑如甲苯、氯仿等防止細胞的污染。
2. 酶溶法
利用各種水解酶，如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂酶等，將細胞壁分解，使細胞內含物釋放出來。有些細菌對溶菌酶不敏感，加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理後，使之轉為對溶菌酶敏感而溶解。
特點：
a) 此法適用多種微生物；
b) 具有作用條件溫和；
c) 內含物成分不易受到破壞；
d) 細胞壁損壞的程度可以控制。
存在的問題：易造成產物抑製作用，這可能是導致胞內物質釋放率低的一個重要因素。而且溶酶價格高，限制了大規模利用。若回收溶酶，則又增加百分離純化溶酶的操作。另外酶溶法通用性差，不同菌種需選擇不同的酶。有一定局限性，不適宜大量的蛋白質提取，給進一步純化帶來困難。
3. 化學滲透法
某些有機溶劑（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等化學葯品都可以改變細胞壁或膜的通透性從而使內合物有選擇地滲透出來。其作用機理；化學滲透取決於化學試劑的類型以及細胞壁和膜的結構與組成。
特點：多用於破碎細菌，且作用比較溫和；提取核酸時，常用此法破碎細胞。
存在的問題：時間長，效率低；化學試劑毒性較強，同時對產物也有毒害作用，進一步分離時需要用透析等方法除去這些試劑；通用性差：某種試劑只能作用於某些特定類型的微生物細胞。
小結
無論用哪一種方法破碎組織細胞，都會使細胞內蛋白質或核酸水解酶釋放到溶液中，使大分子生物降解，導致天然物質量的減少，加入二異丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或減慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺醯氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，還可通過選擇pH、溫度或離子強度等，使這些條件都要適合於目的物質的提取。

⑹ 如何分離培養生長速度緩慢的微生物

富集培養法的方法和原理非常簡單。我們可以創造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方面遠遠超過其他微生物。所創造的條件包括選擇最適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培養基和培養條件下，經過多次重復移種，最後富集的菌株很容易在固體培養基上長出單菌落。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中，使其大量生長

⑺ 請問：怎樣分離提純微生物

1. 稀釋塗布平板法
(1) 倒平板 將肉膏蛋白腖瓊脂培養基， 高氏Ⅰ號瓊脂培養基；馬丁氏瓊脂培養基加熱溶化，待冷至55~60℃， 高氏Ⅰ號瓊脂培養基加入10%酚數滴，馬丁氏瓊脂培養基加入鏈黴素溶液。混勻後分別倒平板，每種培養基倒三皿；
(2) 制備土壤稀釋溶液 稱取土樣10g，放入盛有90ml無菌水並帶入玻璃珠的三角燒瓶，振動約20min，使土樣與水分混合，將細胞分散.用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，然後用無菌吸管從此試管中吸取1ml加入另一個盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此推製成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6不同稀釋的土壤溶液；
(3) 塗布 將上述每種培養基的三個平板地面分別用記號筆寫上10-4，10-5，10-6三種稀釋度，然後用無菌吸管分別由10-4，10-5，10-6三管土壤稀釋液中各取0.1ml對號放入已寫好室溫下靜置5~10min，使菌液吸附進培養基；
(4) 培養 將高氏Ⅰ號瓊脂培養基平板;馬丁氏瓊脂培養基平板倒置於28℃溫室中培養3~5day，肉膏蛋白腖平板倒置於37℃溫室中培養2~3day；
(5) 挑菌落 將培養後長出的單個菌落分別挑取少許細胞接種到上述三種培養基的斜面上，分別置28℃和37℃溫室培養，大菌苔長出後，檢查其特徵是否一致，同時將細胞塗片染色後用顯微鏡檢查是為單一的微生物。若發現有雜菌，需要再一次進行分離、純化，直到獲得純培養。
2.平板劃線分離法
(1)倒平板 按稀釋塗布平板倒平板，並用記號標明培養基名稱，土樣編號和實驗日期；
(2) 劃線 在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環，挑取上述的土壤懸液一環在平板上劃線.劃線的方法很多，但無論採用那種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋，使之形成單個菌落；
(3) 挑菌落 同稀釋塗布平板法，一直到分離的微生物認為純化為止。

⑻ 如何從微生物細胞中分離和純化色素

可以用萃取分離呀。或者用有機溶劑，把色素分離出來。

⑼ 如何從自然界中分離純化自己想要的目的微生物

這個過程叫做「篩選」。
首先確定你所要篩選的目的微生物，並設計好「篩子」。以纖維素酶產生菌的篩選為例。
先找可能存在此類微生物的環境，如森林裡的枯枝爛葉和腐質土。採好樣品，拿回實驗室，首先進行擴大培養。就是把樣品中所有的微生物都培養增殖。一般就用全營養培養基。
培養液稀釋不同倍數後，做平板單細胞培養，這時就要用到「篩子」了。對於纖維素酶產生菌，篩子可選用可溶性纖維素。平板培養時，用可溶性纖維素作唯一碳源，不產生纖維素酶的微生物就不能生長（或生長極弱），把生長良好的微生物挑選出來，再進行擴大培養，再用纖維素唯一碳源的培養基進行篩選，並挑選生長優勢菌落，重復以上步驟（可以多挑選幾支進行對比選擇）。幾次以後，用纖維素粉（不溶性的）做唯一碳源的培養基，進行平板培養，纖維素酶產生量越大、活性越高，產生的透明圈直徑就越大。用這種辦法可能對酶產生量大、活性高的菌種做進一步篩選。
其它目的微生物的篩選步驟也差不多。
關鍵是采樣地點的選擇和「篩子」的設計。
希望對你有用。

⑽ 如何分離土壤中的產纖維素酶的微生物

土樣破碎，無菌水沖懸，低速離心取上清，梯度稀釋，平板塗布，挑單菌落液體培養，並在平板上畫線培養（菌落較單一的話可以省略），在畫方格的纖維素平板上挑單菌落培養，挑水解圈的菌落液體培養，利用濾紙條鑒定水解能力，做生長曲線，優化培養條件。要做鑒定的話就是看菌落形態，理化性質，16s測序做進化樹……自然界中蘊藏著巨大的微生物資源，它們散布於整個地球的各個角落，而且在不同的環境下生存的微生物都有其完全不同的代謝方式，能分解利用不同的底物。這一特徵就為微生物酶品種的多樣性提供了物質基礎。特別是當基因工程介入時，動植物細胞中存在的酶，幾乎都能夠利用微生物細胞獲得。因此，有計劃和仔細地篩選微生物菌種，通常可以獲得能夠生產幾乎任何一種酶的適當菌株。土壤和海水這兩大類資源寶庫的開發具有重要意義。我們可以從土壤、腐木篩選相應的產酶微生物，從污水中篩選各種能夠產生分解糖類、脂類、蛋白質、纖維素、木質素、環烴、芳香物質有機磷農葯、氰化物及某些人工合成的聚合物酶的微生物。在極端環境可篩選嗜熱微生物、嗜鹼微生物、嗜鹽微生物、嗜酸微生物、耐高壓微生物等，並開發極端微生物酶品種。進21世紀以來，各國已在生物產業研究中投入了巨大的財力和科研力量。隨著能源、資源和環境問題的日趨嚴重，生物資源利用已被全球廣泛重視，成為世界各國的戰略性研究重點。在自然界中，纖維素類物質是最廉價、最豐富的一類可再生資源，是人類社會賴以生存的基本物質來源。全世界植物體生成量每年高達1 500億t干物質，其中有50%以上為纖維素和半纖維素。採用生物酶催化技術可將農作物、樹木和其他植物及其殘體、畜禽糞便、有機廢棄物等生物質轉化為工業原料，達到合理、可循環利用自然生物資源的目的。擔子菌亞門Basidiomycotina)、層菌綱(Hymenomycetes)、半知菌亞門(Deuteromycotina)、絲孢綱(Hyphomycets)和子囊菌亞門(Ascomycotina)的部分真菌都具有很強的產生纖維素酶和漆酶的能力，備受生化工業領域的關注。其中，白腐菌、褐腐菌和軟腐菌是自然界中降解木材的主要真菌。在過去的30多年裡，有關白腐菌的研究主要集中在木素降解酶系方面；有關軟腐菌的研究則集中在纖維素降解酶系方面；而有關褐腐菌的研究主要集中在降解木質纖維素機制方面。