如何做微生物鏡檢

1. 微生物鏡檢塗片步驟

塗片是將微生物培養物塗在載波片上，用來觀察死的微生物。微生物剛放到波片上是活的，但經過固定步驟就將其殺死了。如果塗片太厚，就難以觀察單個細胞，如果太薄，就可能找不到微生物。如果將塗片時攪動太厲害，又會破壞原來細胞的排布。塗片後應使其完全風干。然後將其快速通過火焰3～4次，這個過程成為熱固定。若固定主要目的有三個：1.殺滅微生物，2.使微生物黏附在載波片上，3.使菌體跟容易染色。如果載波片還沒在完全風乾的時候將其在火焰上移動，菌體就會煮沸二被破壞。如果熱固定不夠，菌體就無法粘在載波片上，在後續步驟中容易被沖洗掉。

2. 生物里的鏡檢是什麼

生物里的鏡檢是在顯微鏡下檢查。
鏡檢一詞更多時候不是用在生物上，
而是用在醫學檢查上，
及醫學研究上。

3. 微生物鏡檢的化驗怎麼做

做微生物鏡檢首先要對微生物進行培養，
1.一般適溫培養18-24h，
2.革蘭氏染色：1）塗片固定。
2）草酸銨結晶紫染1分鍾。
3）自來水沖洗。
4）加碘液覆蓋塗面染約1分鍾。
5）水洗，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。
7）蕃紅染色液（稀）染2分鍾後，自來水沖洗。
3.乾燥，鏡檢。

4. 用顯微鏡觀察細菌的步驟

一、用臟手上的細菌制裝片：

1、收集手上細菌，用少量無菌水（可用冷開水代替）沖洗臟手，讓洗手的水流到培養皿中。這些臟水就是細菌培養液。

2、製取細菌裝片，取甲、乙兩塊潔凈的載玻片，分別在兩玻片的中央各滴一小滴細菌培養液；然後在甲片上蓋好蓋玻片後直接用600倍的顯微鏡觀察。

（用稍偏暗的視野，調節到位可以看到多種細菌和其它微生物。很容易看到活動的微生物，這樣對兒童更有吸引力和教育意義。）如果你想進一步放大並會操作，選定觀察的物象後，可把此物象移到視野正中央，再轉換更高倍數的鏡頭觀察即可。

3、在乙片的細菌培養液滴上滴一小滴龍膽紫染色液，用牙簽將細菌培養液和龍膽紫液攪勻、並將液滴推開，再用酒精燈加熱液滴（約5秒鍾）後讓它自然晾乾（約5分鍾）。

再用600倍的顯微鏡直接觀察，既可以看到染成深藍色的多種細菌和其它微生物。不過此時看到的微生物都已死亡、並被固定，因此看不到它們的活動狀態。

二、製取洗手後的對照裝片。

1、洗手－－－－－將手用香皂洗干凈，用潔凈的干毛巾揩乾手；

2、收集細菌培養液－－－－－－－用少量無菌水沖洗雙手，讓洗手液流入潔凈的培養皿中；

3、制細菌裝片－－－－－製片過程與以上裝片過程相同，參照製片即可。

(4)如何做微生物鏡檢擴展閱讀：

細菌的基本形態與大小

（1）球菌：

球菌是外形呈圓球形或橢圓形的細菌，直徑0．5～1微米，有以下幾種類型：

①單球菌：單獨存在，如尿素小球菌；②雙球菌：如肺炎雙球菌；

③鏈球菌：如乳酸鏈球菌；④四聯球菌：形成的4個細胞排列在一起，成田字，如四聯球菌；

⑤八疊球菌：如尿素生孢八疊球菌；⑥葡萄球菌：如金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）。

（2）桿菌：

外形為桿狀的細菌稱桿菌，常有長寬接近的短桿或球桿狀菌，如甲烷短桿菌屬（Methano—brevibacter）；

長寬相差較大的棒桿狀或長桿狀菌，如枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、梭狀桿菌（Bacteriumfusiformis）；

分枝狀或叉狀菌，如雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）；竹節狀（兩端平截），如炭疽芽孢桿菌（Bacillusanthracis）等。

按桿菌細胞的排列方式不同則有成對的雙桿菌、呈鏈狀的鏈桿菌，另外，常有柵狀、「八」字狀以及由鞘衣包裹在一起的絲狀等多種。典型的桿菌有大腸桿菌、枯草桿菌、鏈桿菌、變形桿菌［2］。

（3）螺旋狀：

螺旋狀的細菌稱螺旋菌，一般長5～50微米，寬0．5～5微米，根據菌體的彎曲可分為：

①弧菌（Vibrio）：螺旋不足一環者呈香蕉狀或逗點狀，如霍亂弧菌（Vibriocholerae）；②螺菌（Spirillum）：滿2～6環的小型、堅硬的螺旋狀細菌，如小螺菌（Spirillumminor）；

③螺旋體（Spirochaeta）：旋轉周數多（通常超過6環）、體長而柔軟的螺旋狀細菌，如梅毒螺旋體（TreponemaPallim）。

5. 怎麼製作微生物的製片，然後用顯微鏡觀察

(1) 以油性簽字筆在載玻片之背面畫個圈 並寫上所要鑒定之細菌的名稱。
，
(2) 在圓圈正面滴上一滴水，水滴越小滴越好，如有需要，可將多餘的水
擦去。
(3) 用牙簽沾取一點菌落塗於載玻片正面的圓圈中(勿沾取太多的細菌)。
(4) 待塗布的菌液完全風乾後(切記不可用火燒乾，以免破壞細菌細胞壁的
結構)，讓載玻片在火上來回數次，使細菌固定(每次通過火焰後均需
稍冷卻，載玻片之溫度以不燙手為原則)。

一）正置顯微鏡

1、安放

右手握住鏡臂，左手托住鏡座，使鏡體保持直立。桌面要清潔、平穩，要選擇臨窗或光線充足的地方。單筒的一般放在左側，距離桌邊3～4厘米處。

2、清潔

檢查顯微鏡是否有毛病，是否清潔，鏡身機械部分可用干凈軟布擦拭。透鏡要用擦鏡紙擦拭，如有膠或粘污，可用少量二甲苯清潔之。

3、對光

鏡筒升至距載物台1～2厘米處，低倍鏡對准通光孔。調節光圈和反光鏡，光線強時用平面鏡，光線弱時用凹面鏡，反光鏡要用雙手轉動。
若使用的為帶有光源的顯微鏡，可省去次步驟，但需要調節光亮度的旋鈕。

4、安裝標本

將玻片放在載物台上，注意有蓋玻片的一面一定朝上。用彈簧夾將玻片固定，轉動平台移動器的旋鈕，使要觀察的材料對准通光孔中央。

5、調焦

調焦時，先旋轉粗調焦旋鈕慢慢降低鏡筒，並從側面仔細觀察，直到物鏡貼近玻片標本，然後左眼自目鏡觀察，左手旋轉粗調焦旋鈕抬升鏡筒，直到看清標本物像時停止，再用細調焦旋鈕回調清晰。
操作注意：不應在高倍鏡下直接調焦；鏡筒下降時，應從側面觀察鏡筒和標本間的間距；要了解物距的臨界值。
若使用雙筒顯微鏡，如觀察者雙眼視度有差異，可靠視度調節圈調節。另外雙筒可相對平移以適應操作者兩眼間距。

6、觀察

若使用單筒顯微鏡，兩眼自然張開，左眼觀察標本，右眼觀察記錄及繪圖，同時左手調節焦距，使物象清晰並移動標本視野。右手記錄、繪圖。
鏡檢時應將標本按一定方向移動視野，直至整個標本觀察完畢，以便不漏檢，不重復。
光強的調節：一般情況下，染色標本光線宜強，無色或未染色標本光線宜弱；低倍鏡觀察光線宜弱，高倍鏡觀察光線宜強。除調節反光鏡或光源燈以外，虹彩光圈的調節也十分重要。

（1）低倍鏡觀察

觀察任何標本時，都必須先使用低倍鏡，因為其視野大，易發現目標和確定要觀察的部位。

（2）高倍鏡觀察

從低倍鏡轉至高倍時，只需略微調動細調焦旋鈕，即可使物像清晰。
使用高倍鏡時切勿使用粗調焦旋鈕，否則易壓碎蓋玻片並損傷鏡頭。
轉動物鏡轉換器時，不可用手指直接推轉物鏡，這樣容易使物鏡的光軸發生偏斜，轉換器螺紋受力不均勻而破壞，最後導致轉換器就會報廢。

（3）油鏡的觀察

先用低倍鏡及高倍鏡將被檢物體移至視野中央後，再換油鏡觀察。油鏡觀察前，應將顯微鏡亮度調整至最亮，光圈完全打開。
使用油鏡時，先在蓋玻片上滴加一滴香柏油（鏡油），然後降低鏡筒並從側面仔細觀察，直到油鏡浸入香柏油並貼近玻片標本，然後用目鏡觀察，並用細調焦旋鈕抬升鏡筒，直到看清標本的焦段時停止並調節清晰。
香柏油滴加要適量。油鏡使用完畢後一定要用擦鏡紙沾取二甲苯擦去香柏油，並再用乾的擦鏡紙擦去多餘二甲苯。

7、結束操作

觀察完畢，移去樣品，扭轉轉換器，使鏡頭V字型偏於兩旁，反光鏡要豎立，降下鏡筒，擦抹乾凈，並套上鏡套。
若使用的是帶有光源的顯微鏡，需要調節亮度旋鈕將光亮度調至最暗，再關閉電源按鈕，以防止下次開機時瞬間過強電流燒壞光源燈

6. 微生物鏡檢的化驗怎麼做

做微生物鏡檢首先要對微生物進行培養，
1.一般適溫培養18-24h，
2.革蘭氏染色：1）塗片固定。 2）草酸銨結晶紫染1分鍾。 3）自來水沖洗。 4）加碘液覆蓋塗面染約1分鍾。 5）水洗，用吸水紙吸去水分。 6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。 7）蕃紅染色液（稀）染2分鍾後，自來水沖洗。
3.乾燥，鏡檢。

7. 微生物鏡檢塗片步驟

單染色法，以觀察菌體形態為主。
1、把泡在酒精中的片子用鑷子夾出，放在酒精燈上點燃，去掉片子上的酒精及油脂。
2、片子冷卻後，蘸一接種環發酵液，均勻地塗在片子上。
3、塗後的片子，於酒精燈火焰上過幾遍，使所塗的細菌固定在片子上，注意，片子溫度不易過高，以不燙手背為主，溫度過高，會使菌變形，影響觀察結果。
4、片子塗菌的位置，滴幾滴結晶紫染液，使染液完全覆蓋住所塗的菌，染1分鍾左右。
5、用水沖洗片子至無紫色水流下後，進行火焰烤乾。
6、鏡下觀察。在塗點處滴1滴香柏油，於油鏡下觀察菌體形態。

8. 怎樣做微生物的鏡檢

取一滴試液，放載玻片上，蓋上蓋玻片，放顯微鏡下看就行了。如果需要計數，就是用血球計數板。這是最簡單的了，不過這樣恐怕看不出什麼啊。光是看形態來判斷種類嗎？

9. 做微生物實驗的步驟

操作步驟
1．塗片將培養14—16小時的枯草芽孢桿菌和培養24小時的大腸桿菌分別作塗片（注意塗片切不可過於濃厚），乾燥、固定。固定時通過火焰1—2次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。
2．染色
（1）初染
加草酸銨結晶紫一滴，約一分鍾，水洗。
（2）媒染
滴加碘液沖去殘水，並覆蓋約一分鍾，水洗。
（3）脫色
將載玻片上面的水甩凈，並襯以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止，約20—30秒鍾，立即用水沖凈酒精。
（4）復染
用番紅液染1—2分鍾，水洗。
（5）鏡檢
乾燥後，置油鏡觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為准，過於密集的細菌，常常呈假陽性。
（6）同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合製片，作革蘭氏染色對比。
革蘭氏染色的關鍵在於嚴格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為陰性菌；而脫色不夠時，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，菌齡也影響染色結果，如陽性菌培養時間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應。

10. 疑似肺結核病人，應如何進行微生物學檢驗

標本標本的選擇根據感染部位。可取痰、支氣管灌洗液、尿、糞、腦脊液或胸、腹水。其他肺外感染可取血或相應部位分泌液或組織細胞。直接塗片鏡檢標本直接塗片或集菌後塗片，用抗酸染色。若找到抗酸陽性菌即可初步診斷。抗酸染色一般用ziehl-neelsen法。為加強染色，可用ik(intensified kinyoun)法染色。將石炭酸復紅染色過夜，用0.5% 鹽酸乙醇脫色30s，則包括大多結核分枝桿菌l型也可著色。為提高鏡檢敏感性，也可用金胺染色，在熒光顯微鏡下結核分枝桿菌呈顯金黃色熒光。濃縮集菌先集菌後檢查，可提高檢出率。培養與動物試驗也必須經集菌過程以除去雜菌。腦脊液和胸、腹水無雜菌，可直接離心沉澱集菌。痰、支氣管灌洗液、尿、糞等污染標本需經4% naoh（痰和鹼的比例為1:4,尿、支氣管灌洗液和鹼的比例為1:1）處理15min，時間過長易使結核分枝桿菌l型與非結核分枝桿菌死亡。尿標本先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml於錐形量筒內靜置，取沉澱物處理。處理後的材料再離心沉澱。取沉澱物作塗片染色鏡檢。若需進一步作培養或動物接種，應先用酸中和後再離心沉澱。分離培養將經中和集菌材料接種於固體培養基，器皿口加橡皮塞於37℃培養，每周觀察1次。結核分枝桿菌生長緩慢，一般需2～4周長成肉眼可見的落菌。液體培養可將集菌材料滴加於含血清的培養液，則可於1～2周在管底見有顆粒生長。取沉澱物作塗片，能快速獲得結果，並可進一步作生化、葯敏等測定和區分結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌。國內學者已證明結核分枝桿菌l型可存在於血細胞內或粘附於細胞表面。這種患者往往血沉加快，用低滲鹽水溶血後立即接種高滲結核分枝桿菌l型培養基能提高培養陽性率。動物試驗將集菌後的材料注射於豚鼠腹股溝皮下，3～4周後若局部淋巴結腫大，結核菌素試驗陽轉，即可進行解剖。觀察肺、肝、淋巴結等器官有無結核病變，並作形態、培養等檢查。若6～8周仍不見發病，也應進行解剖檢查。快速診斷一般塗片檢查菌數需5x103～4/ml,培養需1x102/ml,標本中菌數少於此數時不易獲得陽性結果，且培養需時較長。目前已將多聚酶鏈反應（pcr）擴增技術應用於結核分枝桿菌dna鑒定，每ml中只需含幾個細菌即可獲得陽性，且1?2d得出結果。操作中需注意實驗器材的污染問題，以免出現假陽性。又細菌l型由於缺壁並有代償性細胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使細胞膜破裂釋出dna，以致造成pcr假陰性。用組織磨碎器充分研磨使細胞破裂後，則可出現陽性。目前有條件的單位使用bactec法，以含14c棕櫚酸作碳源底物的7h12培養基，測量在細菌代謝過程中所產生的14c量推算出標本中是否有抗酸桿菌，5～7d就可出報告。