配置培養基並分離微生物的步驟是什麼

『壹』 自然界分離微生物的一般操作步驟土樣的採取, 預處理, 培養, 菌落的選擇產品的鑒定

一、分離的基本方法

微生物分離的方法很多，主要有連續稀釋分離法，平板劃線分離法和單細胞分離法等方法。其中，單細胞分離法需要貴重精密儀器，中學無法開展，而連續稀釋分離法和平板劃線分離法卻簡便易行，中學完全具備開展條件。現將這兩種方法說明如下。

1.連續稀釋分離法

①取1克土樣，在火焰旁放入裝有99毫克無菌水的錐形瓶內，充分搖勻，將菌分散。

②用移液管吸取上述菌懸液1毫升，放入盛有9毫升無菌水的試管中，並進一步稀釋成1000倍，即10-3的菌懸液。按10倍稀釋法連續稀釋到10-8（每1次稀釋，都須更換移液管）。

③取3支1毫升移液管分別從10-8、10-7、10-6菌懸液中吸取1毫升菌懸液，分別注入編號10-8、10-7和10-6的培養皿內，同一稀釋液重復做3個培養皿。

④將溫度為45～50℃的營養瓊脂培養基（其成分和配製方法見本章第三節）倒入上述各培養皿內，輕輕旋轉使菌懸液充分混合均勻，凝固後，將培養皿倒扣放置在溫暖處（28℃左右），每天觀察培養基表面有無微生物菌落。

⑤經過一定時間培養後，培養基上長出菌落，根據菌落特徵，初步判斷屬於何種類型的微生物，並在顯微鏡下檢查，若菌體形態一致，則可認為是初步分離到純菌種。

⑥將分離培養所得的純菌種，從平板培養基轉移到試管斜面培養基上培養。

2.平板劃線分離法

①取1克土樣，在火焰旁加進裝有99毫升無菌水的錐形瓶中，堵塞棉塞，製成菌懸液待用。

②取一培養皿置於實驗台上，左手將培養皿打開稍許，向培養皿內注入熔化的營養固體培養基10～12毫升，輕輕轉動培養皿，使其中的培養基分布均勻，平放桌上，使其凝成平板。然後在皿底用蠟筆劃分A、B、C、D幾個區。應連續製作幾份平板培養基。

③將培養皿底部用姆指和無名指固定成傾斜狀態，在火焰旁將培養皿稍微打開。在此同時，用環狀接種針在火焰旁取少許菌懸液，迅速送入培養皿內，在平板培養基的一邊，作第1次平行劃線 6～7條，轉動培養皿約70°角，用燒過冷卻的接種針，通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，然後再用同樣方法，作第3次平行劃線。劃線時，應使平板培養基表面向下，以免空氣中雜菌落入。接種針應與平板表面成30°角左右。不要使接種針碰到培養皿邊緣，也不要將培養基劃破。

④將劃線後的培養皿倒放在28℃左右的溫暖處進行培養，待長出菌落後，鑒定微生物類群，並根據鏡檢結果，判斷是否已分離到了純菌種。如果菌種很純，則可轉移到斜面培養基上進一步培養。

連續稀釋分離法和平板劃線法，均須在無菌室或接種箱內進行。

二、各類微生物的分離

1.從土壤中分離好氣性及兼性厭氣細菌

其分離方法見本節「分離的基本方法」

2.從土壤中分離放線菌

①製作高氏一號培養基，趁熱注入培養皿中，凝成平板，待用。

②稱取土壤10克，放入裝有100毫升無菌水的錐形瓶中，並加入10%酚10滴，以抑制細菌生長。振盪10分鍾，製成10-1菌懸液。按照連續稀釋分離法，進一步製成10-3菌懸液。

③用移液管吸取0.1毫升10-3菌懸液，注入平板培養基上，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻塗抹在整個培養基上。然後將培養皿倒置於25～30℃溫箱中，培養7～10天，培養基上會出現微生物菌落。如果菌落的硬度較大，乾燥緻密，且與基質緊密結合，不易被針挑起，這就是放線菌菌落。

④挑取放線菌菌落，接種於斜面培養基上。

3.從土壤中分離黴菌

①製作豆芽汗葡萄糖培養基，並添加80%乳酸數滴，以抑制細菌生長。將培養皿中，凝成平板，待用。

②稱取10克土壤，按上述分離放線菌的方法製成10-4或10-5的菌懸液。

③取0.1毫升菌懸液注入培養皿內培養基上，用玻璃刮刀塗抹均勻。然後將培養皿倒置於25～30℃溫箱內培養3～4天。培養基上會出現微生物菌落。黴菌菌落常長成絨狀、棉絮狀或蜘蛛網狀，可根據這一特徵尋找黴菌菌落。

④挑取培養皿內的黴菌菌落接種於斜面培養基上。

4.從飲水中分離大腸桿菌

①製作伊紅美藍培養基，趁熱注入培養皿中，凝成平板，待用。

②用滅過菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1：10稀釋。

③取0.1毫升稀釋液接種於伊紅美藍培養基上。用平板劃線分離法進行分離。

④將劃線後的培養皿倒置37℃溫箱中培養18～24小時。培養基中會出現大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍黑色，發金屬光澤。

⑤將菌落接種於斜面培養基上（由營養瓊脂培養基製成）。

『貳』 配置培養基的基本步驟有哪些應注意什麼問題

培養基的配置應該注意的幾大步驟：
1、常用玻璃儀器的准備制備培養基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷後用清水沖洗干凈，晾乾後備用。
（1）平皿用紙或布包好，或裝在金屬盒內，於121℃高壓蒸汽菌3min後烘乾，備用。
（2）試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，再用布或報紙包紮好，121℃高壓蒸汽滅菌20℃後烘乾，備用。
（3）吸管及滴管先用少許棉花塞於吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽內的氣體污染），然後用紙包後或裝入金屬吸管筒內，於121℃高壓蒸汽滅菌20min後烘乾，備用。其他玻璃器皿均應按上法處理，也應裝金屬筒內160℃乾熱滅菌2h後，備用。
2、培養基的制備及儲存
（1）溶化：一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內。加入蒸餾水，隔水加熱以促其溶解，加熱時應經常攪拌，防止焦結，待其溶解後補足水分。
在使用乾燥培養基時，先將蒸餾水按定量加入容器中，然後稱取一定量培養基乾粉放入水中，靜置10—15min，攪拌，振盪，或延長時間以促進溶解，一般不要熱，必要時加熱，但時間不宜過長，溫度不宜過高，避免某些營養成分被破壞。
（2）校正酸鹼度（調節pH）：培養基必須有適當的pH。因此測定pH是培養基配製過程中的重要步驟之一，測定pH的標准溫度為25士2℃。調節pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。當調節緩沖液的pH時，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液。滅菌後的pH會比滅菌前的pH升高或降低，一般高壓滅菌前培養基的pH會比最終pH調高0.2左右，滅菌後基本合適。因此對培養基、緩沖液、試劑在滅菌前後的pH均進行測定，並記下每次pH的測定結果，有助於積累數據考察每種培養基、緩沖液、試劑對滅菌程序的耐受性，從而指導滅菌前pH的調節。乾燥培養基一般已校正過pH，用時也必須再驗證。測定時，一般用指示劑滴入培養基觀察其顏色的變化，或用pH計校正，如與所需pH不符，可用以上的酸或鹼液加以校正。調整pH後要加熱過濾，使培養基澄清。( 更多質量檢測、分析測試、化學計量、標准物質相關技術資料請參考中國標准物質 www.rmhot.com)
（3）培養基的分裝：大批量配製時使用的自動分配器須經校準和確認。每次使用前後，均要對分配器的管道系統進行沖洗，在分裝無菌培養基前，則要採用無菌硅膠管。
固體培養基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中，高壓滅菌後根據需要分裝平皿或試管。
平皿：傾注平皿，應在無菌室中放置3—4h，如用塑料平皿須在35℃培養箱 中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發。
斜面：制備低層斜面分裝於試管，約占容積1/5，滅菌後趁熱斜放在細玻璃棒和木桿上，使成斜度，分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養基，如沾有培養基應用布抹去，以避免污染。
高層斜面：制備高層斜面分裝於試管，約占試管容積的1/3，滅菌後趁熱放置成高層短斜面，待其凝固後應用。
分裝好的培養基或緩沖液等及時密封後必須在配製當天（2h內最佳）進行滅菌處理。液體、半固體培養基一般在高壓滅前分裝，約裝試管容積的1/3，在滅菌後還要加其他成分的液體、半固體培養基，滅菌後再分裝於滅菌試管或錐形瓶中。
培養基的滅菌：培養基的滅菌多採用高壓蒸汽滅菌，各種培養基的滅菌時間和壓力，按其成分不同而定。普通培養基採用121℃、103.42kPa滅菌15min，但容器和裝量較大時，應延長至20min。含糖培養基115℃、68.85kPa滅菌30min。含糖、血清、 雞蛋等培養基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，連續3d，間歇滅菌。血清或組織液，採用低熱56—58水浴1h，連續5—6d滅菌，一些遇高溫即被破壞的物質如尿素、腹水等，可用細菌過濾器，過濾除菌。高壓滅菌應嚴格按照操作規程執行，必須逐漸加熱，徹底排除滅菌器內的空氣，再逐漸升壓保持預定的壓力和時間，達到全部殺滅微生物。以上的滅菌時間和溫度要經過驗證確認，如不同類型培養基混合一起滅菌時宜採用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。
通過無菌技術為測試制備的每一批培養基其PH在放冷至室溫（25°）後，都應測定。一個扁平的pH計用於培養基表面pH值的測定，浸入式的pH計用於液體的測定。各供應商提供的培養基的pH應該在規定的±0.2的范圍內，除非通過驗證得到更寬的范圍
注意：按配方計算培養基中各種成分的用量→稱量,（一般動作要迅速一些,因為其中可能有些成分容易吸潮）→溶化（將稱好的各種成分溶解在水中,如果是固體培養基,需要使用凝固劑,如瓊脂等,熔化時,注意攪拌,防止糊底）→調pH→滅菌（高壓蒸汽滅菌）→倒平板
1）確認培養基的成分,並精確稱量；
2）加入各個成分的順序；
3）准確調pH；
4) 適當的滅菌方法；
5）無菌條件下分裝.

『叄』 微生物培養基配置的基本步驟

1，配方制定，確定配置體積，計算要配製體積下的各組分需稱量的質量。
2，稱量。
3，溶解。
4，定容，用蒸餾水補加，將配製的溶液體積達到規定體積。
5，分裝。
6，消毒。
7，使用。
注，固體培養基的情況略有不同，分裝有區別。

『肆』 如何做細菌培養基。詳細材料及步驟有那些

先將標本接種於固體培養基上，做分離培養。再進一步對所得單個菌落進行形態、生化及血清學反應鑒定。培養基常用牛肉湯、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配製成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2～3天後生長。個別細菌如結核菌要培養1個月之久。
由於細菌無處不在，因此從制備培養基時開始，整個培養過程必須按無菌操作要求進行，否則外界細菌污染標本，會導致錯誤結果；而培養的致病菌一旦污染環境，就會引起交叉感染。
以疾病診斷為目的進行的培養，要選擇合適的標本（血、尿、便、膿液、分泌物等），並應結合臨床情況解釋所得結果。

『伍』 細菌分離培養的基本要領和常用方法有哪些

一、基本要領

菌種分離主要在培養皿上進行，常用的方法是稀釋法和劃線法。

菌種分離的目的是是微生物的一個個體通過繁殖，在固體培養基上長出肉眼能見的群體，然後根據培養特徵，用接種針調取所需菌種並在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。

改變培養基條件也有助於菌種分離。沒有一種培養基或一種培養條件能夠滿足一切微生物生長的需要，在一定程度上所有的培養基都是選擇性的。

如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設計特定環境使之適合這種微生物的生長，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養出來，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只佔少數。

二、方法

1、稀釋倒平板法

首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然後分別取不同稀釋液少許，與已熔化並冷卻至50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出現菌落。

如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

2、塗布平板法

因為將微生物懸液先加到較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且採用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學研究中常用的純種分離方法是塗布平板法。

其做法是先將已熔化的培養基倒入無菌平皿，製成無菌平板，冷卻凝固後，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃塗棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經培養後挑取單個菌落。

3、平板劃線法

最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法，即用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表面得到單菌落。

有時這種單菌落並非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作「由點到線」稀釋而達到分離目的的。劃線的方法很多，常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。

4、 稀釋搖管法

用固體培養基分離嚴格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露於空氣中不立即死亡，可以採用通常的方法制備平板，然後置放在封閉的容器中培養，容器中的氧氣可採用化學、物理或生物的方法清除。

對於那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養的分離則可採用稀釋搖管培養法進行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。

先將一系列盛無菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化後冷卻並保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝後，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開。

培養後，菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取和移植，需先用一隻滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一隻毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養皿中，用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植。

(5)配置培養基並分離微生物的步驟是什麼擴展閱讀

在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用於實驗室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養基分離純化常用的方法。

一般情況下可以通過適當改善培養基的條件來培養特點菌種。

如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進行培養。有時投加相應的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數滴，可以抑制黴菌和細菌的生長，而有利於放線菌的分離。在培養基中投加一定量的青黴素或鏈黴素能抑制細菌的生長，而有利於黴菌的分離。

『陸』 培養基的配置應該注意哪幾大步驟

樓主你好：
培養基是微生物測定的基礎，培養基的質量因而成了保證微生物實驗成功的關鍵。培養基的制備、合理的貯存、培養基的質量檢驗，能確保提供持續高質量的培養基。在按照可接受的來源和標准中的配方制備培養基的過程中，重要的是選擇正確的培養基和成分。與脫水和制備好的培養基一起的還常常伴有供應商的配方和說明。
微生物實驗中培養基的配置應該注意的幾大步驟：
1、常用玻璃儀器的准備制備培養基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷後用清水沖洗干凈，晾乾後備用。
（1）平皿用紙或布包好，或裝在金屬盒內，於121℃高壓蒸汽菌3min後烘乾，備用。
（2）試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，再用布或報紙包紮好，121℃高壓蒸汽滅菌20℃後烘乾，備用。
（3）吸管及滴管先用少許棉花塞於吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽內的氣體污染），然後用紙包後或裝入金屬吸管筒內，於121℃高壓蒸汽滅菌20min後烘乾，備用。其他玻璃器皿均應按上法處理，也應裝金屬筒內160℃乾熱滅菌2h後，備用。
2、培養基的制備及儲存
（1）溶化：一般應放在玻璃器皿或搪瓷齊內。加入蒸餾水，隔水加熱以促其溶解，加熱時應經常攪拌，防止焦結，待其溶解後補足水分。
在使用乾燥培養基時，先將蒸餾水按定量加入容器中，然後稱取一定量培養基乾粉放入水中，靜置10—15min，攪拌，振盪，或延長時間以促進溶解，一般不要熱，必要時加熱，但時間不宜過長，溫度不宜過高，避免某些營養成分被破壞。
（2）校正酸鹼度（調節pH）：培養基必須有適當的pH。因此測定pH是培養基配製過程中的重要步驟之一，測定pH的標准溫度為25士2℃。調節pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。當調節緩沖液的pH時，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液。滅菌後的pH會比滅菌前的pH升高或降低，一般高壓滅菌前培養基的pH會比最終pH調高0.2左右，滅菌後基本合適。因此對培養基、緩沖液、試劑在滅菌前後的pH均進行測定，並記下每次pH的測定結果，有助於積累數據考察每種培養基、緩沖液、試劑對滅菌程序的耐受性，從而指導滅菌前pH的調節。乾燥培養基一般已校正過pH，用時也必須再驗證。測定時，一般用指示劑滴入培養基觀察其顏色的變化，或用pH計校正，如與所需pH不符，可用以上的酸或鹼液加以校正。調整pH後要加熱過濾，使培養基澄清。( 更多質量檢測、分析測試、化學計量、標准物質相關技術資料請參考中國標准物質 www.rmhot.com)
（3）培養基的分裝：大批量配製時使用的自動分配器須經校準和確認。每次使用前後，均要對分配器的管道系統進行沖洗，在分裝無菌培養基前，則要採用無菌硅膠管。
固體培養基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中，高壓滅菌後根據需要分裝平皿或試管。
平皿：傾注平皿，應在無菌室中放置3—4h，如用塑料平皿須在35℃培養箱 中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發。
斜面：制備低層斜面分裝於試管，約占容積1/5，滅菌後趁熱斜放在細玻璃棒和木桿上，使成斜度，分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養基，如沾有培養基應用布抹去，以避免污染。
高層斜面：制備高層斜面分裝於試管，約占試管容積的1/3，滅菌後趁熱放置成高層短斜面，待其凝固後應用。
分裝好的培養基或緩沖液等及時密封後必須在配製當天（2h內最佳）進行滅菌處理。液體、半固體培養基一般在高壓滅前分裝，約裝試管容積的1/3，在滅菌後還要加其他成分的液體、半固體培養基，滅菌後再分裝於滅菌試管或錐形瓶中。
培養基的滅菌：培養基的滅菌多採用高壓蒸汽滅菌，各種培養基的滅菌時間和壓力，按其成分不同而定。普通培養基採用121℃、103.42kPa滅菌15min，但容器和裝量較大時，應延長至20min。含糖培養基115℃、68.85kPa滅菌30min。含糖、血清、 雞蛋等培養基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，連續3d，間歇滅菌。血清或組織液，採用低熱56—58水浴1h，連續5—6d滅菌，一些遇高溫即被破壞的物質如尿素、腹水等，可用細菌過濾器，過濾除菌。高壓滅菌應嚴格按照操作規程執行，必須逐漸加熱，徹底排除滅菌器內的空氣，再逐漸升壓保持預定的壓力和時間，達到全部殺滅微生物。以上的滅菌時間和溫度要經過驗證確認，如不同類型培養基混合一起滅菌時宜採用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。
通過無菌技術為測試制備的每一批培養基其PH在放冷至室溫（25°）後，都應測定。一個扁平的pH計用於培養基表面pH值的測定，浸入式的pH計用於液體的測定。各供應商提供的培養基的pH應該在規定的±0.2的范圍內，除非通過驗證得到更寬的范圍

『柒』 配製培養基的步驟

1、配製溶液

向容器內加入所需水量的一部分，按照培養基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最後補足所需水分。對蛋白腖、肉膏等物質，需加熱溶解，加熱過程所蒸發的水分，應在全部原料溶解後加水補足。

配製固體培養基時，先將上述已配好的液體培養基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續加熱至完全融化。並不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。

2、調節pH值 

用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節，直到調節到配方要求的pH值為止。

3、過濾

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時，最好折疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏鬥上過濾。

4、分裝

已過濾的培養基應進行分裝。如果要製作斜面培養基，須將培養基分裝於試管中。如果要製作平板培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝於錐形瓶內。

分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養基流出，另一隻手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養基。分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。

裝入試管的培養基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般製作斜面培養基時，每隻15×150毫米的試管，約裝3～4毫升（1/4～1/3試管高度），如製作深層培養基，每隻20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每隻錐形瓶裝入的培養基，一般以其容積的一半為宜。

5、加棉塞 

分裝完畢後，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應採用普通新鮮、乾燥的棉花製作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。

製作棉塞時，要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時左手食指與姆指稍稍緊握，就會形成1個長棒形的棉塞。

棉塞作成後，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼內壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松，塞好後，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內，上端露出少許棉花便於拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，准備滅菌。

6、製作斜面培養基和平板培養基

培養基滅菌後，如製作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。

(1)製作斜面培養基。在實驗台上放1支長0.5～1米左右的木條，厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內培養基自然傾斜，凝固後即成斜面培養基。

(2)製作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗台上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養皿蓋，右手迅速將培養基倒入培養皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。

鋪放培養基後放置15分鍾左右，待培養基凝固後，再5個培養皿一疊，倒置過來，平放在恆溫箱里，24小時後檢查，如培養基未長雜菌，即可用來培養微生物。

『捌』 微生物培養基配置的基本步驟

1,配方制定,確定配置體積,計算要配製體積下的各組分需稱量的質量.
2,稱量.
3,溶解.
4,定容,用蒸餾水補加,將配製的溶液體積達到規定體積.
5,分裝.
6,消毒.
7,使用.
注,固體培養基的情況略有不同,分裝有區別.

『玖』 培養基的配製

培養基的配製：

1、稱量和熬煮

按培養基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20-30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取。

2、加熱溶解

把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g(提前搞碎)，然後放在石棉網上，小火加熱，並用玻棒不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，待瓊脂完全溶解後，再補充水分至所需量。

3、分裝

按實訓要求，將配製的培養基分裝入試管或500ml三角瓶內。分裝時可用三角漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上造成污染。

4、加棉塞

培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等)，以阻止外界微生物進入培養基內造成污染，並保證有良好的通氣性能。

5、包紮

加塞後，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩或橡皮筋紮好，用記號筆註明培養基名稱、組別、配製日期。

培養基配製注意事項：

1、培養基經滅菌後，必須放在37C溫箱培養24h，無菌生長者方可使用。

2、PDA培養基一般不需要調pH。對於要調節pH的培養基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養基偏酸或偏鹼時，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進行調節。

3、調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過鹼破壞培養基成分。

4、培養基在使用時也可以做成不含瓊脂的液體培養基，用於菌類的震盪培養。

5、培養基也可以加入氯黴素或土黴素，加入量為0.2g/L培養基，主要是為了抑制細菌的生長，減少干擾性。

(9)配置培養基並分離微生物的步驟是什麼擴展閱讀

培養基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養物質組合配製而成的營養基質。

一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環境。

培養基種類很多，根據配製原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基。

根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基；根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等。

根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基、真菌培養基等。培養基配成後一般需測試並調節pH，還須進行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。

培養基由於富含營養物質，易被污染或變質。配好後不宜久置，最好現配現用。