如何給生物染色

⑴ 常用微生物染色的方法

檢驗常用染色法包括 1）革蘭氏染色法 2）抗酸染色法 3）美蘭染色法 4）異染顆粒染色法 5）細菌鞭毛染色法 6）莢膜染色法芽孢染色法 7)布氏桿菌科茲洛夫斯基染色法 8)結核桿菌熒光染色法等主要染色法 革蘭氏染色法染液配製 1。結晶紫染液：稱取結晶紫（龍膽紫）14g，溶於95%酒精100ml中，配成飽和液，再取飽和液20ml與1%草酸銨溶液（1g草酸銨溶於100ml蒸餾水溶解即成）80ml混勻即成2。盧戈氏碘液：碘化鉀2g於10ml蒸餾水中，再加碘1g，待碘全部溶解後（時間較長）加蒸餾水200ml即成3。95%酒精4。（1）石碳酸復紅液：稱取鹼性復紅（鹼性品紅）4g溶於95%酒精100ml中成飽和液，再取飽和液10ml與5%石碳酸溶液（5ml石碳酸溶於100ml蒸餾水）90ml混勻即成，（2）稀釋石碳酸復紅液：取石碳酸復紅液10ml加入蒸餾水90ml即成染色方法：1。塗片 將菌液直接塗在載玻片上，經培養的菌落要加生理鹽水混勻塗片，等待乾燥（固定）2。將結晶紫染液滴加在已固定的塗片上，染色1分鍾後用水沖去剩餘燃料3。滴加盧戈氏碘液1分鍾後水洗，在滴加95%酒精脫色，搖動玻片至紫色不在脫色為止（約需1分鍾），水洗4。用稀釋石碳酸復紅液復染30秒至1分鍾5。水洗待干，鏡檢6。革蘭氏陽性菌染成紫色，革蘭氏陰性菌染成紅色

⑵ 微生物染色的革蘭氏染色法具體操作方法

1）塗片固定。
2）草酸銨結晶紫染1分鍾。
3）自來水沖洗。
4）加碘液覆蓋塗面染1分鍾。
5）水洗，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，30秒後水洗，吸去水分。
7）蕃紅梁色液（稀）染10秒鍾後，自來水沖洗。乾燥，鏡檢。
染色的結果，革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。

⑶ 微生物染色的染色方法

微生物染色方法一般分為單染色法和復染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色，但不能鑒別微生物。復染色法是用兩種或兩種以上染料，有協助鑒別微生物的作用。故亦稱鑒別染色法。常用的復染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法，此外還有鑒別細胞各部分結構的（如芽胞、鞭毛、細胞核等）特殊染色法。食品微生物檢驗中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。
用一種染色劑對塗片進行染色，簡便易行，適於進行微生物的形態觀察。在一般情況下，細菌菌體多帶負電荷，易於和帶正電荷的鹼性染料結合而被染色。因此，常用鹼性染料進行單染色，如美蘭、孔雀綠、鹼性復紅、結晶紫和中性紅等。若使用酸性染料，多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。使用酸性染料時，必須降低染液的PH值，使其呈現強酸性（低於細菌菌體等電點），讓菌體帶正電荷，才易於被酸性染料染色。
單染色一般要經過塗片、固定、染色、水洗和乾燥五個步驟。
染色結果依染料不同而不同：
石碳酸復紅染色液：著色快，時間短，菌體呈紅色。
美蘭染色液：著色慢，時間長，效果清晰，菌體呈藍色。
草酸銨結晶染色液：染色迅速，著色深，菌體呈紫色。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫師Gram創立。
細菌先經鹼性染料結晶染色，而經碘液媒染後，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），後者為革蘭氏陰性菌（G—）。為觀察方便，脫色後再用一種紅色染料如鹼性蕃紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應；弧菌，螺旋體和大多數致病性的無芽胞桿菌都呈現負反應。
革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質上有很多差別，染色反應不一樣。現在一般認為革蘭氏陽性菌體內含有特殊的核蛋白質鎂鹽與多糖的復合物，它與碘和結晶紫的復合物結合很牢，不易脫色，陰性菌復合物結合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應的主要依據。
另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同PH條件下進行染色，陽性菌吸附鹼性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。例如，在強鹼的條件下進行染色，兩類菌吸附鹼性染料都多，都可呈正反應；PH很低時，則可都呈負反應。此外，兩類菌的細胞壁等對結晶紫—碘復合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間，脫色方法也應嚴格控制。

⑷ 如何對植物細胞染色

活體染色是利用某種對植物無害的染料溶液對活細胞進行染色的技術。中性紅是常用的活體染料之一，它是一種弱鹼性pH指示劑，變色范圍在pH6.4-8.0之間（由紅變黃）。
在中性或微鹼性環境中，植物的活細胞能大量吸收中性紅並向液泡中排泌，由於液泡在一般情況下呈酸性反應。因此，進入液泡的中性紅便解離出大量陽離子而呈現櫻桃紅色，在這種情況下，原生質和細胞壁一般不著色；死細胞由於原生質變性凝固，胞液不能維持在液泡內。因此，用中性紅染色後，不產生液泡著色現象。相反，中性紅的陽離子，卻與帶有一定負電荷的原生質及細胞核結合，而使原生質與細胞核染色。

⑸ 給細菌染色的方法都有幾種，怎麼操作，都用復紅染色嗎麻煩一一講來，詳細點，本人初學者.

細菌染色分為活菌染色跟死菌染色兩種。其中死菌染色分為正染色跟負染色。正染色又包括普通染色與特殊染色兩種。普通染色有簡單染色法、革蘭氏染色法和抗酸染色法；特殊染色分為芽孢染色法、莢膜染色法和細胞壁染色法。一般都只用革蘭氏染色法跟抗酸染色法。

革蘭氏染色法(Gram's stain)是最常用的細菌染色法。細菌經結晶紫初染染成藍色。革蘭氏染色陽性菌（G+）細胞壁肽聚糖層數多，且肽聚糖為空間網狀結構，再經乙醇脫水，網狀結構更為緻密，染料復合物不易從細胞內漏出，仍為藍色。而革蘭氏染色陰性菌（G-）細胞壁脂類含量多，肽聚糖層數少，且肽聚糖為平面片層結構，易被乙醇溶解，使細胞壁通透性增高，結合的染料復合物容易泄漏，細菌被脫色為無色，再經石炭酸復紅稀釋液復染成紅色。
①將結晶紫染液加於塗膜上，染色（初染）1min。②水洗後加蘆戈氏碘液處理(媒染)1min。③水洗後用95％酒精脫色，脫色時頻頻搖動玻片，直至流下的液體無色為止(約需0.5min)。④水洗後加石炭酸復紅稀釋液染色(復染)0.5min。⑤水洗，用濾紙輕輕吸干，待標本充分乾燥後進行鏡檢。染色過程中，水洗要用自來水的細流徐徐沖洗，沖洗塗膜的背面，勿使強水流直接沖到塗膜上。

抗酸染色法（acid-fast stain）對分枝桿菌屬等一般染色法不易著色的抗酸性細菌染色。要注意：1）塗片要略厚；2）加溫染色或延長染色時間，加溫時隨時補加染色液；3）分枝桿菌呈紅色（+），其他細菌和背景為藍色。
①石碳酸復紅加溫染色8~10分鍾。②3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鍾，脫色是輕搖玻片，直到塗片顏色脫去為止。③水洗後，用鹼性美藍復染1分鍾。④再次水洗，印干。

芽孢染色法是專門給細菌芽孢染色的。要注意：1）芽孢染色用的菌種應控制菌齡，使大部分芽孢仍保留在菌體上為宜；2）染色加熱過程要及時補充染液，切勿讓塗片乾涸。
①孔雀綠加熱染色5分鍾。②水洗。③番紅染色2~3分鍾。④水洗，乾燥。

莢膜染色法是專門給與染料親和性弱的細菌莢膜染色。由於莢膜很薄，且含水量高（90%以上），易變形，所以製片和染色時一般不用熱固定。這個包括黑素負染色法、Leifson染色法跟Tyler染色法。
黑素負染色法：
1.制菌液：在潔凈載破片一端加一滴蒸餾水，按無菌操作要求，用接種環取少量斜面試管培養物於蒸餾水中，輕輕混勻。
2.塗片（推片法）：取另一塊邊緣光滑的載玻片，使之一端與菌液接觸，然後迅速均勻地將菌液推向玻片的另一端，使菌液塗成一薄層。置空氣中自然乾燥。注意：勿熱固定。
3.復紅染色：滴加石炭酸復紅染色液覆蓋塗布面，染色4~5分鍾後，除去多餘染液（勿用水洗）。乾燥時間不要太長，防莢膜脫水。
4.黑素染色：在玻片一端加一滴1%黑素液，再取一塊邊緣光滑的裁玻片，當邊緣與黑素液接觸後，迅速均勻地推向玻片另一端，使成一薄層。置空氣中自然乾燥。
5. 鏡檢（油鏡）：菌體呈紅色，背景呈黑色，莢膜無色。
注意事項：滴黑色素要量少；取菌要適量。
Leifson染色法
1.制備塗片同前，自然乾燥。
2.滴加Leifson』s染色液覆蓋塗布面，染色10分鍾，傾去多餘染料（勿用水洗）。
3.滴加硼酸鈉美藍染色液，染色5分鍾，輕輕用水沖洗，置空氣中自然乾燥。
4.油鏡下鏡檢，菌體呈藍色，莢膜呈紅色。
Tyler染色法
1.制備塗片同前，自然乾燥。
2.滴加結晶紫冰醋酸染色液覆蓋塗布面，染色5~7分鍾。傾去多餘染料（勿用水洗）。
3.用20%CuS04水溶液輕輕沖去染料，用吸水紙印干後，置空氣中自然乾燥。
4.油鏡下檢查，菌體呈紫色，莢膜呈淺紫色或淺藍色。

細胞壁染色法是觀察細菌細胞壁時採用的染色法。細菌細胞壁很薄，它與染料結合的能力差，不易著色，在細菌的染色過程中，一般情況染料都是通過細胞壁的滲透、擴散等作用而進入細胞，細胞壁本身並未染色，因此，欲通過染色來觀察細胞壁，必須設法使細胞壁能著色，而細胞質則不易著色，常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用，它們使細胞壁形成可著色的復合物，而使細胞質不易被著色，經結晶紫或甲基綠染色後，便可在普通光學顯微鏡下觀察到細胞壁。
根據細菌細胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理後，會產生質壁分離這一現象，經染色後也可在普通光學顯微鏡下區分細胞壁和細胞質膜。
1．單寧酸法
(1)將培養16—18小時的巨大芽孢桿菌按常法製成塗片。
(2)用5％單寧酸染5分鍾後，水洗。
(3)用0．2％結晶紫染3—5分鍾，水洗，吹乾。用油鏡觀察，細胞壁呈紫色，細胞質呈淡紫色。
2．磷鉬酸法
(1)制備濃厚的塗片，在未乾時浸入1％磷鉬酸水溶液3—5分鍾。
(2)用1％甲基綠水溶液染3—5分鍾。
(3)水洗後，吹乾，用油鏡觀察。細胞壁為綠色，細胞質無色。
3．區分細胞壁與細胞質膜
(1)乙醚蒸氣法
(a)將巨大芽孢桿菌塗布於蓋玻片上，翻轉蓋玻片使其放在乙醚蒸氣瓶的瓶口上蒸3分鍾。
(b)取下蓋玻片置Bouin氏固定液中30分鍾後取出，水洗。
(c)用硫堇染色30秒鍾。
(d)水洗，水封，置油鏡下觀察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25％NaCl溶液於潔凈的載玻片上。
(b)挑一小環培養6小時的枯草芽孢桿菌，在25％NaCl水滴中塗布均勻，待自然乾燥。
(c)滴加0．01％結晶紫於其上，使蓋滿有菌部分，30秒鍾後水洗，乾燥，用油鏡觀察結果。