⑴ 如何用光敏生物素標記質粒
如何用光敏生物素標記質粒
常將放射性同位素如32 P連接到某種脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）上做為標記物，然後通過切口平移法標記探針。
切口平移法（nick translation）是利用大腸桿菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多種酶促活性將標記的dNTP摻入到新形成的DNA鏈中去，形成均勻標記的高比活DNA探針。其操作方法如下：
⑴取1?g DNA溶於少量無菌雙蒸水中，加入5?l距離大約10×切口平移緩沖液 (0.5mol/L Tris－HCl，PH7.2；0.1 mol/L MgSO4 ；1mmol/L二硫蘇糖醇；500?g/mL牛血清白蛋白），加入除標記物（如?-32 p-dATP）外的其它三種dNTP（如dCTP，dGTP，dTTP）溶液，20mmol/L溶液各1?l。
⑵加入100?ci（10?l）標記物溶液，加入無菌雙蒸水至終體積為46.5?l，混勻，加入0.5?l稀釋的DNaseI溶液，混勻；加入1?l（約5單位）E.coli DNA polymerase I，混勻。
⑵ 50分急求 如何用光敏生物素標記質粒
生物素化質粒ds-DNA：將含質粒pBR332的大腸桿菌在含氨苄青黴素的LB培養基中擴增，取純培養物用MagicTM DNA純化系統，按Promega公司所附操作說明書提取質粒ds-DNA。取純化的不含單鏈DNA的大腸桿菌質粒ds-DNA直接與長臂光敏生物素混合，用游標記燈進行光照標記，以制備生物素化質粒ds-DNA。可參考以下步驟：在一滅菌EP管中加待標記DNA 5ug／10uL，在暗室中加入5ug／uL光敏生物素，充分混勻，置冰浴中。
在特製光源下10cm處照射20min。加入100mmol／LTris-HCl，pH9．0(含0．1mmol／LEDTA)10uL，混勻。再加入等體積仲丁醇，混勻。離心lmin(10 000r／rain)，吸去上層仲丁醇，棄去。再加入仲丁醇25uL，重復提取游離的光敏生物素。吸去上層無色仲丁醇後，加入5uL3mol／L醋酸鈉，充分混勻，加入冷無水酒精100gL充分混勻，沉澱標記的DNA，置-20℃過夜(或-70℃l5min)，15 000r／min離心20min，沉澱物再用70％乙醇洗1次，離心，抽干，溶於0．1mmol／LEDTA或TK中，測定探針濃度，分裝，保存於-20℃。
⑶ 怎樣用生物素標記dna
先用限制性內切酶在DNA上切出兩個粘性末端，然後在DNA連接酶的配合下用與這個粘性末端相配的有標志性的（可以是放射性和熒光性等同位素一般屬於放射性）DNA片段標記出來，簡單地說就是這樣～
⑷ 求助生物素-親和素標記技術的優缺點
BAS在實際應用中所具有的巨大優越性，主要表現在以下幾個方面。
靈敏度
生物素容易與蛋白質和核酸類等生物大分子結合，形成的生物素衍生物，不僅保持了大分子物質的原有生物活性，而且比恬度高，具多價性。此外，每個親和素分子有四個生物素結合部位，可同時以多價形式結合生物素化的大分子衍生物和標記物。因此，BAS具有多級放大作用，使其在應用時可極大地提高檢測方法的靈敏度。
特異性
親和素與生物素間的結合具有極高的親和力，其反應呈高度專一性。因此，BAS的多層次放大作用在提高靈敏度的同時，並不增加非特異性干擾。而且，BAS結合特性不會因反應試劑的高度稀釋而受影響，使其在實際應用中可最大限度地降低反應試劑的非特異作用。
穩定性
親和素結合生物素的親和常數可為抗原-抗體反應的百萬倍，二者結合形成復合物的解離常數很小，呈不可逆反應性；而且酸、鹼、變性劑、蛋白溶解酶以及有機溶劑均不影響其結合。因此，BAS在實際應用中，產物的穩定性高，從而可降低操作誤差，提高測定的精確度。
普適性
生物素-親和素系統的多功能性還能提供一套統一的研究方法。例如對於某待測分子，已經得到了對於該分子的生物素標記抗原，那麼配合結合親和素的膠體金可以在電鏡下觀測，配合結合熒游標記的親和素可以使用流式細胞儀篩選，配合連接到酶的親和素可以進行ELISA等免疫組化實驗。
其他
BAS可依據具體實驗方法要求製成多種通用性試劑（如生物素化第二抗體等）適用於不同的反應體系，而且都可高度稀釋，用量很少，實驗成本低；尤其是BAS與成本高昂的抗原特異性第一抗體偶聯使用，可使後者的用量大幅度減少，節約實驗費用．此外，由於生物素與親和素的結合具高速、高效的特性，盡管BAS的反應層次較多，但所需的溫育時間不長，實驗往往只需數小時即可完成
⑸ 生物素標記 5'3'dna 哪個好
EMSA結合反應：(1) 如下設置EMSA結合反應陰性對照反應：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift結合緩沖液(5X) 2微升細胞核蛋白或純化的轉錄因子 0微升標記好的探針 1微升總體積 10微升樣品反應：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift結合...
BAS-ELISA是在常規ELISA原理的基礎上，結合生物素(B)與親和素(A)間的高度放大作用，而建立的一種檢測系統。生物素很易與蛋白質(如抗體等)以共價鍵結合。這樣，結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產生反應，既起到了多級放大作用，又由於酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。
⑹ FAM 標記RNA原理是什麼
DNA探針的標記方法較成熟，有多種方法可供選擇，如缺口平移法、隨機引物法、PCR標記法等，能用於同位素和非同位素標記。
DNA探針技術又稱分子雜交技術，是利用DNA分子的變性、復性以及鹼基互補配對的高度精確性，對某一特異性DNA序列進行探查的新技術。DNA探針是利用同位素、生物素等標記的特定DNA片斷，該片斷可大至寄生蟲基因組DNA，小至20個鹼基。當DNA探針與待測的非標記單鏈DNA（或RNA）按鹼基順序互補結合時，以氫健將2條單鏈連接而形成標記DNA-DNA（或標記DNA-RNA）的雙鏈雜交分子。將未配對結合的核苷酸溶解後用檢測系統（放射自顯影或酶檢測等）檢測雜交反應結果。由於DNA分子鹼基互補的精確性，單連DNA探針僅與樣品中變性處理的DNA單鏈出現配對雜交，由此決定了探針的特異性；用放射性同位素（如32P）或生物素標記探針，使雜交試驗同時具有高度的敏感性
⑺ 生物素標記是什麼
生物素是個蛋白，標記就是把這個蛋白標記到別的上面便於檢測
⑻ 生物素標記在dna5'和3'的區別
相同點：不能發動新鏈的合成，只催化已有鏈的延長。都有5'端到3'端聚合的作用，3'端到5'端外切得作用。不同點：DNA聚合酶I還有5'端到3'端外切的作用。而DNA聚合酶III沒有此功能。DNA聚合酶I的主要作用是切去岡崎片段5'端得引物。DNA聚合酶III是DNA復制的主要酶。
⑼ 高通量測序時為什麼要用生物素標記
事物系統的諸要素所固有的相對穩定的組織方式或聯結方式。體現為要素的組織、總合、集合。諸多要素藉助於結構形成系統。物質系統的結構可分為空間結構與時間結構。
⑽ 在基因工程中,標記基因是怎麼標記的同位素標記法
童鞋你好=
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我想您可能記錯了-
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基因工程第四部
目的基因的檢測與鑒定。
檢測的方法是DNA分子雜交技術。用轉基因生物的基因組DNA提取出來
在還有目的基因的DNA片段上用放射性同位素標記法做標記
以此作為探針。。
而不是標記基因。
假如說你直接標記上了目的基因，同位素進入到DNA中的位置是不確定的，也就是只要新合成的DNA都可能攜帶同位素，這樣的話不只有目的基因帶有同位素了。。。。