① 離心微生物細胞需要多大的RCF
一般只是集菌的話5000rpm-6000rpm,5分鍾就夠了.離心機轉速與相對離心力的換算公式為：RCF=11.18×(RPM/1000)2×R rpm=299×√RCF/R 另類換算方法：r/min=1000×[G/(11.18×半徑]1/2r/min=1000×[400/(11.18×半徑]1/...
② 微生物檢測手段及注意事項
1. 微生物計量法
1.1 體積測量法
又稱測菌絲濃度法，通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養液(如10 mL)放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間(如5 min)和轉速(如5000 rpm)，離心後，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物，結果會有一定偏差。
1.2稱 乾重法
可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10~20%。在離心法中，將一定體積待測培養液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，並用清水離心洗滌1~5次，進行乾燥。乾燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘乾，或採用紅外線烘乾，也可在80 ℃或40 ℃下真空乾燥，乾燥後稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾後用少量水洗滌，在40 ℃下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常採用這種方法，如活性乾酵母(Activity Dry Yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
1.3 比濁法
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時，可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600 nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.coli的生長及誘導時間。
1.4 菌絲長度測量法
對於絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養基，卧放，在開口的一端接種微生物，一段時間後記錄其菌絲生長長度，藉此衡量絲狀微生物的生長。
2. 微生物計數法
2.1 血球計數板法
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平台，兩嵴的表比兩平台的表面高0.1 mm，每個平台上刻有不同規格的格網，中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統計一定大格內微生物的數量，即可算出1 mL菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。
2.2 染色計數法
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色後在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。
2.3 比例計數法
將已知顆粒(如黴菌孢子或紅細胞)濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。
2.4 液體稀釋法
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋，根據估計數，從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5 mL試樣，接種1 mL到3組共15隻裝培養液的試管中，經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然後查最大或然數表MPN(Most Probable Number)得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。
2.5 平板菌落計數法
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9 cm的平板上出現50~500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的'細菌進行了一次分離培養，獲得了單克隆。
2.6 試劑紙
在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC，無色)待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。
2.7 膜過濾法
用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。
3. 間接測定法
微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化，例如酸鹼度，發酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。因此可利用生理指標等間接參數來測定生物量。
3.1 測定含氮量
大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%，酵母為7.5%，黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱後產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。
3.2 測定含碳量
將少量(乾重0.2~2.0 mg)生物材料混入1 mL水或無機緩沖液中，用2 mL 2%的K2Cr2O7溶液在100 ℃下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5 mL，在580 nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標准樣品做標准曲線。
3.3還原糖測定法
還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是，離心發酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鍾，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。
3.4 氨基氮的測定
離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02 mol/L的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02 mol/L的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。
3.5 其他生理物質的測定
P，DNA，RNA，ATP，NAM(乙醯胞壁酸)等含量以及產酸，產氣，產CO2(用標記葡萄糖做基質)，耗氧，黏度，產熱等指標，都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，最終產氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如在BMP-2的發酵生產上，隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化，判斷細菌的長勢。
4. 商業化快速微生物檢測法
微生物的檢測，其發展方向是快速，准確，簡便，自動化，當前很多生物製品公司利用傳統微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀器設備，正逐步廣泛應用於醫學微生物檢測和科學研究領域。例如：
4.1 試劑盒，培養基等手段
抗干擾培養基和微生物數量快速檢測技術結合解決了傳統微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統奠定了堅實的基礎。如：抗干擾微生物培養基，新型生化鑒定管，微生物計數卡，環境質量檢測試劑盒等，可方便的用於多項檢測。
4.2 藉助新型先進儀器
BACTOMETER全自動各類總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時內獲得監測結果，樣本顏色及光學特徵都不影響讀數，對酵母和黴菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法(Impedance Technology)將待測樣本與培養基置於反應試劑盒內，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長而產生阻抗改變。如微生物生長時可將培養基中的大分子營養物經代謝轉變為活躍小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從而比傳統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數，酵母菌，大腸桿菌群，黴菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。
微生物OD值是反映菌體生長狀態的一個指標，OD是Optical Density(光密度)的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度。通常400～700 nm 都是微生物測定的范圍，需要紫外分光光度計測最大吸收波長。用得最多的是：505 nm測菌絲菌體、560 nm測酵母、600 nm測細菌。用測OD方法畫微生物生長曲線時，同一株菌的起始培養濃度可以准備多管(根據檢測點的需要，如需檢測10個點，就准備10管)，然後每個點取一管出來測OD值就行了。
一般測菌體密度的OD的波長范圍是580 nm-660 nm，如枯草芽孢桿菌用600 nm，已經屬於可見光區(200 nm～400 nm為紫外光區，400 nm～800 nm為可見光區)。空白如用水做，需要離心洗滌菌體;空白如用不接種的培養基做就不需要洗滌，但是不接種的培養基要和接種的同時培養以求條件一致，最後注意一般OD值在控制在0.1~0.4最好，在這個區內的值就可靠，如果OD大於1.0，一般要稀釋後再測，因為OD太大，分光光度計的靈敏度就會顯著降低。
一般都測吸光值，而且最好是整個實驗過程中，保持發酵液或菌體的稀釋倍數一致，吸光值與稀釋倍數不一定成正比，可保證整個實驗點有可比性。且取值的時候要連續讀數，重復3次的數最好。
另，用分光光度計測微生物的OD值為什麼要把波長設為600 nm
這個波長其實只是針對濁度，而分光光度計在600 nm處對濁度的反應比較靈敏。測吸收峰的實際意義並不大，比如LB搖瓶培養過夜的大腸桿菌，其實在400多納米處的吸收最大，但那很可能是培養液的吸收峰。
③ 離心微生物細胞需要多大的RCF
一般只是集菌的話5000rpm-6000rpm，5分鍾就夠了。
離心機轉速與相對離心力的換算公式為：
RCF=11.18×(RPM/1000)2×R rpm=299×√RCF/R
另類換算方法：r/min=1000×[G/(11.18×半徑]1/2
r/min=1000×[400/(11.18×半徑]1/2
R為半徑， RCF相對離心力，rpm為轉速，√為開平方;
「半徑」為離心機軸中央到水平離心機試管底部的距離，或垂直式離心機試管口中央的距離。
④ 原代細胞培養時離心的轉速一般多少
各個不同的離心機同樣的離心力下轉速可能會有差異。各個組織的不同細胞可能又適合不同的離心力。所以原代細胞培養時離心的轉速最好是根據離心力來換算，具體細胞組織具體調整，正常離心的離心力最好是100g到200g，換算後的轉速一般是1000rpm每分鍾到2000rpm每分鍾，一共離心5分鍾。離心細胞的效果比較好，對細胞的損傷都比較小。
⑤ 如何根據分子量大小確定離心轉速和時間
，其中r為離心機轉軸中心與離心套管底部內壁的距離;s2)的倍數來表示單位；rpm為離心機每分鍾的轉數RCF(relativecentrifugalforce)為相對離心力欲回收動物細胞。合適的離心轉速是根據相對離心力決定。RCF=1,5-10分鍾.119×105×r×(rpm)2，以重力加速度g(980，其離心速率一般為300×g(約1OOOrpm).66cm/
⑥ 欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速
欲回收動物細胞，其離心速率一般為300×g(約1OOOrpm),5-10分鍾，轉速過高或離心時間過長都將造成細胞死亡。合適的離心轉速是根據相對離心力決定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2 ，其中r為離心機轉軸中心與離心套管底部內壁的距離；rpm為離心機每分鍾的轉數；RCF(relative centrifugal force)為相對離心力，以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數來表示單位。
⑦ 離心除去細菌多大離心力或轉速比較好（細菌，離心力
看你需要離心到什麼程度啊，是要離心固體雜質還是菌體也要離心，還是需要提取的就是菌體等等，你可以自己試驗嘛，一般1500轉到3000轉每分鍾就能把菌體沉澱出來，我們曾經還用過8000轉的，具體情況具體分析，o(∩_∩)o~
⑧ 求助，微生物沉澱的離心轉速是多少
微生物沉澱的離心轉速是多少
1. 差速沉降離心法：
這是最普通的離心法。即採用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進行離心，使沉降速度不同的顆粒，在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法。此法一般用於分離沉降系數相差較大的顆粒。
差速離心首先要選擇好顆粒沉降所需的離心力和離心時間。當以一定的離心力在一定的離心時間內進行離心時，在離心管底部就會得到最大和最重顆粒的沉澱，分出的上清液在加大轉速下再進行離心，又得到第二部分較大較重顆粒的沉澱及含較小和較輕顆粒的上清液，如此多次離心處理，即能把液體中的不同顆粒較好地分離開。此法所得的沉澱是不均一的，仍雜有其它成分，需經過2～3次的再懸浮和再離心，才能得到較純的顆粒。
此法主要由於組織勻漿液中分離細胞器和病毒，其優點是：操作簡易，離心後用傾倒法即可將上清液與沉澱分開，並可使用容量較大的角式轉子。缺點是：須多次離心，沉澱中有夾帶，分離效果差，不能一次得到純顆粒，沉澱於管底的顆粒受擠壓，容易變性失活。
2. 密度梯度區帶離心法（簡稱區帶離心法）：
區帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區帶的分離方法。
此法的優點是：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒；②適應范圍廣，能象差速離心法一樣分離具有沉降系數差的顆粒，又能分離有一定浮力密度差的顆粒；③顆粒不會擠壓變形，能保持顆粒活性，並防止已形成的區帶由於對流而引起混合。
此法的缺點是：①離心時間較長；②需要制備惰性梯度介質溶液；③操作嚴格，不易掌握。
密度梯度區帶離心法又可分為兩種：
（1）差速區帶離心法：當不同的顆粒間存在沉降速度差時（不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數差）。在一定的離心力作用下，顆粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介質的不同區域上形成區帶的方法稱為差速區帶離心法。此法僅用於分離有一定沉降系數差的顆粒（20% 的沉降系數差或更少）或分子量相差3倍的蛋白質，與顆粒的密度無關，大小相同，密度不同的顆粒（如線粒體，溶酶體等）不能用此法分離。
離心管先裝好密度梯度介質溶液，樣品液加在梯度介質的液面上，離心時，由於離心力的作用，顆粒離開原樣品層，按不同沉降速度向管底沉降，離心一定時間後，沉降的顆粒逐漸分開，最後形成一系列界面清楚的不連續區帶，沉降系數越大，往下沉降越快，所呈現的區帶也越低，離心必須在沉降最快的大顆粒到達管底前結束，樣品顆粒的密度要大於梯度介質的密度。梯度介質通常用蔗糖溶液，其最大密度和濃度可達1.28 kg/cm3和60％。 此離心法的關鍵是選擇合適的離心轉速和時間 。
（2）等密度區帶離心法：離心管中預先放置好梯度介質，樣品加在梯度液面上，或樣品預先與梯度介質溶液混合後裝入離心管，通過離心形成梯度，這就是預形成梯度和離心形成梯度的等密度區帶離心產生梯度的二種方式。
離心時，樣品的不同顆粒向上浮起，一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上，形成幾條不同的區帶，這就是等密度離心法。體繫到達平衡狀態後，再延長離心時間和提高轉速已無意義，處於等密度點上的樣品顆粒的區帶形狀和位置均不再受離心時間所影響，提高轉速可以縮短達到平衡的時間，離心所需時間以最小顆粒到達等密度點（即平衡點）的時間為基準，有時長達數日。
等密度離心法的分離效率取決於樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越好，與顆粒大小和形狀無關，但大小和形狀決定著達到平衡的速度、時間和區帶寬度。
等密度區帶離心法所用的梯度介質通常為氯化絕CSCl，其密度可達1.7 g/cm3。此法可分離核酸、亞細胞器等，也可以分離復合蛋白質，但簡單蛋白質不適用。
⑨ 離心的轉速和時間怎麼決定
離心分離的效果除了與離心機種類、離心方法、離心介質及密度梯度等因素有關以外，實際操作時，主離心機轉速和離心時間的確定、離心介質的PH值和溫度等條件也至關重要。
(一)離心機的轉速
離心加速度的大小取決於轉子的轉速和顆粒的旋轉半徑。在說明離心條件時，往往也用相對離心力場來表示。實際工作中，離心力場的數據是指其平均值。即是指在離心溶液中點處顆粒所受的離心力場。
(二)離心時間
離心時間依據離心方法的不同而有所差別。對於差速離心來說，是指某種顆粒完全沉降到離心管底的時間；對等密度梯度離心而言，離心時間是指顆粒完全到達等密度點的平衡時間；而密度梯度離心所需的時間則是指形成界限分明的區帶的時間。對於密度梯度離心和等密度梯度離心所需的區帶形成時間或平衡時間，影響因素很復雜，可通過試驗後確定。
顆粒的沉降時間又稱澄清時間，是指顆粒從離心樣品液液面完全沉降到離心管底所需的時間。沉降時間決定於顆粒沉降速度和沉降距離。
(三)溫度和PH值
為了防止分離物質的凝集、變性和失活，除了在離心介質的選擇方面加以注意外，還必須控制好溫度及介質溶液的PH值等離心條件。離心溫度一般控制在4度左右，對於某些熱穩定性較好的酶等，離心也可在室溫下進行。但在超速或高速離心時，轉子高速旋轉會發熱從而引起溫度升高。故必須採用冷凍系統，使溫度保持在一定范圍內。
離心介質溶液的PH值應該是處於酶穩定的PH范圍內，必要時可採用緩沖液。另外，過酸或過鹼還可能引起轉子和離心機的其他部件的腐蝕，應盡量避免。