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微生物的分離篩選實驗有哪些

發布時間:2022-09-03 23:33:00

『壹』 微生物分離實驗



從復雜的
群體中獲得只含有一種或某一株
的過程稱為
的分離與純化。常用的方法有
1、簡單
挑取法
2、平板分離法
此次實驗採取的是平板分離法,該方法操作簡單,普遍用於微生物的分離與純化。其原理包括兩方面:
1、在適合於待分離微生物的生長條件(如營養、
、溫度與氧等)下培養微生物,或加入某種
造成只利於待分離微生物的生長,而抑制其他微生物生長的環境,從而淘汰一些不需要的微生物。
2、微生物在
上生長形成的單個
可以是由一個細胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取
而獲得
。獲得
的方法可通過稀釋
平板或平板劃線等方法完成。
但是從微生物群體中經分離生長在平板上的單個
並不一定保證是
。因此,
的確定除觀察其
的特徵外,還要結合
檢測個體形態特徵後才能確定。有的微生物的純培養要經過一系列分離與純化過程和多種特徵鑒定才能得到。
土壤是微生物生活的
,它所含微生物無論是數量還是種類都是極其豐富的。因此土壤是微
的重要場所,是發掘
的重要基地,可以從中分離純化的到許多有價值的
。此實驗將從土壤中分離兩種細菌。

實驗器材、試劑與

1、器材:








、三角瓶、




杯、
、高溫

(槍頭)、


等。
2、 試劑:
配製

的原料(
、NaCl、

)、配置糖
的原料(
、K2HPO3、

、NaCl、
)、

)、
染液、番紅染液、碘液、95%乙醇、5%
染液、0.5%番紅水染液、3%
水溶液、1%鹽酸二甲基對苯撐二胺溶液、
等。
3、 土樣:取自
7號宿舍樓門前土壤,地下10cm左右。

實驗步驟:
1、配製
蛋白腖

1)配製
500ml (用於12個平皿和10支試管斜面)
牛肉膏 0.3% ………………………………… 1.5 g
蛋白腖 1% …………………………………… 5g
NaCl 0.5% ………………………………… 2.5g

2% …………………………………… 10g
pH ………………………………………… 7.0~7.2
2)倒12個平板和10支試管斜面,包紮,121℃滅菌20min.
2、制備土壤

稱取土樣10g,放入盛有100ml
的帶有
的三角瓶中,振盪搖勻10min 使土和水充分混合,然後用
從三角瓶中吸取1ml(此操作要求
),加入另一盛有9ml
的試管中,混合均勻,以此類推分別製成製成0.01、0.001、0.0001不同
的土壤溶液。
3、
培養:
以0.01以及0.0001兩個濃度的土壤
作為

的對象,將其分別塗布在3個牛肉膏蛋白腖
中,共6個培養基,標號,37°C溫箱培養48 h。
4、劃線分離(劃線培養):
對兩種土壤溶液的
基進行觀察,記錄兩種區分明顯的細菌性狀。挑取此兩種細菌在新的培養基中劃線培養(每種
3個
),標號、37°C培養。
5、初步鑒定:
對兩種菌進行簡單染色、
以及
觀察,記錄結果。
6、試管斜面再培養:
將兩種純
接種分別接種在5支試管中,共10支試管。37°C培養(18-24h)。
7、對試管中培養的兩種菌進行生理生化鑒定:
1)
鑒定:
A


與許多
與其他細菌區分的主要依據是鑒定有無
。該酶可以把
分解為水與氧氣,氣體氧以氣泡跑出來,則為
實驗陽性。
和許多

酶實驗中呈現陰性。
B 步驟:
將培養新鮮的待測
(培養18-24h內)接在
上,滴一滴3%過
於菌體上。
2)糖發酵與氧化實驗
A

在細菌的分類鑒定中,糖發酵與氧化測定是一項重要的依據。絕大多數細菌都可以利用糖類作為能源以及碳源,但由於不同的菌存在酶系的差異,因而對糖類的發酵與氧化的能力就有所不同。有的在糖類發酵與氧化代謝中能分解糖類,產酸產氣,有的則只能產酸不可以產氣。酸的產生與否,以及是發酵型產酸還是氧化型產酸,可以由預先加在培養基中的

水溶液)呈現出來。這樣把接好
的培養基放在
或好氧的環境下培養,培養基有綠色變為黃色為產酸,是否產氣是通過觀察培養基中是否產生氣泡或培養基斷裂來測定。
B 步驟
① 配置糖
150 ml (
:、K2HPO3:、
、瓊脂:、NaCl:、蛋白腖:),分裝試管。
② 110°C滅菌培養基20 mins (同時滅菌一定量
,待用)。
③ 對兩種細菌進行「穿刺」培養,每種菌做5個試管:2個蓋管培養,2個開管培養,一個為蓋管
。在培養基的上方加入1-2cm厚的
,作為「蓋 管」,以提供菌體無氧的生長環境,開管則不加甘油,作為有氧的生長環境供菌體生長。
④ 在37°C下培養,並在培養24h後觀察培養基中顏色的變化,以及有無氣泡。
3)
測定
A 實驗原理


的一種,它在有分子氧以及
存在時,可以氧化二甲基對苯撐二胺,使之呈現
或暗紅色,在此基礎上還可以與a-
結合生成
酚蘭,出現藍色
B 步驟
在干凈
中放一
,用火柴棒取培養18-24h的鑒定菌苔黏在
上,滴一滴1%鹽酸二甲基對苯撐二胺溶液於菌苔上,進行觀察。

『貳』 如何進行生產菌的分離和篩選

(3)從一些發酵製品中分離目的菌株。 菌株的分離和篩選一般可分為采樣、富集,從酒醪中分離澱粉酶或糖化酶的產生菌等。該類發酵製品經過長期的自然選擇,具有悠久的歷史,從這些傳統產品中容易篩選到理想的菌株,為使篩選達到事半功倍的效果,從中篩選所需菌株。
(2)由自然界採集樣品,如土壤、水、動植物體等,從中進行分離篩選,如從醬油中分離蛋白酶產生菌:
(1)向菌種保藏索取有關的菌株,總的說來可從以下幾個途徑進行收集和篩選,二是把分離到的野生型菌株進一步純化並進行代謝產物鑒別。
在實驗工作中工業微生物產生菌的篩選一般包括兩大部分:一是從自然界分離所需要的菌株、分離、產物鑒別幾個步驟

『叄』 微生物純種分離的方法有哪些

自然界中的微生物總是雜居在一起 即使一粒土或一滴水中也生存著多種微生物 要研究其中某一種微生物 首先必須將它分離出來 下面介紹幾種純種微生物的分離方法
平板劃線分離 將已經熔化的培養基倒入培養皿中製成平板 用接種環沾取少量待分離的材料 在培養基表面平行或分區劃線(圖5-5)然後 將培養皿放入恆溫箱里培養 在線的開始部分 微生物往往連在一起生長 隨著線的延伸 菌數逐漸減少 最後可能形成純種的單個菌落
液體稀釋法 將待分離的樣品經過大量稀釋後 取稀釋液均勻地塗布在培養皿中的培養基表面 培養後就可能得到單個菌落
利用選擇培養基進行分離 不同的微生物對不同的試劑 染料 抗生素等具有不同的抵抗能力 利用這些特點可配製出適合某種微生物生長而限制其他微生物生長的選擇培養基 用這種培養基來培養微生物就可以達到純種分離的目的
菌絲尖端切割 這種方法適於絲狀真菌 用無菌的解剖刀切取位於菌落邊緣的菌絲的尖端 將它們移到合適的培養基上培養後 就能得到新菌落

『肆』 微生物分離方法

微生物分離法是獲得微生物純培養物的一種分離方法。通過這個方法可實現一種微生物的培養,或獲得一個細胞的後代。其具體方法有:

1、稀釋倒平皿法。將待分離的材料作一系列稀釋,取不同稀釋度適量塗布於固體培養基平板上或與已熔化的固體培養基一起傾注入平板內,經過培養即有一個微生物細胞繁殖來的單個菌落。

2、劃線法。先將已熔化的固體培養基製成平板,待凝後,取分離材料在上面劃線,可作平行劃線、扇形劃線或其他形狀的連續劃線,使菌樣逐漸減少,最後得到單個孤立的菌落。

(4)微生物的分離篩選實驗有哪些擴展閱讀:

微生物分離技術的應用措施:

1、減少毒性氧物質的毒害作用:由於常規培養方法使用的高濃度營養基質不利於微生物生長,適當降低營養基質的濃度可以減弱這種不利影響。發現低濃度基質的培養基培養出的細菌在數量和種類上均多於高濃度基質的培養基,但營養濃度過低時會使培養出的微生物數量反而下降。

2、維持微生物間的相互作用:在培養基中加入微生物相互作用的信號分子就可簡單模擬微生物間的相互作用,滿足微生物生長繁殖的要求。

3、供應新型的電子供體和受體:不同微生物的代謝過程不同,因此對反應的底物要求也不盡相同。供應微生物需要的特有底物有助於新陳代謝反應的進行及微生物的正常生長。大量的研究表明,將新穎的電子供體和受體應用到微生物培養中,能夠發現未知的生理型微生物。

4、分散微生物細胞:自然界中很多微生物聚集生長,形成「絮體」和「顆粒」等,致使其內部的微生物不易被培養。對「絮體」和「顆粒」進行適度的超聲處理,將細胞分散再進行培養,可以使更多的微生物接觸培養基而得到培養。

5、延長培養時間:對「寡營養菌」的培養,可適當延長培養時間,使其能長至肉眼可見的尺度。當然培養時間不能無限增長,因為培養時間越長,對培養環境的無菌要求就越高[4]。

6、利用瓊脂替代物:瓊脂對某些微生物具有毒性作用,採用無害且凝結作用較好的替代物質作為培養基固化劑,可以增加微生物的可培養性。

『伍』 選擇性分離微生物育種的步驟大致有哪些

一、微生物工業對菌種的要求

(一)、微生物工業的生產水平由三個要素決定:生產菌種的性能、發酵及提純工藝條件、生產設備。其中生產菌種的性能是最重要的因素。

(二)、微生物工業對菌種的要求是:

(1)菌株高產,在較短的時間內發酵產生大量發酵產物的能力;

(2)在發酵過程中不產生或少產生與目標產品相近的副產品及其他產物;

(3)生長繁殖能力強,較強的生長速率,產孢子的菌種應該具有較強的產孢子能力;

(4)能夠高效地將原理轉化為產品;

(5)能利用廣泛的原材料,並對發酵原料成分的波動敏感性小;

(6)對需要添加的前體物質有耐受能力,並且不能將這些前體物質作為一般碳源利用;

(7)在發酵過程中產生的泡沫要少;

(8)具有抗噬菌體的能力;

(9)遺傳穩定性,

二、工業用微生物菌種的來源及選育

(一)微生物菌種的來源

一般通過以下幾個途徑收集菌種、採集樣品和分離篩選:

(1)是根據資料直接向有科研單位、高等院校、工廠或菌種保藏部門索取或購買;

(2)從大自然中採集樣品分離;

(3)從一些發酵製品中分離篩選目的菌株。

當前發酵工業所用菌種總趨勢是從野生菌轉向變異菌,自然選用轉向代謝育種,從誘發基因突變轉向基因重組的定向育種。

(二)微生物工業菌種的分離

1、野生菌株的分離、篩選過程

(1)新菌種分離與篩選的步驟

菌種分離的流程如下:

標本採集 →標本材料的預處理→富集培養→菌種初篩→ 菌種復篩→性能鑒定→ 菌種保藏

①采樣

采樣季節:以溫度適中,雨量不多的秋初為好。

采土方式:在選好適當地點後,用小鏟子除去表土,取離地面5-15cm處的土約10g,盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中,紮好,標記,記錄采樣時間、地點、環境條件等,以備查考。為了使土樣中微生物的數量和類型盡少變化,宜將樣品逐步分批寄回,以便及時分離。

②標本預處理

④純種分離:採用劃線分離法、稀釋分離法等純化方法獲取單菌落。

⑤高產菌株的篩選:這一步是採用與生產相近的培養基和培養條件,通過三角瓶的容量進行小型發酵試驗,獲得適合於工業生產用菌種。還要對菌種進行發酵性能測定,

⑥毒性試驗:據有的國家規定,微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑麴黴、米麴黴和枯草桿菌作為食用無須作毒性試驗外,其他微生物作為食用,均需通過兩年以上的毒性試驗。

2、菌種的分離方法

(1)施加選擇性壓力分離法

主要是利用不同種類的微生物其生長繁殖對環境和營養的要求不同,如溫度、pH、滲透壓、氧氣、碳源、氮源等,人為控制這些條件,使之利於某類或某種微生物生長,而不利於其他種類微生物的生存,以達到使目的菌種占優勢.而得以快速分離純化的目的。如可以控制培養時的氧,可將好氧微生物和厭氧微生物分開;通過控制溫度,可將嗜熱微生物和非嗜熱微生物分開;控制pH,可將嗜酸、嗜鹼微生物分離等。在分離培養基中也可以加入不同的抗生素或試劑來增加選擇性。如在分離放線菌和細菌時,可加入抗真菌抗生素;分離真菌時,可加入抗細菌葯物。

(2)隨機分離方法

有些微生物的產物對篩選沒有直接的選擇性指示作用,因此常採用隨機分離方法分離。

A、抗生素產生菌的分離

抗生素產生菌的分離常用抑菌圈法。實驗必須用工具菌:採用抗生素的敏感菌,傳統上常用金黃色葡萄球菌和枯草桿菌。

B、抗腫瘤葯物產生菌的分離

抗腫瘤葯物產生菌的分離常用方法:生化誘導法、SOS生色檢測法、DNA修復能力突變株。原理是利用DNA的損傷,微生物發生突變。

B1、生化誘導法:將大腸桿菌的lacZ基因連接在λ噬菌體的PL啟動子下,當DNA損傷時,誘發λ阻遏物CI分解,PL啟動子啟動lacZ基因轉錄,測定表達的ß-半乳糖苷酶活性,來檢測葯物的存在。

B2、SOS生色檢測法:利用當DNA損傷時,可活化yecA蛋白,進而分解噬菌體的阻遏蛋白,再引起sifA基因啟動lacZ基因轉錄,測定表達的ß-半乳糖苷酶活性,來檢測葯物的存在。

C、生長因子產生菌的分離

以氨基酸產生菌為例,介紹篩選方法。首先將待試菌接入加了抗真菌的化合物(如亞胺環己酮)的分離培養基中生長,然後採用影印法,將菌落復印到能支持氨基酸產生菌生長的培養基中。

『陸』 從自然界分離篩選微生物菌種的基本程序包括哪些

⑴采樣:從適合微生物生長的環境采樣
⑵富增:根據其特性選擇性的富集目的微生物
;⑶初篩:採用平板對富集的目的微生物純種分離,確定其活性選出高產菌種,一般200株;
⑷復篩:對第一次分離的微生物菌種,再次篩選,一般40株;
⑸二級復篩:從40株選出5株⑹確定菌種,進行生產性能測定.

『柒』 微生物的分離與純化的常用方法有哪些

分離:

稀釋倒平皿法

平板劃線法

單細胞挑取法

利用選擇培養基分離法

純化:

1、若是你不知道你所要純化的微生物的特徵,最簡單的不知道它的菌落特徵和形態大小,那現根據你要分離菌的特性,找適合的初篩培養基,找到你要純化的菌。如纖維素菌,你在培養基中加纖維素粉或CMC-Na作碳源,這樣就可以篩選出分解纖維素的菌。然後再用下面的方法繼續純化。

2、若你知道目標菌的形態,可以直接挑混合菌劃平板,直到長出當個菌落,並且在鏡下沒有雜菌即可;或者挑菌稀釋塗布得到當個菌落也行。

『捌』 菌種鑒定常用的分離方法有哪些

菌種質量檢測的目標包括菌絲形態、菌落特徵以及子實體形態等方面。質量檢測常用方法如下:

(1)建立標準的培養和觀察方法

對於一個栽培品種各菌種的質量檢測,實際上是以該品種典型的生物學特性(包括形態特徵、生理生態特性、栽培習性)為參照標准進行比較,以檢驗菌種是否存在品種退化、菌種老化、病菌侵染、雜菌污染和品種混雜等質量問題。同時,菌種質量檢測不僅要考慮從哪些方面來評價一個菌種的質量優劣,也要考慮用怎樣的標准方法對菌種質量進行評價的問題。因為一定的結果來源於一定的方法和一定的條件。方法和條件不同,結果就失去了可比性,也就無法鑒別,因此,需要建立標准。這些標准包括:培養基、培養條件(溫度、濕度、pH、光照等)、菌種的菌齡等。

(2)連續觀察

在菌種生長過程中,要連續觀察,一切不正常的現象只有在生長過程中才能表現出來。而當菌種長滿培養基表面後,其不正常現象往往會被菌種的過齡而掩蓋。

(3)宏觀檢查

對食用菌母種、原種及栽培種的宏觀檢查要根據其培養特徵來進行(參見前述有關內容),這是菌種生產者及使用者普遍使用的方法,簡單易行,但需要有多年的從業經驗與技術沉澱。如被檢菌種表現出菌落生長速度不一致、氣生菌絲變稀疏或出現扇變菌落、菌落上過早出現色素、或不同特徵的菌落混雜共存、或菌落上出現黑褐色、青灰色、黃褐色或紅色的孢子堆,均可以確定該菌種存在質量問題。優質菌種外觀菌絲潔白、密集粗壯,生長速度一致,齊發並進。

在生產實踐中,廣大菇農和專業工作人員總結出「純、正、壯、潤、香」的質量檢查方法。這種應用感官識別菌種優劣,是經驗的總結,能大致、快速地鑒定出菌種的優劣。具體方法是:

「純」指菌種的純度高,無雜菌感染,無斑塊、無抑制線,無「退菌」、「斷菌」現象等。

「正」指菌絲無異常,具有親本正宗的特徵,如菌絲純白、有光澤,生長整齊,連結成塊,具彈性等。

「壯」指菌絲發育粗壯,長勢旺盛,分枝多而密,在培養基上恢復、定植、蔓延速度快。

「潤」指菌種含水量適中,基質濕潤,與瓶壁緊貼,瓶頸略有水珠,無干縮、鬆散現象。

「香」指具該品種特有的香味,無霉變、腥臭、酸敗氣味。

通過檢測各種食用菌菌絲生長的色澤、速度、均勻度等特徵是否正常,來判斷菌種生長是否正常、是否可用,但辨別不了是否優質高產。

(4)顯微鏡檢查

對菌絲體進行顯微觀察,可以確定菌絲粗細、分枝、隔膜、鎖狀聯合等特性是否均一,是否與該栽培品種的典型特徵一致(參見前述相關內容)。具有不同形態特徵的菌絲體存在於同一菌種體中,表明該菌種存在質量問題;如果出現菌絲體重寄生現象,常表現出不同特徵的菌絲體相互纏繞,或菌絲體中空變細,或在寄生點出現吸器等不正常現象。

鏡檢的方法是:挑取少量菌絲,置載玻片中央的水滴上,用解剖針或接種針撥散,蓋上蓋玻片,也可加碘酒或美藍等染色後進行鏡檢。正常的菌絲一般透明、分枝狀,有橫隔和明顯的鎖狀聯合;異宗結合的食用菌,如僅有單核菌絲,不具結實性,不宜作菌種用;雙核菌絲中,鎖狀聯合多而密,則結菇力強,一般可認為是好菌種。如:

①雙孢菇 觀察雙孢菇單孢子萌發後的菌絲生長形態。凡菌絲潔白、健壯,保存時間較長時菌絲顏色不變,較耐28℃以上氣溫,生長在基質上平貼培養基表面,氣生菌絲不多的,為同化能力較強,產量較高的菌株。相反,菌絲生長初期好,很快變黃變稀,如蜘蛛絲一樣,長出培養基表面菌絲較多的菌株產量較低。

②香菇 觀察香菇的雙核菌絲,在斜面培養基上生長速度達到1.2厘米/天以上的,菌絲不十分粗壯和潔白,鎖狀連合頻繁,鎖狀連合在菌絲間相距較近,且在觀察面上分布均勻,一般均是高產和抗雜能力較強的菌株。香菇出菇的密度與鎖狀連合有一定關系。

③草菇 觀察草菇菌絲,發現菌絲分枝角度大的,出菇率高,產量高。菌絲分枝角度小、平行排列的,產量低。

各種食用菌的菌絲生長是否正常、是否可用,一般都以色澤、速度、均勻度等特徵加以檢測,但這並不能說明其是否優質高產。

(5)拮抗試驗

也稱對峙反應。同一種食用菌,經分離或雜交,將選育出許多不同的菌株,這些菌株的菌絲在形態上很難區別。如不同編號的香菇菌種,都是白色絨毛狀菌絲,鏡檢時均具有鎖狀聯合等。在當前菌種管理工作尚不十分健全的情況下,「同名異種」、「同種異名」的現象普遍發生,要識別異同,可採用「拮抗試驗」加以區別。具體方法是:

用1支20毫米×200毫米的無底試管,中央部位裝入長 5~7厘米的木屑麩糠培養基,兩端壓平並蓋棉塞,滅菌後,兩端各接入兩株受檢的菌種 1小塊,25℃左右條件下培養,當兩端菌絲往中央生長並相互接觸後,把試管移至20℃、約300勒克斯的漫射光下繼續培養,觀察菌絲接觸區有無對峙反應。若無褐色的帶線出現,表示兩個受檢菌株的基因極相似或相同,是相同的菌株,僅編號不同,即同種異名。如果受檢菌株間形成帶線,則表示是不同的菌株。

用平板進行拮抗試驗測試,方法是在無菌的PDA培養基平板上各接入2個或多個被檢菌株的菌種,在上述條件下培養,觀察菌絲相接觸部分有無帶線,以區別相同或不同的菌株。也可用菌種瓶(袋)進行拮抗測試(圖2-11)。

圖2-11 拮抗現象

(6)菌絲長速測定

在適宜的條件下,若菌絲生長迅速、粗壯有力、濃密整齊,一般為優質菌種。若菌絲生長緩慢、中斷或長速極快、稀疏無力、參差不齊和易枯黃萎縮,則為不良菌種。菌絲生長速度測定,可在PDA平板中心接種培養,測量菌落兩個直交直徑,取其平均值。同理,還可在原種、栽培種瓶(袋)壁上劃線測定。

(7)菌絲生長量測定

將等面積的菌苔接入無菌的液體培養基內,在相同的條件下,進行搖床振動培養,經過一定時間後,過濾收集菌絲,反復沖洗干凈後置容器內,80~100℃烘箱中烘乾至恆重後稱重。凡菌絲增殖快、重量重的為優質菌株,而增殖慢、重量輕的為不良菌株。

(8)耐高溫測定

以雙孢菇為例,把菌種置於20~22℃下培養,待菌絲長到1/2試管斜面時,每一菌株取出2~3支試管,置於35℃溫度下,經24小時作抗熱性試驗,然後放到22~23℃下培養,觀察菌絲恢復情況。若菌絲恢復萌發快,仍健壯、旺盛生長,則表明該菌株具有耐較高溫的優良性狀;如果菌絲生長緩慢,出現發黃倒伏,萎縮無力,則為不良菌株。

(9)均一性測定

將母種接種於標准培養基的平板上,並置於標準的環境條件下,每批做30~50個重復,進行長勢和長速的連續觀察記錄。均一性好的品種,每個重復之間長勢和長速幾乎沒有肉眼可見的差異。如果長勢和長速不一,則表明原始的母種的遺傳均一性不良,不宜作生產用種。

(10)純度測定

菌種純度高低是鑒定菌種質量好壞的關鍵環節。優質菌種要求同一管、瓶或袋內只含有所需要的菌種菌絲體,而不能含有其他種類的雜菌。這里所說的雜菌包括細菌、放線菌、酵母菌和各種黴菌,以及含有兩種食用菌菌絲體或同一種食用菌的兩個品種菌絲。凡是被雜菌污染的菌種都是不純菌種,必須予以淘汰。在三角瓶內裝入淺層液體培養基,滅菌後接入經搗散的菌種,25℃條件下培養,約1周觀察,若有氣泡和菌膜發生,並具酸敗味,說明菌種不純,混有雜菌;如果無上述現象則菌種純正無雜。

(11)長勢測定

菌絲長勢包括菌絲生長的狀態和速度。凡是菌絲生長迅速、整齊濃密、健壯有力的菌種為優良菌種。如果菌絲生長緩慢,或長速特快、稀疏無力、參差不齊、易於衰老,則表明是劣質菌種。在鑒別菌絲長勢時,必須注意,在不同培養基上、不同培養條件下,同一種食用菌菌絲的長勢不同,因此,判斷食用菌的菌種長勢,應採用相同的培養基,這樣,結果就可靠一些。在外界環境條件相同的情況下,菌絲生長旺盛、生長量多、生長速度快的要好於菌絲生長弱、生長量少、生長速度慢的菌種。還有一種方法是在三角瓶內裝入淺層液體培養基,滅菌後接入經搗散的菌種,25℃條件下培養,約1周觀察浮在液面的菌種。如果菌絲向旁邊迅速生長、健壯有力、邊緣整齊,且不斷增厚,說明該菌株生長勢強;若表面生長慢、稀疏、菌絲層薄,說明長勢弱,不宜用於生產。

(12)抗霉性測定

以木耳為例:制備平板,在平板的一邊分別接入不同的木耳菌株,每一菌株3個重復,在26~28℃下培養。待木耳菌絲長到平板一半左右時,在平板的另一邊接上木黴菌絲,繼續培養。之後注意觀察木黴菌絲與木耳菌絲的交界處,出現拮抗線的表示木耳菌株抗霉能力強,木黴菌絲無法長過去,為抗霉能力強的菌株。如果木黴菌絲很快蓋過木耳菌絲,說明這個木耳菌株的抗霉能力差或沒有抗霉力。

(13)出菇試驗

對引進或分離的同一品種的若干菌株進行出菇對比試驗,必須是在各級菌種的培養基成分、培養溫度、培養時間及栽培條件基本一致的情況下進行。出菇試驗可按菇類的常規栽培方法進行,數量可少些。為使試驗准確,每一菌株設3~4個重復,以避免試驗的偶然性。在位置排放上盡可能按菌名拉丁文排列,以相同的措施管理,在管理過程中對環境因子的變化、管理措施及生長歷程、品種本身性狀等要詳細全面記錄。以香菇為例記載內容如下:

①母種菌絲生長情況,如菌絲濃淡、生長快慢、菌苔韌性等。

②原種、栽培種中菌絲生長情況,如菌絲萌動、吃料、生長快慢;菌種表面有無菌皮或菌皮厚薄,白色顆粒狀物有無或多少;培養基轉色情況等。

③栽培階段應記載:菇木轉色快慢、顏色深淺;出菇快慢、菇生長密度;子實體經濟性狀,包括菇的大小、厚度、色澤、圓整程度、菌柄長度、粗細等;轉潮快慢;對水分的敏感程度;產量及產量分布;出口菇比例等。

通過對記載資料分析,選出綜合性狀符合要求的菌株,供大面積生產或出售。

出菇試驗因季節推遲或其他原因,可採用一種較簡單的方法來彌補,即直接將接有各菌株並已發好菌的瓶(袋)裝菌種,小心地敲破瓶頸或打開塑料袋口,使培養料外露(如果是雙孢菇,則要覆土調好土粒的濕度),置最適宜的溫、濕度條件下進行出菇(耳)管理,觀察記載各項指標,最後進行評比。但這種方法的結果只能提供參考。

(14)栽培指標

採用一定的栽培規模,通過不同地區、不同原料、不同栽培方式,進行多次反復栽培觀察,詳細記錄、評比後,具有優質、高產、高抗、高效和遺傳性、穩定性強的菌株,才是優質和可推廣的品種。其鑒定的內容、方法和指標有:

①吃料能力鑒定 將菌種接入最佳配方的原種培養料中,置適宜的溫、濕度條件下培養,1周後觀察種菇(耳)菌絲的生長情況。如果菌種塊能很快萌發,並迅速向四周和培養料中生長伸展,則說明該品種的吃料能力強;反之,菌種塊萌發後生長緩慢,遲遲不向四周的料層深處伸展,則表明該品種對培養料的適應能力差。對菌種吃料能力的測定,不僅用於對菌種本身的考核,同時還可以作為對培養料選擇的一種手段。

②成活率 將菌種接在適宜的培養基上,若菌絲能很快恢復、定植和蔓延生長,成活率很高,是質量好的菌種;反之,接種後恢復慢,成活率不高是質量差的菌種。

③出菇快慢 一般說,高溫型的出菇快,低溫型的出菇慢,中溫型的介於兩者之間。而以菇的質量來說,高溫型的質量差,低溫型的質量好。但同一溫型食用菌品種的不同菌株,其菌種接種後若菌絲分解培養料能力強,培養前後培養料失重大,出菇快而多,總產高,即是好菌種;否則為劣質菌種。

④菇峰間隔 在一個生產周期中,子實體發生可分數潮次,產菇最多時稱菇峰,最低時稱菇谷,每個菇峰和菇谷構成一潮菇。凡菇潮多,間隔時間短,說明菌絲分解能力強,供子實體發生的養分積累多,因此轉潮快,是好的菌種;反之,菇潮間隔時間長,或不明顯,零星出菇,產量低,即為劣質菌種。

⑤乾燥率 鮮菇經干制後乾燥率高,說明轉化率高,子實體含水分低,為優質菌種。

⑥生物學效率 生物學效率,指每100千克乾料可產多少千克鮮菇。生物學效率高,則菌種質量好,反之為劣質菌種。

(15)經濟指標

高產不一定高效、豐產不等於豐收,要佔領市場,獲得較高利潤,還必須具備商品的要求,如產品的色、香、味、形,檔次,上市時間,貨架期和保質期等。凡是鮮菇上市時間早,產量高、品質好、檔次高、含水量低,不易變色、變質、破碎、失重,無農葯殘毒、殘臭,符合食品衛生標准和得到的利潤高等,均表示經濟指標高,則為優質菌株;而上市有效時間短,易變色、變味、變質,含水量高,失水嚴重,易破碎,利潤低的菌種均為劣質菌種。如香菇以大小適中、肉厚、色深、邊緣內卷,柄短細為優良;雙孢菇以色白、子實體大小適中,菌柄短,不易開傘等為優良;銀耳以色白、開片好、蒂頭小、松泡率高為優良等。

『玖』 高中生物實驗中哪些用到篩選這個步驟

高中生物實驗中用到篩選這個步驟的有:
1.肺炎雙球菌轉化實驗:艾弗里做體外轉化實驗時,將s型菌的DNA,蛋白質,多糖等物質分離提純,用它們分別培養細菌後需要進行篩選,選出生長s型菌的實驗組。
2.單克隆抗體的制備實驗:得到三種融合後的細胞時,需要篩選出雜交瘤細胞。
3.雜交育種實驗:通過雜交,得到需要的性狀後,需要篩選出純合子。
4.基因工程制備抗蟲棉實驗:需要進行篩選,看是否真的具備抗蟲性狀
5.基因重組的所有實驗:都需要用抗生素抗性基因,篩選出導入目的基因的受體細胞

『拾』 分離純化微生物的方法有哪些各方法適用分離什麼菌種

主要有:劃線法、倒平板法、塗布法,根據分離的菌種選擇不同的培養基。

稀釋混合倒平板法、稀釋塗布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用,不需要特殊的儀器設備,分離純化效果好。

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學的研究及應用中,不僅需要通過分離。

分離技術

主要是稀釋和選擇培養,稀釋是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體,使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞,並使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法。

如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時,需要結合使用選擇培養法,即選用僅適合於所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體,改變群體中各類微生物的比例,以達到分離的目的。為保證分離到的微生物是純培養,分離時必須用。

以上內容參考:網路-微生物分離純化

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與微生物的分離篩選實驗有哪些相關的資料

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