海洋微生物溶菌酶如何得到

1. 微生物發酵溶菌酶的工藝

1、溶菌酶菌株的分離純化
2、菌株的擴大培養
3、發酵培養基菌株的接種
4、發酵條件的控制
5、發酵產物的分離純化
（僅供參考）

2. 溶菌酶一般是由什麼細胞產生的

由細胞核糖體合成的，再由內質網包裹為溶菌酶體。

利用蛋白質和酶的生物學特異性，即蛋白質或酶與其配體之間所具有的專一性親和力而設計的色譜技術。酶一底物復合物形成之後，在一定的條件下分離復合物便得到純凈的酶。

溶菌酶化學性質非常穩定，當pH值在一定范圍內劇烈變化時，其結構幾乎不變。溶菌酶不可逆變性的臨界點是77℃，隨溶劑的變化，不可逆變性臨界點也發生變化，當溶菌酶所處溶液pH值小於1時，不可逆變性臨界點降低到43℃。

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溶菌酶來自單核細胞、中性粒細胞，是一種能溶解某些細菌的酶類。可酵解革蘭氏陽性球菌壁上的乙醯氨基多糖成分，使細胞壁破裂。其分子量為14000—15000Da，可從腎小球基底膜濾出，90%以上可被腎小管重吸收，所以尿液中很少或無溶菌酶。

用一種細菌懸液作為基質，加入待測標本後保溫一定時間，如標本中含溶菌酶，則細菌被溶解，細菌懸液濁度下降或變清，可用光電比濁法測其濁度變化，或用平皿法測定其溶菌圈的大小。

3. 溶菌酶的分布及來源

溶菌酶又稱胞壁質酶或N-乙醯胞壁質聚糖水解酶，是一種能水解細菌中黏多糖的鹼性酶。溶菌酶主要通過破壞細胞壁中的N-乙醯胞壁酸和N-乙醯氨基葡萄糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。
溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復合體，使病毒失活。 該酶廣泛存在於人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、乳汁等液體，以及微生物也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。 其中根據其來源的不同，可以將其分為四類，分別是植物溶菌酶、動物溶菌酶、微生物溶菌酶以及蛋清溶菌酶

4. 溶菌酶的制備

溶菌酶是採用生物工程技術進行克隆、提取而製取,它是一種天然酶，安全綠色的添加劑，無抗葯性。
該酶廣泛存在於人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸，有4對二硫鍵維持酶構型，是一種鹼性蛋白質，其N端為賴氨酸，C端為亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。
溶菌酶在等電點以下較廣泛的pH值范圍內，分子帶正電荷，可吸附於弱酸性陽離子交換樹脂上，洗脫後鹽析，可得溶菌酶沉澱，再進行精製可得成品。蛋清吸附↓724樹脂洗滌↓緩沖液洗脫↓硫酸銨溶液鹽析透析去鹼性蛋白↓NaOH凍干溶菌酶凍乾粉沉澱乾燥溶菌酶在5～10℃下，將新鮮蛋清540kg加入到已處理好的80kg 724樹脂中，攪拌吸附6h，在0～5℃靜置過夜。傾出上層蛋清，樹脂離心甩干，用蒸餾水反復洗去黏附的卵蛋白，然後將樹脂裝入柱內，用0?15mol/L、pH=6?5磷酸緩沖溶液約150L洗滌樹脂，再用約600L的10%硫酸銨溶液洗脫，收集洗脫液。洗脫液中加硫酸銨，使最終含硫酸銨量為40%，有白色沉澱生成，冷處放置過夜。虹吸上層清液，沉澱吸濾抽干，再用1倍蒸餾水溶解沉澱呈稀糊狀，然後裝入透析袋，在約5℃的條件下，對蒸餾水透析24h左右，中間換水2～3次。離心去除沉澱，沉澱再用少量水洗一次，洗液與離心液合並。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氫氧化鈉溶液，同時不斷攪拌，使pH值上升到8?0～9?0，如有白色沉澱，即離心除去。然後用3mol/L鹽酸調pH=5?0，冷凍乾燥，即得白色片狀溶菌酶。也可將離心液用3mol/L鹽酸調pH=3?5，在攪拌下緩慢加入5%的固體氯化鈉，在約5℃的溫度下靜置48h，離心，沉澱用0℃丙酮洗滌，乾燥，即得溶菌酶。

5. 溶菌酶由什麼微生物產生

絕大多數微生物都能產生溶菌酶，如枯草芽孢桿菌突變株U_(244)

微生物溶菌酶：
人們從上世紀60年代發現微生物也產生溶菌酶，按其作用對象可分為兩大類，即細菌溶菌酶和真菌溶菌酶。
♦細菌溶菌酶
細菌溶菌酶通常可分為三大類：
N-乙醯氨基己糖苷酶，它催化水解肽聚糖中糖骨架中的β(1→4)糖苷鍵；
N-乙醯胞壁醯-丙氨酸醯胺酶，它催化裂解肽聚糖中糖基與肽基；
內肽酶，它催化裂解肽聚糖肽橋中的肽鍵。
♦真菌溶菌酶
真菌溶菌酶主要包括幾丁質酶和-β葡聚糖酶。

6. 什麼細胞產生溶菌酶

溶菌酶廣泛存在於人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸，有4對二硫鍵維持酶構型，是一種鹼性蛋白質，其N端為賴氨酸，C端為亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。

7. 溶菌酶由什麼微生物產生

溶菌酶又稱胞壁質酶或N-乙醯胞壁質聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中黏多糖的鹼性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙醯胞壁酸和N-乙醯氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
溶菌酶廣泛存在於人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸，有4對二硫鍵維持酶構型，是一種鹼性蛋白質，其N端為賴氨酸，C端為亮氨酸。可分解溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。