生物實驗中怎麼染色

❶ 微生物染色的染色方法

微生物染色方法一般分為單染色法和復染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色，但不能鑒別微生物。復染色法是用兩種或兩種以上染料，有協助鑒別微生物的作用。故亦稱鑒別染色法。常用的復染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法，此外還有鑒別細胞各部分結構的（如芽胞、鞭毛、細胞核等）特殊染色法。食品微生物檢驗中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。
用一種染色劑對塗片進行染色，簡便易行，適於進行微生物的形態觀察。在一般情況下，細菌菌體多帶負電荷，易於和帶正電荷的鹼性染料結合而被染色。因此，常用鹼性染料進行單染色，如美蘭、孔雀綠、鹼性復紅、結晶紫和中性紅等。若使用酸性染料，多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。使用酸性染料時，必須降低染液的PH值，使其呈現強酸性（低於細菌菌體等電點），讓菌體帶正電荷，才易於被酸性染料染色。
單染色一般要經過塗片、固定、染色、水洗和乾燥五個步驟。
染色結果依染料不同而不同：
石碳酸復紅染色液：著色快，時間短，菌體呈紅色。
美蘭染色液：著色慢，時間長，效果清晰，菌體呈藍色。
草酸銨結晶染色液：染色迅速，著色深，菌體呈紫色。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫師Gram創立。
細菌先經鹼性染料結晶染色，而經碘液媒染後，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），後者為革蘭氏陰性菌（G—）。為觀察方便，脫色後再用一種紅色染料如鹼性蕃紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應；弧菌，螺旋體和大多數致病性的無芽胞桿菌都呈現負反應。
革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質上有很多差別，染色反應不一樣。現在一般認為革蘭氏陽性菌體內含有特殊的核蛋白質鎂鹽與多糖的復合物，它與碘和結晶紫的復合物結合很牢，不易脫色，陰性菌復合物結合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應的主要依據。
另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同PH條件下進行染色，陽性菌吸附鹼性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。例如，在強鹼的條件下進行染色，兩類菌吸附鹼性染料都多，都可呈正反應；PH很低時，則可都呈負反應。此外，兩類菌的細胞壁等對結晶紫—碘復合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間，脫色方法也應嚴格控制。

❷ 微生物染色的微生物染色的基本原理

微生物染色的基本原理，是藉助物理因素和化學因素的作用而進行的。物理因素如細胞及細胞物質對染料的毛細現象、滲透、吸附作用等。化學因素則是根據細胞物質和染料的不同性質而發生地各種化學反應。酸性物質對於鹼性染料較易吸附，且吸附作用穩固；同樣，鹼性物質對酸性染料較易於吸附。如酸性物質細胞核對於鹼性染料就有化學親和力，易於吸附。但是，要使酸性物質染上酸性材料，必須把它們的物理形式加以改變（如改變pH值），才利於吸附作用的發生。相反，鹼性物質（如細胞質）通常僅能染上酸性染料，若把它們變為適宜的物理形式，也同樣能與鹼性染料發生吸附作用。

微生物染色 - 染料的種類和選擇

染料分為天然染料和人工染料兩種。天然染料有胭脂蟲紅、地衣素、石蕊和蘇木素等，它們多從植物體中提取得到，其成分復雜，有些至今還未搞清楚。目前主要採用人工染料，也稱煤焦油染料，多從煤焦油中提取獲得，是苯的衍生物。多數染料為帶色的有機酸或鹼類，難溶於水，而易溶於有機溶劑中。為使它們易溶於水，通常製成鹽類。
微生物細胞是由蛋白質、核酸等兩性電解質以及其他化合物組成。所以，微生物細胞表現出兩性電解質的性質。兩性電解質兼有鹼性基和酸性基，在酸性溶液中離解出鹼性基呈鹼性帶正電，在鹼性溶液中離解出酸性基呈酸性帶負電。[1]染料可按其電離後染料離子所帶電荷的性質，分為酸性染料、鹼性染料、中性（復合）染料和單純染料四大類。
1、酸性染料
這類染料電離後染料離子帶負電，如伊紅、剛果紅、藻紅、苯胺黑、苦味酸和酸性復紅等，可與鹼性物質結合成鹽。當培養基因糖類分解產酸使pH值下降時，細菌所帶的正電荷增加，這時選擇酸性染料，易被染色。
2、鹼性染料
這類染料電離後染料離子帶正電，可與酸性物質結合成鹽。微生物實驗室一般常用的鹼性染料有美蘭、甲基紫、結晶紫、鹼性復紅、中性紅、孔雀綠和蕃紅等，在一般的情況下，細菌易被鹼性染料染色。
3、中性（復合）染料
酸性染料與鹼性染料的結合物叫做中性（復合）染料，如瑞脫氏（Wright）染料和基姆薩氏（Gimsa）染料等，後者常用於細胞核的染色。
4、單純染料
這類染料的化學親和力低，不能和被染的物質生成鹽，其染色能力視其是否溶於被染物而定，因為它們大多數都屬於偶氮化合物，不溶於水，但溶於脂肪溶劑中，如紫丹類（Sudanb）的染料。

❸ 生物實驗中怎樣將裝片迅速染色，我染色的時候不成功

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❹ 給細菌染色的方法都有幾種，怎麼操作，都用復紅染色嗎麻煩一一講來，詳細點，本人初學者.

細菌染色分為活菌染色跟死菌染色兩種。其中死菌染色分為正染色跟負染色。正染色又包括普通染色與特殊染色兩種。普通染色有簡單染色法、革蘭氏染色法和抗酸染色法；特殊染色分為芽孢染色法、莢膜染色法和細胞壁染色法。一般都只用革蘭氏染色法跟抗酸染色法。

革蘭氏染色法(Gram's stain)是最常用的細菌染色法。細菌經結晶紫初染染成藍色。革蘭氏染色陽性菌（G+）細胞壁肽聚糖層數多，且肽聚糖為空間網狀結構，再經乙醇脫水，網狀結構更為緻密，染料復合物不易從細胞內漏出，仍為藍色。而革蘭氏染色陰性菌（G-）細胞壁脂類含量多，肽聚糖層數少，且肽聚糖為平面片層結構，易被乙醇溶解，使細胞壁通透性增高，結合的染料復合物容易泄漏，細菌被脫色為無色，再經石炭酸復紅稀釋液復染成紅色。
①將結晶紫染液加於塗膜上，染色（初染）1min。②水洗後加蘆戈氏碘液處理(媒染)1min。③水洗後用95％酒精脫色，脫色時頻頻搖動玻片，直至流下的液體無色為止(約需0.5min)。④水洗後加石炭酸復紅稀釋液染色(復染)0.5min。⑤水洗，用濾紙輕輕吸干，待標本充分乾燥後進行鏡檢。染色過程中，水洗要用自來水的細流徐徐沖洗，沖洗塗膜的背面，勿使強水流直接沖到塗膜上。

抗酸染色法（acid-fast stain）對分枝桿菌屬等一般染色法不易著色的抗酸性細菌染色。要注意：1）塗片要略厚；2）加溫染色或延長染色時間，加溫時隨時補加染色液；3）分枝桿菌呈紅色（+），其他細菌和背景為藍色。
①石碳酸復紅加溫染色8~10分鍾。②3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鍾，脫色是輕搖玻片，直到塗片顏色脫去為止。③水洗後，用鹼性美藍復染1分鍾。④再次水洗，印干。

芽孢染色法是專門給細菌芽孢染色的。要注意：1）芽孢染色用的菌種應控制菌齡，使大部分芽孢仍保留在菌體上為宜；2）染色加熱過程要及時補充染液，切勿讓塗片乾涸。
①孔雀綠加熱染色5分鍾。②水洗。③番紅染色2~3分鍾。④水洗，乾燥。

莢膜染色法是專門給與染料親和性弱的細菌莢膜染色。由於莢膜很薄，且含水量高（90%以上），易變形，所以製片和染色時一般不用熱固定。這個包括黑素負染色法、Leifson染色法跟Tyler染色法。
黑素負染色法：
1.制菌液：在潔凈載破片一端加一滴蒸餾水，按無菌操作要求，用接種環取少量斜面試管培養物於蒸餾水中，輕輕混勻。
2.塗片（推片法）：取另一塊邊緣光滑的載玻片，使之一端與菌液接觸，然後迅速均勻地將菌液推向玻片的另一端，使菌液塗成一薄層。置空氣中自然乾燥。注意：勿熱固定。
3.復紅染色：滴加石炭酸復紅染色液覆蓋塗布面，染色4~5分鍾後，除去多餘染液（勿用水洗）。乾燥時間不要太長，防莢膜脫水。
4.黑素染色：在玻片一端加一滴1%黑素液，再取一塊邊緣光滑的裁玻片，當邊緣與黑素液接觸後，迅速均勻地推向玻片另一端，使成一薄層。置空氣中自然乾燥。
5. 鏡檢（油鏡）：菌體呈紅色，背景呈黑色，莢膜無色。
注意事項：滴黑色素要量少；取菌要適量。
Leifson染色法
1.制備塗片同前，自然乾燥。
2.滴加Leifson』s染色液覆蓋塗布面，染色10分鍾，傾去多餘染料（勿用水洗）。
3.滴加硼酸鈉美藍染色液，染色5分鍾，輕輕用水沖洗，置空氣中自然乾燥。
4.油鏡下鏡檢，菌體呈藍色，莢膜呈紅色。
Tyler染色法
1.制備塗片同前，自然乾燥。
2.滴加結晶紫冰醋酸染色液覆蓋塗布面，染色5~7分鍾。傾去多餘染料（勿用水洗）。
3.用20%CuS04水溶液輕輕沖去染料，用吸水紙印干後，置空氣中自然乾燥。
4.油鏡下檢查，菌體呈紫色，莢膜呈淺紫色或淺藍色。

細胞壁染色法是觀察細菌細胞壁時採用的染色法。細菌細胞壁很薄，它與染料結合的能力差，不易著色，在細菌的染色過程中，一般情況染料都是通過細胞壁的滲透、擴散等作用而進入細胞，細胞壁本身並未染色，因此，欲通過染色來觀察細胞壁，必須設法使細胞壁能著色，而細胞質則不易著色，常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用，它們使細胞壁形成可著色的復合物，而使細胞質不易被著色，經結晶紫或甲基綠染色後，便可在普通光學顯微鏡下觀察到細胞壁。
根據細菌細胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理後，會產生質壁分離這一現象，經染色後也可在普通光學顯微鏡下區分細胞壁和細胞質膜。
1．單寧酸法
(1)將培養16—18小時的巨大芽孢桿菌按常法製成塗片。
(2)用5％單寧酸染5分鍾後，水洗。
(3)用0．2％結晶紫染3—5分鍾，水洗，吹乾。用油鏡觀察，細胞壁呈紫色，細胞質呈淡紫色。
2．磷鉬酸法
(1)制備濃厚的塗片，在未乾時浸入1％磷鉬酸水溶液3—5分鍾。
(2)用1％甲基綠水溶液染3—5分鍾。
(3)水洗後，吹乾，用油鏡觀察。細胞壁為綠色，細胞質無色。
3．區分細胞壁與細胞質膜
(1)乙醚蒸氣法
(a)將巨大芽孢桿菌塗布於蓋玻片上，翻轉蓋玻片使其放在乙醚蒸氣瓶的瓶口上蒸3分鍾。
(b)取下蓋玻片置Bouin氏固定液中30分鍾後取出，水洗。
(c)用硫堇染色30秒鍾。
(d)水洗，水封，置油鏡下觀察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25％NaCl溶液於潔凈的載玻片上。
(b)挑一小環培養6小時的枯草芽孢桿菌，在25％NaCl水滴中塗布均勻，待自然乾燥。
(c)滴加0．01％結晶紫於其上，使蓋滿有菌部分，30秒鍾後水洗，乾燥，用油鏡觀察結果。

❺ 微生物鑒別染色方法有哪些

檢驗常用染色法包括 1）革蘭氏染色法 2）抗酸染色法 3）美蘭染色法 4）異染顆粒染色法 5）細菌鞭毛染色法 6）莢膜染色法芽孢染色法 7)布氏桿菌科茲洛夫斯基染色法 8)結核桿菌熒光染色法等主要染色法 革蘭氏染色法染液配製 1。結晶紫染液：稱取結晶紫（龍膽紫）14g，溶於95%酒精100ml中，配成飽和液，再取飽和液20ml與1%草酸銨溶液（1g草酸銨溶於100ml蒸餾水溶解即成）80ml混勻即成2。盧戈氏碘液：碘化鉀2g於10ml蒸餾水中，再加碘1g，待碘全部溶解後（時間較長）加蒸餾水200ml即成3。95%酒精4。（1）石碳酸復紅液：稱取鹼性復紅（鹼性品紅）4g溶於95%酒精100ml中成飽和液，再取飽和液10ml與5%石碳酸溶液（5ml石碳酸溶於100ml蒸餾水）90ml混勻即成，（2）稀釋石碳酸復紅液：取石碳酸復紅液10ml加入蒸餾水90ml即成染色方法：1。塗片 將菌液直接塗在載玻片上，經培養的菌落要加生理鹽水混勻塗片，等待乾燥（固定）2。將結晶紫染液滴加在已固定的塗片上，染色1分鍾後用水沖去剩餘燃料3。滴加盧戈氏碘液1分鍾後水洗，在滴加95%酒精脫色，搖動玻片至紫色不在脫色為止（約需1分鍾），水洗4。用稀釋石碳酸復紅液復染30秒至1分鍾5。水洗待干，鏡檢6。革蘭氏陽性菌染成紫色，革蘭氏陰性菌染成紅色

❻ 單染色法的基本步驟有哪些有何注意事項

一、單染色法的基本步驟：

1．塗片取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水於載玻片中央，用無菌操作，分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌於二載玻片的水滴中，調勻並塗成薄膜。注意滴生理鹽水時不宜過多，塗片必須均勻。

2．乾燥於室溫中自然乾燥。

3．固定塗片面向上，於火焰上通過2—3次，使細胞質凝固，以固定細菌的形態，並使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細菌形態將毀壞。

4．染色放標本於水平位置，滴加染色液於塗片薄膜上，染色時間長短隨不同染色液而定。呂氏鹼性美蘭染色液約染2-3分鍾，石炭酸復紅染色液約染1-2分鍾。

5．水洗染色時間到後，用自來水沖洗，直至沖下之水無色時為止。注意沖洗水流不宜過急，過大，水由玻片上端流下，避免直接沖在塗片處。沖洗後，將標本晾乾或用吹風機吹乾，待完全乾燥後才可置油鏡下觀察。

6．鏡檢按實驗程序進行顯微鏡觀察。

二、注意事項：

(1)載玻片要清潔無油污，否則菌液不易塗開。塗片時取培養物宜少，培養物塗層宜薄，塗層過厚則不易觀察細菌形態。

(2)乾燥和固定時，玻片不能直接在離火焰很近的位置上烘烤，否則會破壞細菌形態並使之變形，影響觀察結果。

(3)觀察時如需用到油鏡，油鏡檢查前玻片應完全乾燥，觀察後要將油鏡用擦鏡紙等徹底擦拭乾凈。

單染色法原理：

簡單染色法即只用一種染料對塗片進行染色，該法簡便易行，適用於菌體的一般形態觀察。通常情況下由於細菌菌體多帶負電荷，易和帶正電荷的鹼性染料結合而被染色，因此常用鹼性染料進行簡單染色，如美藍、鹼性復紅、結晶紫、孔雀綠、番紅等。

所有的苯胺染料，均可用來做簡單染色法的染色劑。在進行染色之前的製片過程是影響染色結果好壞的關鍵性步驟。

❼ 在觀察活細胞中的線粒體結構時常用什麼進行染色

（1）染色體易被龍膽紫、醋酸洋紅等鹼性染料染成深色；甲基綠能使DNA呈綠色；健那綠是專一性染線粒體的活細胞染料，能將線粒體染成藍綠色．
（2）在「檢測生物組織中的脂肪」實驗中，50%酒精的作用是去浮色．在「綠葉中色素的提取和分離」實驗中，酒精可作為有機溶劑來提取綠葉中的色素．
故答案為：
（1）龍膽紫（或醋酸洋紅也） 甲基綠 健那綠
（2）去浮色 提取綠葉中的色素

❽ 細菌中革蘭氏染色法的過程是怎樣的

微生物的染色方法很多,各種方法應用的染料也不盡相同,但是一般染色都要通過製片及一套染色操作程序.
1、製片
在干凈的載玻片上滴上一滴蒸餾水,用接種環進行無菌操作,挑取培養物少許,置載玻片的水滴中,與水混合做成懸液並塗成直徑約1厘米的薄層,為避免因菌數過多聚成集團,不利觀察個體形態,可在載玻片之一側再加一滴水,從已塗布的菌液中再取一環於此水滴中進行稀釋,塗布成薄層,若材料為液體培養物或固體培養物中洗下制備的菌液,則直接塗布於載玻片上即可.
2、自然乾燥
塗片最好在室溫下使其自然乾燥,有時為了使之幹得更快些,可將標本面向上,手持載玻片一端的兩側,小心地在酒精燈上高處微微加熱,使水分蒸發,但切勿緊靠火焰或加熱時間過長,以防標本烤枯而變形.
3、固定
標本乾燥後即進行固定,固定的目的有三個：
1）殺死微生物,固定細胞結構.
2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上,防止標本被水沖洗掉.
3）改變染料對細胞的通透性,因為死的原生質比活的原生質易於染色.
固定常常利用高溫,手執載玻片的一端（塗有標本的遠端）,標本向上,在酒精燈火焰外層盡快的來回通過3—4次,共約2—3秒鍾,並不時以載玻片背面加熱觸及皮膚,不覺過燙為宜（不超過60℃）,放置待冷後,進行染色.
以上這種固定法在微生物實驗室中雖然應用較多普遍,但是應當指出,在研究微生物細胞結構時不適用,應採用化學固定法.化學固定法最常用的固定劑有：酒精（95%）,酒精和醚各半的混合物,丙酮,1—2%的餓酸等.餓酸能很快固定細胞但不改變其結構,故較常用.應用餓酸固定細胞的技術如下：在培養皿中放一玻璃,在玻璃上放置玻璃毛細管,在毛細管中注入少量的1—2%餓酸溶液,同時在玻璃上再放置濕標本塗片的載玻片,然後把培養皿蓋上,經過1—2分鍾後把標本從培養皿中取出,並使之乾燥.
4、染色
標本固定後,滴加染色液.染色的時間各不相同,視標本與染料的性質而定,有時染色時還要加熱.染料作用標本的時間平均約1—3分鍾,而所有的染色時間內,整個塗片（或有標本的部分）應該浸在染料之中.
若作復合染色,在媒染處理時,媒染劑與染料形成不溶性化合物,可增加染料和細菌的親和力.一般固定後媒染,但也可以結合固定或染色同時進行.
5、脫色
用醇類或酸類處理染色的細胞,使之脫色.可檢查染料與細胞結合的穩定程度,鑒別不同種類的細菌.常用的脫色劑是95%酒精和3%鹽酸溶液.
6、復染
脫色後再用一種染色劑進行染色,與不被脫色部位形成鮮明的對照,便於觀察.革氏染色在酒精脫色後用番紅,石碳酸復紅最後進行染色,就是復染.
7、水洗
染色到一定的時候,用細小的水流從標本的背面把多餘的染料沖洗掉,被菌體吸附的染料則保留.
8、乾燥
著色標本洗凈後,將標本晾乾,或用吸水紙把多餘的水吸去,然後晾乾或微熱烘乾,用吸水紙時,切勿使載玻片翻轉,以免將菌體擦掉.
9、鏡檢
乾燥後的標本可用顯微鏡觀察.
綜上所述,染色的基本程序如下：
製片→固定→媒染→染色→脫色→復染→水洗→乾燥→鏡檢.

❾ 簡述革蘭氏染色的操作步驟

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：

1）塗片固定。

2）草酸銨結晶紫染1分鍾。

3）蒸餾水沖洗。

4）加碘液覆蓋塗面染約1分鍾。

5）水洗，用吸水紙吸去水分。

6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。

7）蕃紅染色液（稀）染1分鍾後，蒸餾水沖洗。乾燥，鏡檢。

(9)生物實驗中怎麼染色擴展閱讀

革蘭氏染色法的意義就在於鑒別細菌，把眾多的細菌分為兩大類，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。

在治療上，大多數革蘭氏陽性菌都對青黴素敏感（結核桿菌對青黴素不敏感）：大多數化膿性球菌都屬於革蘭氏陽性菌，它們能產生外毒素使人致病，可以選擇青黴素族，頭孢曲松鈉等。

革蘭氏陰性菌，大多數腸道菌多屬於革蘭氏陰性菌，它們產生內毒素，靠內毒素使人致病。而革蘭氏陰性菌則對青黴素不敏感，可以選擇氟喹諾酮類葯物如諾氟沙星，左氧氟沙星等，也可以選擇大環內酯類比如克拉黴素、羅紅黴素等。所以首先區分病原菌是革蘭氏陽性菌還是陰性菌，在選擇抗生素方面意義重大。

❿ 革蘭染色的實驗步驟

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：

1、塗片固定。

2、草酸銨結晶紫染1分鍾。

3、蒸餾水沖洗。

4、加碘液覆蓋塗面染約1分鍾。

5、水洗，用吸水紙吸去水分。

6、加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。

7、蕃紅染色液（稀）染1分鍾後，蒸餾水沖洗。乾燥，鏡檢。

(10)生物實驗中怎麼染色擴展閱讀：

革蘭染色反應的原理：

革蘭染色反應是細菌分類和鑒定的重要性狀。它是1884年由丹麥醫師Gram創立的。

革蘭染色法（Gram stain）不僅能觀察到細菌的形態，而且還可將所有細菌區分為兩大類：染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G+表示；染色反應呈紅色（復染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用G-表示。

細菌對革蘭氏染色的不同反應，是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。

革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由肽聚糖形成的網狀結構組成的，在染色過程中，當用乙醇處理時，由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小，通透性降低，使結晶紫-碘復合物被保留在細胞內而不易脫色，因此，呈現藍紫色。

革蘭氏陰性細菌的細胞壁中肽聚糖含量低，而脂類物質含量高，當用乙醇處理時，脂類物質溶解，細胞壁的通透性增加，使結晶紫-碘復合物易被乙醇抽出而脫色，然後又被染上了復染液（番紅）的顏色，因此呈現紅色。