生物樣品常用什麼分析方法

『壹』 生物科學常用的研究方法有哪三種

科學探究常用的方法有觀察法、實驗法、調查法和資料分析法等．
（1）觀察法是科學探究的一種基本方法．觀察法是在自然狀態下，研究者按照一定的目的和計劃，用自己的感官外加輔助工具，對客觀事物進行系統的感知、考察和描述，以發現和驗證科學結論．觀察時要全面、細致、實事求是，並及時記錄下來；要有計劃、要耐心；要積極思考，及時記錄；要交流看法、進行討論．
（2）實驗法是現代生物學研究的重要方法．實驗法是利用特定的器具和材料，通過有目的、有步驟的實驗操作和觀察、記錄分析，發現或驗證科學結論．一般步驟：①發現並提出問題；②收集與問題相關的信息；③作出假設；④設計實驗方案；⑤實施實驗並記錄；⑥分析實驗現象；⑦得出結論．
（3）調查是科學探究的常用方法之一．調查時首先要明確調查目的和調查對象，制訂合理的調查方案．調查過程中有時因為調查的范圍很大，就要選取一部分調查對象作為樣本．調查過程中要如實記錄．對調查的結果要進行整理和分析，有時要用數學方法進行統計．
（4）收集和分析資料也是科學探究的常用方法之一．收集資料的途徑有多種．去圖書管查閱書刊報紙，拜訪有關人士，上網收索．其中資料的形式包括文字、圖片、數據以及音像資料等．對獲得的資料要進行整理和分析，從中尋找答案和探究線索．

『貳』 生物樣品分離有哪些實驗技術

生物樣品分離的實驗技術：吸附柱層析，薄層層析，離子交換層析，凝膠過濾。

離子交換層析是在以離子交換劑為固定相，液體為流動相的系統中進行的。離子交換劑是由基質、電荷基團和反離子構成的。離子交換劑與水溶液中離子或離子化合物的反應，主要以離子交換方式進行，或藉助離子交換劑上電荷基團對溶液中離子或離子化合物的吸附作用進行。

典型性

采樣的部位要能充分反映所了解的情況，這就是典型性。而適時性是根據研究的目的和環境污染物對植物的影響，必須按照植株的生長狀況，發育階段以及植株的不同部位，如根、莖、葉和果實或具體要求進行分別采樣。為了植株同一部分進行比較分析，不能將植株的上、下部位隨意混合。

以上內容參考：網路-生物樣品

『叄』 測定微生物的生物量有哪些主要方法

測定微生物的生物量有哪些主要方法
測定的方法主要有四種：

1.直接計數測定：根據微生物種類，有血球計數板和細菌計數板；

2.比濁法：根據菌懸液的濃度在一定范圍內與光密度成正比，可以用分光光度計測OD值，用OD值表示樣品菌液濃度；

3.核酸計數法：熒光定量PCR技術；

4.活菌計數法：MPN和平板計數法由於測定方法的限制。新鮮土樣經氯仿熏蒸後（24h），土壤微生物死亡細胞發生裂解，釋放出微生物生物量碳，用一定體積的LK2SO4溶液提取土壤，借用有機碳自動分析儀測定微生物生物量碳含量。根據熏蒸土壤與未熏蒸土壤測定有機碳的差值及轉換系數（KEC），從而計算土壤微生物生物量碳。

『肆』 葯品檢驗時，有哪些常用分析方法

1、重量分析法：

重量分析法是葯物分析檢測中化學分析的基礎方法，指的是稱取一定重量的試樣，用適當的方法將被測組分與試樣中其他組分分離後，轉化成一定的稱量形式，稱重，從而求得該組分含量的方法。

2、酸鹼滴定法：

酸鹼滴定法在葯品分析檢測中的應用十分廣泛，是將一種已知其准確濃度的試劑溶液滴加到被測物質的溶液中，直到化學反應完全時為止，然後根據所用試劑溶液的濃度和體積可以求得被測組分的含量。

3、PH值測定方法：

pH值是溶液中氫離子活度的負對數，用來表示溶液的酸度。用於pH值測定的裝置稱為pH計或酸度計，酸度計由pH測量電池和pH指示器兩部分組成。

4、光譜技術：

光譜技術的主要原理就是可以通過不同的頻率對其要檢測的葯物進行輻射，在一定范圍中的頻率被一些物質接受的時候就會出現振動以及轉動的狀況。

5、化學發光技術：

在葯物分析檢測中，化學發光法是一種較為常見的技術方式，其主要就是基於化學檢測系統中相關檢測物的濃度以及體系的化學發光強度在特定狀況之下呈線性定量關系的原理，通過儀器對整個體系的化學發光強度進行檢測，確定待檢測的實際含量的方式就是一種痕量分析方法。

6、色譜法：

色譜法又稱為「色譜分析」、「色譜分析法」、「層析法」，是一種分離以及分析的方式與手段。它主要就是通過不同的物質在不同的相態之下對其進行有選擇的分配，通過流動相對固定相中存在的混合物進行洗脫操作，而在混合物中存在的不同物質會則會通過不同的速度基於固定相進行移動，進而實現分離的最終效果。

7、電泳法：

電泳法是生物技術及生化葯物分析的重要手段之一，具有靈敏度高、重現性好、檢測范圍廣、操作簡便並兼備分離、鑒定、分析等優點。

8、DNA擴增法：

DNA擴增技術屬於PCR技術，可以把試管中的DNA樣品的片段進行拓展，達到上百萬倍左右，可以通過肉眼直接對其進行觀察。

綜上，葯品質量的優劣關系著人民的用葯和身體健康，為了保證葯品的質量，應嚴格按照葯品質量標准進行葯物分析檢測，為葯品能否流通上市和提供用葯提供依據。

『伍』 為了保持生物樣品穩定性多採用什麼方法

需要做如下穩定性，每個穩定性試驗均包括三個濃度水平（低、中高），每個水平重復5個樣本。
1 凍融穩定性
從低至高3種不同濃度的質控樣品：LQC、MQC和HQC，經過3次反復凍融（-30℃至25℃）後制備分析。有些公司要求一個凍－融循環必須間隔12hr，即凍12hr後化凍12hr
2。制備後樣本穩定性
從低至高3種不同濃度的質控樣品：LQC、MQC和HQC，按照試驗方法制備5個，將處理後的樣品在模擬進樣環境中中放置24hr後分析測定。
3。室溫放置穩定性（模擬制備樣本環境，目的是為了保證制備過程中樣本穩定）
從低至高3種不同濃度的質控樣品：LQC、MQC和HQC，在室溫下（25℃，模擬制備樣本環境）放置24hr後，按照試驗方法制備分析5個。
4。儲備液穩定性（模擬使用標准儲備液配製血漿樣本的條件，目的是為了保證純品配製及使用過程中穩定）
配製化合物儲備液（標准品溶液），在室溫條件下分別於0hr和6hr進樣。這個只需要一個濃度水平，重復5個樣本
5。長期穩定性（模擬分析樣本儲存條件長期放置，目的是為了保證分析樣本儲存過程的穩定性）
將3個濃度的QC樣品（LQC, MQC,HQC,n=5）在－30度貯存3個月後，與新鮮配製的標准曲線樣品一同進行預處理和測定。從測定結果，可以考察穩定性。
如果你的分析樣本能在2周之內分析完畢，只需做2周的長期穩定性即可。

『陸』 生物樣品中蛋白質的處理方法有哪些

一。蛋白質沉澱方法
1.中性鹽鹽析法
⑴在一定的
ph值及溫度條件下，改變鹽的濃度（即離子強度）達到沉澱的目的，稱為「ks」分級鹽析法。
（ks鹽析：固定ph,
溫度，改變鹽濃度）
⑵在一定的離子強度下，改變溶液的ph值及溫度，達到沉澱的目的，稱為「β」分級鹽析法。
（β鹽析：固定離子強度，改變ph及溫度。）
2.等電點沉澱法
蛋白質等電點沉澱法是基於不同蛋白質離子具有不同等電點這一特性，依次改變溶液ph值的辦法，將雜蛋白沉澱除去，最後獲得目標產物。
3.有機溶劑沉澱法
許多能與水互溶的有機溶劑如乙醇、丙酮、甲醇和乙腈，常用於低鹽濃度下沉澱蛋白質。
4.非離子型聚合物沉澱法
20世紀60年代非離子型聚合物開始用於分離血纖維蛋白原和免疫球蛋白，從此高相對分子質量非離子聚合物沉澱蛋白質的方法被廣泛使用，如：聚乙二醇（peg）、聚乙烯吡咯烷酮（pvp）、葡聚糖等。
5.金屬沉澱法
能與羧基、胺基等含氮化合物以及含氮雜環化合物強烈結合的金屬離子，如：mn2+、fe2+、co2+、ni2+、cu2+、zn2+、cd2+；
能與羧酸結合而不與含氮化合物結合的金屬離子，如：ca2+、ba2+、mg2+、pb2+；
與巰基化合物強烈結合的金屬離子，如：hg2+、ag+、pb2+。
實際使用時，金屬離子的濃度常為0.02
mol/l。
6.親和沉澱
初始階段：將一個目標蛋白質與鍵合在可溶性載體上的親和配體絡合成沉澱；
所得沉澱物用一生中適當的緩沖溶液進行洗滌，洗去可能存在的雜質；
用一種適當的試劑將目標蛋白質從配體中離解出來。
7.選擇性變性沉澱法
（1）例如對於α-澱粉酶等熱穩定性好的酶，可以通過加熱進行熱處理，使大多數雜蛋白受熱變性沉澱而被除去。
（2）根據欲分離物質所含雜質的特性，通過改變ph值或加進某些金屬離子等使雜蛋白變性沉澱而被除去。
8.反膠束萃取蛋白質
菌體細胞提取
固液分離是生物產品生產中的重要單元操作。培養基、發酵液、某些中間產品和半成品等都需進行固液分離。發酵液由於種類多、粘度大及成分復雜，其固液分離最為困難。
固液分離的方法很多，生物工業中常規的方法有分離篩、重力沉降、浮選分離、離心分離和過濾等，其中用於發酵液固液分離的方法主要是離心分離和過濾。
二。超濾膜濾去。

『柒』 生物樣品分析方法一般從那幾個方面進行考察

那要看是哪一類的生物樣品，主要風險控制在於的方向。

一般要根據樣品的種類，所要測定的成份，來確定使用什麼葯品什麼測定方法。

對於植物主要是重金屬和農殘，鉛砷鉻鎘銅和DDt，666等。

對於動物主要是抗生素、寄生蟲葯等獸葯殘留和激素等。

一個生物分析方法的主要特徵包括：選擇性、定量下限、響應函數和校正范圍（標准曲線性能）、准確度、精密度、基質效應、分析物在生物基質以及溶液中儲存和處理全過程中的穩定性。

有時可能需要測定多個分析物。這可能涉及兩種不同的葯物，也可能涉及一個母體葯物及其代謝物，或一個葯物的對映體或異構體。在這些情況下，驗證和分析的原則適用於所有涉及的分析物。

(7)生物樣品常用什麼分析方法擴展閱讀：

在生物樣品的測定中，根據測定項目的不同，首先要經過消解 （或灰化），或提取和分離等處理工作，然後才能進行待檢組分含量的測定。處理生物樣品的方法有消解法 （又稱濕法氧化或消化法，主要有硝酸-硫酸消解法、硝酸-高氯酸消解法、硫酸-過氧化氫消解法）、灰化法 （又稱燃燒法或高溫分解法）、提取法（包括振盪提取、組織搗碎、索氏提取器提取）、分離法和濃縮法。

動物一般多用耳緣靜脈取血，先去毛，要去凈毛，不傷皮膚，用體積分數為75%的酒精擦動物耳朵，例如兔耳朵，用燈泡照射加熱使其血管充血，用大頭針刺破靜脈放血 (先從遠心端刺)，將血液放人抗凝杯中，邊收集邊搖勻，以防凝固。

『捌』 生物樣品的採集、制備和化學處理

85.3.1.1 生物樣品的採集

生物的種類繁多，成分復雜。同一種類的生物，其成分及其含量也會因品種、產地、成熟期、加工或保存條件不同而存在相當大的差異; 同一分析對象的不同部位，其成分和含量也可能有較大差異，因此樣品的採集必須從大量的、組成成分不均勻的被檢物質中採集能代表全部被檢物質的樣品。

組成不均勻的固體樣品 (肉、魚、果品、蔬菜、頭發等) ，個體大小、成熟程度、不同部位差異較大，取樣更應注意代表性，可按下述方法采樣。

肉類 根據分析目的和要求不同，有的可從不同部位采樣，混合後形成原始樣品，再分取縮減得到所需數量的代表該只動物的平均樣品。有的從一隻或很多隻動物的同一部位采樣，混合後形成原始樣品，再分取縮減得到所需數量的代表該動物某一部位情況的均勻試樣。

魚類可隨機採取多個檢樣，切碎、混勻後形成原始樣品，再分取縮減得到所需數量的平均樣品。對個體較大的魚，可從若干個體上切割少量可食部分得到檢樣，切碎、混勻後形成原始樣品，再分取縮減得到所需數量的均勻試樣。

果蔬體積較小的，可隨機採取若干個整體作為檢樣，切碎、混勻形成原始樣品，再分取縮減得到所需數量的平均樣品。體積較大的(如西瓜、蘋果、蘿卜等)，可按成熟度及個體大小的組成比例，選取若干個個體作為檢樣，對每個個體按生長軸縱剖分4份或8份，取對角線2份，切碎、混勻得到原始樣品，再分取縮減得到所需數量的平均樣品。體積蓬鬆的葉菜類(如菠菜、小白菜等)，由多個包裝分別抽取一定數量的檢樣，混合後搗碎、混勻形成原始樣品，再分取縮減得到所需數量的均勻試樣。

人發人發樣一般以2～5g為宜，要求取同一部位的頭發，男發以枕部為准，女發原則上選取短發，取得的頭發應洗凈，烘乾保存。

貽貝類用純凈的自來水沖洗泥沙，去外殼，並將貝肉搗碎混勻，分取部分作試樣。

籽粒類要在脫粒後混勻，鋪開後用方格法和四分法縮分，取得所需的試樣。

85.3.1.2 生物樣品的干基制備

各類生物樣品送達實驗室時，應及時制樣。若無法及時制樣，應將樣品保存於冰櫃中，以免腐爛變質。由於生物樣品制樣工作量大，應與送樣方協調好送樣事宜，以便送檢樣能及時處理，送檢樣要做好記錄工作。

由於生物樣品一些元素含量太低，直接用鮮樣進行測試，很多元素的報出率不足，難以達到分析要求;以鮮樣製成干基後，一方面能大幅度提高分析元素的檢出限，另一方面生物樣由於製成干基使樣品更為均勻，干基樣品分析手段更趨多樣合理，同時也便於樣品保存，使外檢成為可能。

生物樣品的種類繁多，所含的水分、脂肪、糖分、蛋白質差異較大，因此不同種類的生物樣品制備方式各異，不同種類的生物樣品的干基制備可採用如下辦法。

蔬菜類樣品先剔除已萎蔫部分後，用自來水洗去帶泥土、灰土或沾有的肥料、農葯等，多次洗滌干凈後，蒸餾水再沖洗干凈、擦乾後立即稱其鮮樣質量，切成細塊狀，用電風扇吹過夜(目的是除去表面水分)後置於60℃烘箱烘至乾燥，稱量，計算干濕比。干樣用高速破碎機製成粉樣，用紙袋外套塑料袋封裝保存。

水果類樣品剝取(或切取)有代表性的足量樣品，稱量後切成小塊，於烘箱60℃烘乾，稱干基質量，計算干濕比。由於有些果實含糖分較高，容易吸潮發黏，故試樣在烘乾後應立即制樣，用高速破碎機製成粉樣用紙袋外套塑料袋封裝，保存於乾燥器中，及時分析。若已制的樣品放置時間過長而吸潮結塊，需在樣品測試前於烘箱60℃烘乾後重新制樣。

貽貝類樣品先將樣品剔除空殼及石子泥沙等外來物後，表面清洗干凈，將清洗干凈的樣品先冷凍過夜後再取出去殼(目的是貝類產品凍死後易於剝殼)，稱量後於60℃烘乾，稱干基質量，計算干濕比。干樣經高速破碎機製成粉樣，用紙袋外套塑料袋封裝保存。

人發樣品發樣先經1%的中性無磷洗潔精浸泡12h，用自來水沖洗干凈，剪成細段，再用蒸餾水沖洗干凈，最後用去離子水清洗2次，於60℃烘乾備用。

籽粒類樣品由於樣品為固體，水分含量少、硬度較大，可先烘乾後用粉碎機或研缽磨碎並混勻。若為需脫殼的穀物，可用專用設備先脫殼，後去膜，再烘乾後於高速破碎機製成粉樣，試樣用紙袋外套塑料袋封裝保存。

魚類樣品用刀切下可食部分，稱量後剁成細塊，置於60℃烘乾，稱量，計算干濕比，於高速破碎機製成粉樣。

葉片類樣品先用水進行漂洗，再用1%的中性無磷洗潔精洗去污物後，用自來水多次洗滌，蒸餾水沖洗干凈，擦乾後稱量，於烘箱60℃烘乾，稱量，計算干濕比，干樣用高速破碎機製成粉樣，用紙袋外套塑料袋封裝保存。

根、莖、枝類樣品用自來水多次沖洗干凈後，再用蒸餾水沖洗干凈，擦乾，稱其鮮樣質量，用鍘刀切成或剪刀剪成細片，置於烘箱60℃烘乾，稱量，計算干濕比，干樣用高速破碎機製成粉樣，用紙袋外套塑料袋封裝保存。

難以採集的生物樣品(如浮游植物)由於採集的樣品量較少，可直接取鮮基於消解灌中，60℃烘至近干，再加酸消解分析。

對於難以製成干基的樣品(如含脂肪較高的樣品)呈直接將檢樣搗成勻漿，取樣後直接分析。

注:干濕比指生物樣品鮮基質量與干基質量的比值，生物試樣檢測結果採用干基結果報出時，同時報出含水率。也可換算為鮮基結果報出:鮮基結果=干基結果×干濕比。

注意事項

由於生物樣品類型各異，因此在實際干基製作中，參照以上干基製作的同時可採取靈活變通的辦法。在樣品加工中要避免所用器具帶來的污染，所用的各種器具和容器應盡量選用惰性材料，如不銹鋼、合金材料、玻璃、陶瓷、高強度塑料等。

85.3.1.3 生物試樣的化學前處理

由於近代科學技術的發展，在分析化學領域中，與人體健康密切相關的微量元素分析研究愈來愈受到人們的重視。原子吸收光譜法、電感耦合等離子體發射光譜法、等離子體質譜法、原子熒光光譜法、電化學分析法等在生物試樣分析中得到廣泛應用。

生物試樣組成復雜，有機質含量高、基體干擾較大，因而生物試樣元素分析的成敗，在一定程度上取決於試樣的消解方法。目前得到廣泛應用的消解方法主要有高溫爐干法灰化法、敞口濕法消化法、高壓封閉罐消化法和微波消解法。

各種消解方法的原理與特點分述如下。

(1)干法灰化

干法灰化是一種用高溫灼燒的方式破壞試樣中有機物的方法，因而又稱為灼燒法，試樣在灰化爐(一般溫度為550℃)中被充分氧化。除汞等易揮發元素外，大多數金屬元素和部分非金屬元素的測定都可採用這種方法對試樣進行預處理。

原理。一定量的試樣在坩堝中加熱，使其中的有機物脫水、炭化、分解、氧化之後，再置於高溫的灰化爐(一般溫度為500～550℃)中灼燒灰化，使有機成分徹底分解為二氧化碳、水和其他氣體而揮發，直至殘渣為白色或淺灰色為止，所得的殘渣即為無機成分，用酸提取的溶液即可供測定。

方法特點。方法的優點:①基本不添加或添加很少量的試劑，故空白值較低。②多數試樣經灼燒後所剩下的灰分體積很小，故可加大稱樣量，改善檢出限，提高檢出率。③有機物分解徹底。④操作簡單，灰化過程中不需要看管，可同時做其他實驗的准備工作。方法的缺點:①處理樣品所需要的時間較長。②由於敞口灰化，溫度高，容易造成某些揮發性元素的損失。③盛裝試樣的坩堝對被測組分有一定的吸留作用。由於高溫灼燒使坩堝材料結構改變成微小孔穴，使某些被測組分吸留於孔穴中很難溶出，致使測定結果和回收率偏低。

(2)常壓濕法消化

常壓濕法消化簡稱消化法，是常用的試樣無機化方法。即向樣品中加入強氧化劑(如濃硫酸、硝酸、高氯酸、高錳酸鉀等)而使其消化，被測物質呈離子狀態保存在溶液中。

原理。通過向試樣中加入氧化性強酸(如濃硝酸、濃硫酸和高氯酸)，並結合加熱消煮，有時還要加一些氧化劑(如高錳酸鉀、過氧化氫)或催化劑(硫酸銅、硫酸汞、二氧化硒、五氧化二釩等)，使試樣中的有機物質被完全分解、氧化，呈氣態逸出，而待測成分則轉化為離子狀態存在於消化液中，供測試用。在實際工作中，經常採用多種試劑結合使用。

方法特點。方法的優點:①由於使用強氧化劑，有機物分解速度快，消化所需時間短。②由於加熱溫度較干法灰化低，故可減少金屬揮發逸散的損失，同時容器的吸留也少。③被測物質以離子狀態保存在消化液中，便於分別測定其中的各種微量元素。方法的缺點:①在消化過程中，有機物快速氧化常產生大量有害氣體，因此操作需在通風櫥內進行。②消化初期，易產生大量泡沫外溢，故需操作人員時時照管。③消化過程中大量使用氧化劑等，試劑用量較大，空白值偏高。

(3)高壓罐消解法

高壓罐消解法是指試樣於密閉的高壓消解罐中，加入消解劑，在高壓狀態下，達到分解試樣的目的。

原理。試樣在高壓狀態下，進行內部加熱，通過消解劑的氧化作用，試樣的表面層不斷地攪動破裂，不斷產生新鮮表面與之反應，分子間產生高速碰撞和摩擦，促使試樣迅速分解。

方法特點。方法的優點:①試樣消化完全、試劑用量少、空白值低。②特別適合揮發性元素如Hg、Se、As的分解測定。③勞動強度低、操作簡單。目前已在生物、地質、冶金、煤炭、醫葯、食品等領域得到廣泛應用。方法的缺點:①試樣處理較其他方法危險。②對消解罐的密封性、耐壓性要求高。③消解罐的投資成本大。

(4)微波消解法

微波消解法是一種嶄新的、高效的樣品消解方法，是將樣品置於密閉消解罐中，採用微波加熱方式，達到樣品消解的目的。

原理。微波是一種頻率范圍為300～3000000GHz的電磁波，具有內加熱及吸收作用等傳統加熱不具備的獨特優點。以這樣的微波場作用於液態性分子，分子即以每秒24.5億次的速度不斷改變正負方向，分子間產生高速碰撞和摩擦，於是產生高熱;對於離解物質，在微波場的作用下，離子定向流動形成離子電流，並在流動中與周圍的分子和離子發生碰撞和摩擦，從而轉化為熱能，促使試樣迅速溶解。

方法特點。方法的優點:①試樣消化完全、節能、省時、污染少。②適合易揮發性元素的分解測定。③操作簡單，勞動強度低。方法的缺點:①試樣處理較其他方法危險。②對消解罐的密封性、耐壓性要求高。③每次處理試樣數量少，對大批量、多重復的實驗比較麻煩。④設備昂貴，分析成本高。

『玖』 敘述生物樣品中蛋白質含量測定方法有哪些

概述：目前常用的有四種古老的經典方法，即定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。另外還有一種近十年才普遍使用起來的新的測定法，即考馬斯亮藍法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法靈敏度最高，比紫外吸收法靈敏10～20倍，比Biuret法靈敏100倍以上。定氮法雖然比較復雜，但較准確，往往以定氮法測定的蛋白質作為其他方法的標准蛋白質。
注意點：值得注意的是，這後四種方法並不能在任何條件下適用於任何形式的蛋白質，因為一種蛋白質溶液用這四種方法測定，有可能得出四種不同的結果。每種測定法都不是完美無缺的，都有其優缺點。在選擇方法時應考慮：①實驗對測定所要求的靈敏度和精確度；②蛋白質的性質；③溶液中存在的干擾物質；④測定所要花費的時間。
考馬斯亮藍法（Bradford法），由於其突出的優點，正得到越來越廣泛的應用。

『拾』 體內葯物分析的樣品測定

體內樣品分析常用的方法有免疫分析法和色譜分析法 。
免疫分析法是基於抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來的一種生物化學分析法。具有很高的選擇性和很低的檢出限，可以應用於測定各種抗原、半抗原或抗體。免疫分析法分為熒光免疫法、發光免疫法、酶免疫法及電化學免疫法等非放射免疫法和放射免疫法，測定的量可以達到μg甚至ng的水平。這些分析方法多配有專用設備和試劑，操作相對簡便，適合常規實驗室使用，多應用臨床治療葯物監測。
色譜分析包括：氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）和色譜-質譜聯用（GC-MS、LC-MS）等，這些方法適用於復雜樣品中微量葯物的專屬准確定量，多用於葯代動力學研究。 由於體內樣品取樣量少、葯物濃度低、內源性物質的干擾（如無機鹽、脂質、蛋白質、代謝物）及個體差異等多種因素影響體內樣品測定，為了保證方法的可靠性，必須在建立體內樣品分析方法的同時對方法進行驗證。
（一）特異性
必須證明所測定的物質是原形葯物或特定的活性代謝物，內源性物質和相應的代謝物及同時服用的其他葯物不得干擾樣品的測定。對於色譜法至少要提供6個不同來源的空白體內樣品色譜圖、空白體內樣品外加標准物質色譜圖（註明濃度）及用葯後的體內樣品色譜圖。
（二）標准曲線與線性范圍
根據所測定物質的濃度與響應的相關性，用回歸分析方法獲得標准曲線。標准曲線的高低濃度范圍為線性范圍，在線性范圍內濃度測定結果應達到試驗要求的精密度和准確度。
必須用至少6個濃度建立標准曲線，應使用與待測樣品相同的生物介質，線性范圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許將線性范圍外推求算未知樣品的濃度。建立標准曲線時應隨行空白體內樣品，但標准曲線不包括零點。
標准曲線上各濃度點的實測值與標示值的偏差（bias）在可接受范圍內時，可判定標准曲線合格。偏差可按下式計算：
式中，回歸值系將各濃度點的響應值代人標准曲線計算所得的濃度值；標示值系指制備標准曲線時，各相應濃度點的配製濃度。
標准曲線上各濃度點偏差的可接受范圍一般規定為：最低濃度點的偏差在±20%以內，在其餘各濃度點的偏差在±15%以內。只有合格的標准曲線才能用於臨床待測樣品的濃度計算。當線性范圍較寬時，推薦採用加權最小二乘法（weighted least square method）進行同歸計算。
（三）定量下限
定量下限（LLOQ）是標准曲線上的最低濃度點，：要求至少能滿足測定3～5個半衰期時樣品中的葯物濃度，或Cmax的1/10～1/20時的葯物濃度，其准確度應在真實濃度的80%～120%范圍內。RSD應小於20%，S/N應大於5.應由至少5個標准樣品測試結果證明。
（四）精密度與准確度
要求選擇高、中、低3個濃度的質控（quality control，QC）樣品同時進行方法的精密度和准確度驗證。其中，低濃度接近定量下限（lower limit of quantitation，LLOQ），在LLOQ的3倍以內；高濃度接近標准曲線的上限（即定量上限，upper limit of quantitation，ULOQ），中間選一個濃度，每一濃度至少測定5個樣品。
精密度用QC樣品的批內（intra-batch）和批間（inter-batch）RSD表示，RSD一般應小於15%，在LLOQ附近應小於20%.
在測定批內RSD時，每一濃度至少制備並測定5個樣品。為獲得批間RSD應至少在不同天連續制備並測定3個分析批，至少45個樣品。
准確度是指用特定方法測得的體內樣品濃度與真實濃度的接近程度，一般應在85%～115%范圍內，在LLOQ附近應在80%～120%范圍內。
（五）樣品穩定性
根據具體情況，對含葯體內樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時間進行穩定性考察，以確定體內樣品的存放條件和時間。還應注意考查儲備液的穩定性以及樣品處理後的溶液中分析物的穩定性，以保證測試結果的准確性和重現性。
（六）提取回收率
應考察高、中、低3個濃度的提取回收率。其結果應一致、精密和可重現。
（七）質控樣品
質控（QC）樣品系將已知量的待測葯物加入到生物介質中配製的樣品，用於質量控制。
（八）質量控制
應在體內樣品分析方法驗證完成之後開始測試未知體內樣品，每個樣品一般測定一次，必要時進行復測。每個分析批均應建立相應的標准曲線，並隨行測定高、中、低3個濃度的QC樣品，每個濃度至少雙樣本。並應均勻分布在未知樣品測試順序中。當一個分析批中未知樣品數目較多時，應增加各濃度QC樣品數，使QC樣品數大於未知樣品總數的5%，QC樣品數的增加以組（高、中、低3個濃度）為單位。QC樣品測定結果的可接受標准為：偏差應小於15%，低濃度點偏差應小於20%，最多允許1/3不在同一濃度的QC樣品結果超限。如QC樣品測定結果不符合上述要求，則該分析批未知樣品測試結果作廢。濃度高於ULOQ的未知體內樣品，應採用相應的空白介質稀釋後重新測定。
（九）測試結果
應詳細描述所用的分析方法，引用已有的參考文獻，提供每個分析批的標准曲線、質控樣品及未知樣品的測試結果及計算過程。還應提供全部未知樣品分析的色譜圖，包括全部相關的標准曲線、質控樣品的色譜圖，以供審查。 （一）治療葯物監測的對象
對於治療安全濃度范圍窄、治療劑量與中毒劑量接近、毒副作用強、具有非線性葯代動力學特徵、長期使用葯效和毒性不明確、以及聯合用葯可能發生相互作用的葯物，通常都應當進行監測。應當進行治療葯物監測的葯物包括部分抗癲癇葯、抗心律失常葯、強心苷類葯、抗生素、抗精神病葯、抗哮喘葯、抗惡性腫瘤葯和一些解熱鎮痛葯，如表7-1所示。部分應當進行治療葯物監測的葯物的治療濃度范圍和中毒濃度，如表7-2所示。治療葯物監測示例見第十章第一節「苯巴比妥體內樣品的分析。
（二）在葯代動力學研究中的應用
地高辛在臨床上用於心衰治療，其有效濃度（0.8～2.0ng/ml）與中毒濃度（>2.4ng/ml）接近。消除半衰期長，成人的約為36小時、兒童的約為30小時，屬一級動力學。地高辛在腸部被吸收，60%～90%以原型經腎小球濾過或腎小管排泌，僅有約10%在體內通過氫化、水解、結合等反應代謝，另有約7%發生腸-肝循環。
以毛地黃毒苷為內標，對人血漿和尿液中地高辛濃度LC-MS測定如下。
（1）樣品處理方法精密吸取血漿1.0ml，置具塞離心管中，精密加入內標溶液（20ng/ml）50μl，加濃氨水100μl和甲基叔丁基醚5.0ml，振盪混勻30分鍾後，3000×g力離心10分鍾，分取有機層，置另一離心管中，在減壓離心條件下揮千，殘留物用100μl 含0.25mmol/L醋酸鈉的甲醇-水（40：60）流動相溶解，14000×g力離心2分鍾，取上清液15μl進行LC-MS分析。尿樣用空白血漿按1：10或1：50稀釋後照血漿方法處理和測定。
（2）色譜和質譜條件色譜柱C8（2.1mm×50mm，5μm）柱，流動相含0.25mmol/L醋酸鈉的甲醇（A）-水（B）梯度洗脫，流速0.25ml/min.電噴霧正離子化，噴霧電壓5000V，傳輸裂解電壓250V，乾燥氮氣溫度350℃，流速10.0L/min，噴霧口氣壓25psi.選擇性離子【M+Na】+監測（SIM），m/z分別為803.4（地高辛）和787.4（毛地黃毒苷）。
（3）測定結果血漿濃度線性范圍為0.05～1.5ng/ml，應用於人體葯代動力學研究，測得女性受試者口服0.25mg地高辛後的典型血漿濃度-時間曲線如圖7-2所示，其尿液48小時累積排泄量為30.2%。