如何保證微生物檢查的准確性

㈠ 怎樣做好微生物檢驗質量控制

怎樣做好微生物檢驗質量控制
微生物學檢驗室內質量控制包括：①對細菌檢驗人員的要求；②操作手冊；③儀器設備的功能監測；④培養基的質量控制；⑤試劑、染色液及抗血清的質量控制；⑥標本檢驗的質量控制；⑦標准菌株的來源和保存及室內質量的全面控制七個方面。
質量控制：滿足質量要求的操作技術和活動。
質量保證：為了滿足實驗室質量要求
，制定相應的計劃，實施證明（記錄）所進行的一系列的系統活動。
外部質量控制：通過互相校準和/或檢驗對實驗室的操作和結果所進行的控制。
內部質量控制：實驗室內部採取的以對比分析、跟蹤以及相關方法，對實驗室工作的連續性控制計劃。

㈡ 食品微生物檢驗如何進行質量控制

食品微生物檢驗如何進行質量控制

在食品微生物檢驗工作中，檢驗流程包括檢驗思路的確定、標准檢驗方法的使用、培養基的配製、樣品前處理、檢驗結果的判斷、原始記錄、報告等許多環節，其中手工操作也較多，影響結果准確性的因素也較多，實驗室必須通過行之有效的質量控制措施，持續地加以監督和控制，並結合必要的室間質量控制手段，才能確保檢驗結果的准確性。下面是我為大家帶來的關於食品微生物檢驗如何進行質量控制的知識，歡迎閱讀。

主要可從下幾方面進行質量控制：

1檢驗人員方面：實驗室的檢驗水平與檢驗人員素質密切相關，業務技術水平和工作責任心是檢驗人員素質的核心所在。這就要求檢驗人員必須具備扎實的理論基礎知識和熟練的操作技能，要求檢驗人員具備高度的工作責任心和工作熱情。實驗室可通過培訓和繼續教育、實驗室間的交流，必要時進行考核等手段，來不斷提高檢驗人員的業務水平，在實驗室質量體系文件中強調檢驗人員工作責任心的`重要性，通過制定的獎懲制度來規范檢驗人員的工作行為。

2儀器設備方面：實驗室所有儀器均應在檢定有效期內使用，必要時還要進行期間核查。在此基礎上可通過一些監控手段來確保儀器設備保持最佳性能，如高壓蒸汽滅菌器，可用生物指示劑嗜熱脂肪桿菌ATCC7953(2)或化學指示劑如變色膠帶監視滅菌效果;需要控制溫度的儀器，應在工作前和工作後做好溫度的記錄，不符合應及時調整;生物安全櫃要定期由專業人員更換濾網，對紫外線消毒設備必須三個月檢查一次其消毒性能等等。

3檢驗耗材方面：如培養基：目前大多數實驗室都是使用市售乾粉培養基，這些來自著名公司的培養基，質量比較穩定，但在購買和使用前首先要對外觀色澤和均一性、pH值、水分含量、批次或批號、瓊脂凝膠的硬度、選擇性等進行初次評估。用質控菌株進行預測，確保培養基、試劑達到預期效果。

在使用市售培養基時應注意以下幾方面：

(1)選用國內外知名品牌和信譽度好的產品;

(2)要根據培養基儲存條件儲存，盡量少包裝;

(3)要根據日常工作需要作為計劃，控制在有效期內用完;

(4)購回試劑應對品名、生產日期、保質期做好記錄，檢查密封性、標簽牢固性;(5)在配置時應仔細檢查原料，如發現結塊、變色嚴禁使用;

(6)所有培養基要有配製稱量時要有記錄，把剩餘培養基密閉好;

(7)嚴禁使用過期的、污染的、失了水的培養基。

標准菌株：必須做好明確的作業指導書，實施標准菌株的規范管理，做好菌株的傳代驗證，這樣才能確保標准菌株在實驗中應起的作用等等。

4樣品採集方面：因樣品採集並非實驗人員進行，樣本採集是否合格規范要求，是實驗成敗的又一關鍵因素。因此，從事食品微生物檢驗的工作人員，要注意加強與采樣人員的溝通，向樣品採集者講解採集樣本的方法、要求，指導他們規范採集樣本，如無菌要求、隨機方法、種類、數量、採集部分、冷藏或保溫、運送方式、安全要求等。實驗室收到樣本後，應仔細核對檢驗內容與送檢單，對不符合檢驗要求的樣本，註明原因退回。

最後，要求每個食品微生物檢驗工作者都應提高對微生物檢驗質量控制工作的認識，在日常工作中要特別重視實驗室質量控制工作，以確保檢驗結果的准確性和權威性。要求檢驗人員應加強對《質量手冊》和《程序文件》學習，發現問題，及時記錄，作為管理體系文件的修訂、補充、完善的依據。要求檢驗人員對實驗的整個過程應在工作當時予以記錄，不允許事後補記或追記。同時，管理者應防止片面重視專業理論知識和操作技能培訓，輕視思想道德教育和法制觀念教育，要努力打造一支思想過硬、品德高尚、專業扎實、技術精湛的食品微生物檢驗隊伍。

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㈢ 微生物檢測手段及注意事項

1. 微生物計量法

1.1 體積測量法

又稱測菌絲濃度法，通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養液(如10 mL)放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間(如5 min)和轉速(如5000 rpm)，離心後，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物，結果會有一定偏差。

1.2稱 乾重法

可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10~20%。在離心法中，將一定體積待測培養液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，並用清水離心洗滌1~5次，進行乾燥。乾燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘乾，或採用紅外線烘乾，也可在80 ℃或40 ℃下真空乾燥，乾燥後稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾後用少量水洗滌，在40 ℃下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常採用這種方法，如活性乾酵母(Activity Dry Yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。

1.3 比濁法

微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時，可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600 nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.coli的生長及誘導時間。

1.4 菌絲長度測量法

對於絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養基，卧放，在開口的一端接種微生物，一段時間後記錄其菌絲生長長度，藉此衡量絲狀微生物的生長。

2. 微生物計數法

2.1 血球計數板法

血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平台，兩嵴的表比兩平台的表面高0.1 mm，每個平台上刻有不同規格的格網，中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統計一定大格內微生物的數量，即可算出1 mL菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。

2.2 染色計數法

為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色後在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。

2.3 比例計數法

將已知顆粒(如黴菌孢子或紅細胞)濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。

2.4 液體稀釋法

對未知菌樣做連續十倍系列稀釋，根據估計數，從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5 mL試樣，接種1 mL到3組共15隻裝培養液的試管中，經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然後查最大或然數表MPN(Most Probable Number)得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。

2.5 平板菌落計數法

這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9 cm的平板上出現50~500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的'細菌進行了一次分離培養，獲得了單克隆。

2.6 試劑紙

在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC，無色)待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。

2.7 膜過濾法

用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。

3. 間接測定法

微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化，例如酸鹼度，發酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。因此可利用生理指標等間接參數來測定生物量。

3.1 測定含氮量

大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%，酵母為7.5%，黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱後產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。

3.2 測定含碳量

將少量(乾重0.2~2.0 mg)生物材料混入1 mL水或無機緩沖液中，用2 mL 2%的K2Cr2O7溶液在100 ℃下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5 mL，在580 nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標准樣品做標准曲線。

3.3還原糖測定法

還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是，離心發酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鍾，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。

3.4 氨基氮的測定

離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02 mol/L的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02 mol/L的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。

3.5 其他生理物質的測定

P，DNA，RNA，ATP，NAM(乙醯胞壁酸)等含量以及產酸，產氣，產CO2(用標記葡萄糖做基質)，耗氧，黏度，產熱等指標，都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，最終產氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如在BMP-2的發酵生產上，隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化，判斷細菌的長勢。

4. 商業化快速微生物檢測法

微生物的檢測，其發展方向是快速，准確，簡便，自動化，當前很多生物製品公司利用傳統微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀器設備，正逐步廣泛應用於醫學微生物檢測和科學研究領域。例如：

4.1 試劑盒，培養基等手段

抗干擾培養基和微生物數量快速檢測技術結合解決了傳統微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統奠定了堅實的基礎。如：抗干擾微生物培養基，新型生化鑒定管，微生物計數卡，環境質量檢測試劑盒等，可方便的用於多項檢測。

4.2 藉助新型先進儀器

BACTOMETER全自動各類總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時內獲得監測結果，樣本顏色及光學特徵都不影響讀數，對酵母和黴菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法(Impedance Technology)將待測樣本與培養基置於反應試劑盒內，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長而產生阻抗改變。如微生物生長時可將培養基中的大分子營養物經代謝轉變為活躍小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從而比傳統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數，酵母菌，大腸桿菌群，黴菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。

微生物OD值是反映菌體生長狀態的一個指標，OD是Optical Density(光密度)的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度。通常400～700 nm 都是微生物測定的范圍，需要紫外分光光度計測最大吸收波長。用得最多的是：505 nm測菌絲菌體、560 nm測酵母、600 nm測細菌。用測OD方法畫微生物生長曲線時，同一株菌的起始培養濃度可以准備多管(根據檢測點的需要，如需檢測10個點，就准備10管)，然後每個點取一管出來測OD值就行了。

一般測菌體密度的OD的波長范圍是580 nm-660 nm，如枯草芽孢桿菌用600 nm，已經屬於可見光區(200 nm～400 nm為紫外光區，400 nm～800 nm為可見光區)。空白如用水做，需要離心洗滌菌體;空白如用不接種的培養基做就不需要洗滌，但是不接種的培養基要和接種的同時培養以求條件一致，最後注意一般OD值在控制在0.1~0.4最好，在這個區內的值就可靠，如果OD大於1.0，一般要稀釋後再測，因為OD太大，分光光度計的靈敏度就會顯著降低。

一般都測吸光值，而且最好是整個實驗過程中，保持發酵液或菌體的稀釋倍數一致，吸光值與稀釋倍數不一定成正比，可保證整個實驗點有可比性。且取值的時候要連續讀數，重復3次的數最好。

另，用分光光度計測微生物的OD值為什麼要把波長設為600 nm

這個波長其實只是針對濁度，而分光光度計在600 nm處對濁度的反應比較靈敏。測吸收峰的實際意義並不大，比如LB搖瓶培養過夜的大腸桿菌，其實在400多納米處的吸收最大，但那很可能是培養液的吸收峰。

㈣ 微生物日常檢驗過程中的注意事項

微生物日常檢驗過程中的注意事項

在微生物檢驗操作過程中，要保證檢測環境(如超凈台、檢測室)以及所用工器具的潔凈程度，同時保證人員各種操作的規范性，盡量保證其無菌性，防止因人為原因操作失誤而出現誤差結果，同時在適宜溫度進行培養，為合理決策和指導生產提供依據。下面是我為大家帶來的關於微生物日常檢驗過程中的注意事項的知識，歡迎閱讀。

培養基的滅菌及使用

1.每次配製時，要注意其生產日期是否在保質期內，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質，並且未吸潮。

2.培養基配製時，稱量要准確，包括鹽水的分裝要准確。

3.一定要保證現配製現滅菌，未滅菌的配好培養基不能長時間放置，更不可隔夜。

4.滅菌時要保證恆溫、恆壓，同時要保證有效的滅菌時間。

5.滅菌過的培養基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配製的要先使用。

6.在使用時，要根據當班次的使用量，用水浴鍋先將培養基溶化為液態，然後及時調低水浴溫度(先化好的可從水浴取出，放在水浴鍋鍋蓋上)待用，千萬不可長時間使培養基處於高溫狀態。

7.做產品微生物檢測時，傾倒培養基溫度在 45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死;也不可過涼，化好的培養基又結塊凝固，不便於觀察結果。

8.每瓶培養基均要做空白。

9.盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養基瓶塞，增大培養基的污染幾率，出現誤差結果。

10.培養基剩餘過少時，可先將其傾倒成空白用板。

檢測環境的維持

一、大環境(檢測室)

1.檢測時，窗戶和空調要關閉，或用酒精對房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響超凈台內部環境(最好在有通排風系統的恆溫恆濕無菌間進行操作)。

2.如果在原來的原料微生物檢測室進行檢測，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺菌。

二、小環境(超凈工作台)

1.定期清潔初效過濾器，要及時更換。

2.檢測前，將超凈台內部進行清潔，用 75%酒精進行擦拭消毒，並提前半小時將超凈台紫外燈打開，對超凈台內部環境進行殺菌。

3.關紫外燈，開風機，調整合適進風量，風量不可過低。

4.每次檢測後，要對超凈台內部進行清理、清潔，並用 75%酒精進行擦拭消毒。

5.紫外燈根據其使用壽命要及時更換。

6.檢測同時，要做上相應菌落檢測的`環境空白。

7.檢測區域的選擇：

a、一般在距離超凈台外沿的 1/3-2/3 區域進行無菌操作;

b、要在酒精燈火焰的外焰保護區域進行操作。

工器具的潔凈度

1.玻璃器皿：採用乾熱滅菌方式進行滅菌。

2.檢測用剪刀、勺子等物品要做到檢測專用，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再採用灼燒方式進行滅菌。

3.接種針(環)採用灼燒方式進行滅菌，但要注意檢測時要先將接種針(環)進行冷卻。

樣品的採集及檢測

一、保證采樣器具的無菌性

1.玻璃器皿：採用乾熱滅菌方式進行滅菌，保證恆溫、時間足夠(但不可時間過長，容易導致玻璃器皿易裂紋而報廢)。

2.取樣筐：使用前要用75%酒精進行噴灑消毒。

3.取樣勺：要保證其清潔消毒，清潔後用75%酒精進行擦拭消毒。

4.取樣袋：可先用酒精進行擦拭消毒，再在超凈台用紫外燈照射消毒，(包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒)。

5.電子稱表面用 75%酒精消毒。

二、人員操作

1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及檢測前都要先洗手再消毒。

2.取樣要具有代表性(隨機樣、目的樣、綜合樣)且要標示清楚。

3.取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈台，對其外表面進行紫外燈照射消毒。

4.在要求的檢測區域進行操作。

5.檢測前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。

6.往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7.樣品計量要准確，稀釋倍數也要准確(1mL 吸管不允許將管口敲掉)，進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品從管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。

8.鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，會將部分微生物燙死;也不能溫度太低，不能將樣品溶解完全。

9.進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。

10.傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿;傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中易幹掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

11.做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈台對外表面進行紫外線滅菌。

12.接二步時，要注意先將接種針(環)進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況，導致無法判斷、確認。

13.檢測完畢，及時放入相應培養箱進行培養，並清理清潔超凈台。

微生物的培養

1.在培養過程中，要隨時監控培養箱溫度，保證其在適宜的溫度進行培養。

2.要按照《微生物檢驗規范》要求及時觀察結果，出現異常，要及時分析原因進行反饋。

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㈤ 如何進行微生物檢驗分析中的質量控制

如何進行微生物檢驗分析中的質量控制

質量控制對檢驗結果的保證非常重要，而質量控制也貫穿檢驗工作的整個過程。中國合格評定國家認可委員會(CNAS)於2012年9月13日發布的CNAS-CL42在2014年4月21日進行了第1次修訂，並於2014年11月1日實施。其中明確了微生物檢驗在分析過程中質量控制需要滿足如下要求。下面是我為大家帶來的如何進行微生物檢驗分析中的質量控制的知識，歡迎閱讀。

一、診斷性抗血清試劑，實驗當日至少應做多價血清陰性和陽性質控：

定性試驗試劑每次檢測時應至少包括陽性和陰性質控菌株。不含內質控的直接抗原檢測試劑，實驗當日應檢測陽性和陰性質控。使用的染色劑(革蘭染色、特殊染色和熒光染色)，至少每周(若檢測頻率小於每周1此，則實驗當日)用已知陽性和陰性(適用時)的質控菌株檢測。凝固酶、過氧化氫酶、氧化酶、β-內醯胺酶，實驗當日應做陰性和陽性質控，商業頭孢菌素試劑的β-內醯胺酶試驗可遵循製造商的建議。

二、實驗室採用的抗菌葯物敏感性試驗方法的質控：

應以質控標准菌株連續檢測20—30天，每一組葯物/細菌超出參考范圍(抑菌圈直徑或MIC)的頻率應不超過(≤)1/20或1/30;也可採用替代質控方案，即連續5天，每天對每一組葯物/細菌重復測定3次，每次單獨制備接種物，15個數據超出參考范圍(抑菌圈直徑或MIC)的結果應不超過(≤)1個，若失控結果為2-3個，則如前述，再進行5天，每天3次重復試驗，30個數據失控結果應不超過(≤)3個。此後，應每周使用標准菌株進行質控。若檢測頻率小於每周1次，則每個檢測日應進行質控。採用自動或者半自動儀器檢測MIC值時，應按照製造商的要求進行質控。

三、厭氧菌培養：

還需要使用有效的方法檢測厭氧培養環境(如以亞甲蘭試條、厭氧菌或其它適當方法)。分枝桿菌檢測：抗酸染色應在實驗當日用適當的`陰性和陽性質控驗證;熒光染色應每次實驗以陰性和陽性質控驗證。真菌檢測：直接染色(如：抗酸染色，PAS，吉姆薩染色，墨汁染色)檢查患者樣品時，應在實驗當日做陰性和陽性質控(某些染色如吉姆薩染色，玻片本身作為陰性質控。KOH制備的玻片不需要質控)。病毒：連續細胞傳代時應定期監測支原體污染(宜監測陰性未傳代的質控株，而不是培養支原體);應監測用於細胞生長培養液的動物血清的細胞毒性;應具備相應的細胞株用於病毒培養。

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㈥ 怎樣做好微生物檢驗的工作

怎樣做好微生物檢驗質量控制
微生物學檢驗室內質量控制包括：①對細菌檢驗人員的要求；②操作手冊；③儀器設備的功能監測；④培養基的質量控制；⑤試劑、染色液及抗血清的質量控制；⑥標本檢驗的質量控制；⑦標准菌株的來源和保存及室內質量的全面控制七個方面。
質量控制：滿足質量要求的操作技術和活動。
質量保證：為了滿足實驗室質量要求
，制定相應的計劃，實施證明（記錄）所進行的一系列的系統活動。
外部質量控制：通過互相校準和/或檢驗對實驗室的操作和結果所進行的控制。
內部質量控制：實驗室內部採取的以對比分析、跟蹤以及相關方法，對實驗室工作的連續性控制計劃。

㈦ 微生物檢驗時的注意事項

微生物檢驗時的注意事項

微生物(microorganism)，包括細菌、病毒、真菌以及一些小型的原生動物等在內的一大類生物群體，個體微小，與人類生活密切相關。廣泛涉及健康、醫葯、工農業、環保等諸多領域。在中國大陸地區的教科書中，均將微生物劃分為以下8大類：細菌、病毒、真菌、放線菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體。下面是我為大家帶來的微生物檢驗的注意事項的知識，歡迎閱讀。

一、培養基的滅菌及使用

(1)每次配置時，要注意其生產日期是否在保質期內，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質，並且未吸潮。

(2)培養基配置時，稱量要准確，包括鹽水的分裝要准確。

(3)一定要保證現配製現滅菌，未滅菌的配好培養基不能長時間放置，更不可隔夜。

(4)滅菌時要保證恆溫、恆壓，同時要保證有效滅菌時間。

(5)滅菌過的培養基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配製的要先使用。

(6)在使用時，要根據當班次的.使用量，用水浴鍋先將培養基溶化為液態，然後及時調低水域溫度(先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上)待用，千萬不可長時間使培養基處於高溫狀態。

(7)做產品微生物檢測時，傾倒培養基溫度在 45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死;也不可過涼，化好的培養基又結塊凝固，不便於觀察結果。

(8)每瓶培養基均要做空白。

(9)盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養基瓶塞，增大培養基的污染幾率，出現誤差結果。

(10)培養基剩餘過少時，可先將其傾倒成空白用板。

二、 做樣環境的維持

(1)大環境(房間)

1)做樣時，窗戶和空調要關閉，或用酒精對房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響超凈台內部環境(最好在有通排風系統的恆溫恆濕無菌間進行操作)。

2)如果在原來的原料微生物檢測室進行做樣，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺菌。

(2)小環境(超凈台)

1)定期清潔初效過濾器，要及時更換。

2)做樣前，將超凈台內部進行清潔，用 75%酒精進行擦拭消毒，並提前半小時將超凈台紫外燈打開，對超凈台內部環境進行殺菌。

3)關紫外燈，開風機，調整合適進風量，風量不可過低。

4)每次做樣後，要對超凈台內部進行清理、清潔，並用 75%酒精進行擦拭消毒。

5)紫外燈根據其使用壽命要及時更換。

6)做樣同時，要做上相應菌落檢測的環境空白。

7)做樣區域的選擇：

a、一般在距離超凈台外沿的 1/3-2/3 區域進行無菌操作;

b、要在酒精燈火焰的外焰保護區域進行操作。

三、 工器具的潔凈度

(1)玻璃器皿：採用乾熱滅菌方式進行滅菌。

(2)做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣專用，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再採用灼燒方式進行滅菌。

(3)接種針(環)採用灼燒方式進行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針(環)進行冷卻。

四、樣品的採集及檢測

(1)保證采樣器具的無菌性

1)玻璃器皿：採用乾熱滅菌方式進行滅菌，保證恆溫、時間足夠(但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢)。

2)取樣筐：使用前要用 75%酒精進行噴灑消毒

3)取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔後用 75%酒精進行擦拭消毒。

4)取樣袋：可現用酒精進行擦拭消毒，再在超凈台用紫外燈照射消毒，(包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒)。

5)電子稱表面用 75%酒精消毒。

(2)人員操作

1)保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。

2)取樣要具有代表性(隨機樣、目的樣、綜合樣)且要標示清楚。

3)取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈台，對其外表面進行紫外燈照射消毒。

4)在要求的做樣區域進行操作。

5)做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。

6)往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7)樣品計量要准確，稀釋倍數也要准確(1mL 吸管不允許將管口敲掉)，進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。

8)鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，將部分微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解完全。

9)進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。

10)傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿;傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中幹掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

11)做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈台對外表面進行紫外線滅菌。

12)接二步時，要注意先將接種針(環)進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況發生，導致無法判斷、確認。

13)做樣完畢，及時放入相應培養箱進行培養，並清理清潔超凈台。

五、 微生物的培養

(1)在培養過程中，要隨時監控培養箱溫度，保證其在適宜的溫度進行培養。

(2)要按照《微生物檢驗規范》要求及時觀察結果，出現異常，要及時分析原因進行反饋。

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㈧ 如何提高臨床微生物檢驗標本的采樣正確率

一、 血液標本的採集
1、 皮膚消毒程序： a.75%酒精清潔局部皮膚30s以上。b.待皮膚干後，再用1%-2.%碘酊作用30s或10%碘伏作用90s以上，從穿刺點中心部位向外畫圈消毒，范圍不應小於3cm（直徑），且不能用手指觸摸消毒後的皮膚。c.皮膚碘酒干後（約1min），穿刺採集血液，采血量成人10-20ml，嬰幼兒1-2ml。兒童3-5ml。d.培養瓶消毒程序：70%酒精擦拭血培養橡皮塞，作用60s；用無菌棉簽清除橡皮塞表面殘余酒精。用注射器無菌采血後立即在床旁接種培養瓶，並迅速輕搖，充分混勻防止凝固，但又不可劇震以防溶血。立即送檢，切勿冷藏。一般情況下可把血培養瓶放20-22℃。不放冰箱。
2、注意事項：a.懷疑菌血症應盡早采血，體溫上升（38.5℃）采血可提高陽性率，但也要防止因等待而延誤時機。b.對已經使用抗菌葯物，而又不能停葯者，也應在下次用葯前采血。切忌不要在靜滴抗菌葯物的靜脈處採取血標本，也不能從靜脈導管及動脈插管中取血。c.培養基與血液之比以10:1為宜，以稀釋血液中的抗生素，抗體等殺菌物質；有人主張對接受抗菌葯物治療的病人，培養基與采血量之比可為20:1或大於這個比例。d.近年研究表明，將血液注入血培養基前，更換針頭反而易導致污染。e.每例至少採血兩次，間隔0.5-1h，以利於提高陽性率和區分感染菌與污染菌。f.疑為細菌性心內膜炎及布魯氏病的病人，以肘動脈或股動脈采血為宜，除在發熱期采血外，並要多次采血（24h3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。g采血後立即送檢，如不能立即送檢可置室溫，而不能放置冰箱。h如臨床表現很似敗血症，而血培養多次陰性者，提示考慮厭氧菌和真菌感染的可能。
二、骨髓的採集
1、採集方法：在病灶部位或髂前（後）上脊處嚴格消毒後抽取骨髓1ml，注入血培養瓶內。
2、注意事項：a.骨髓內含有大量的單核巨噬細胞系統的細胞，因而骨髓培養對傷寒病人的診斷較血培養優越。b.用於懷疑細菌性骨髓炎病人。
三、靜脈導管標本的採集
1、採集方法：a.常規導管部位皮膚消毒。b.無菌方法從病人體內拔出靜脈導管，剪下導管尖端5cm，放入無菌瓶中。立即（15min內）送檢，避免標本乾燥。4℃保存不超過2小時。
2、注意事項：a.剪下的導管立即接種血平皿，在血瓊脂平板上交叉滾動4次。然後棄之。可提高陽性率。b.肉湯反復沖洗導管腔內，沖洗液做定量培養。
四、呼吸道痰標本
1、採集方法：a.清晨起床後用涼開水漱口多次，以除去口腔內大量雜菌，用力咳出肺深部的膿痰，置於清潔乾燥容器中送檢。b.痰量極少者可用45℃3%-5%的氯化鈉溶液約5ml霧化吸入min,進行導痰。對於咯痰量少的幼兒，可輕輕壓迫胸骨上部的氣管，當其咯痰後用無菌棉棒採集標本。c.咳嗽無力或昏迷病人，可用吸痰管經鼻腔或口腔經氣管腔內吸引痰液送檢。d.氣管切開者可以深入透氣孔中取痰。e.可用支氣管鏡直接在病灶部位採集高濃度的病原菌。f.用無菌導管經鼻腔插入氣管鏡內，緩慢注入無菌蒸餾水5ml，取出導管。留取患者在3h內咳出的痰液，放入無菌容器中送檢。
2、注意事項：a.痰標本的採集以晨痰為准，此時患者痰量較多且含菌量也多。b.標本採集後立即送檢，若不能及時送檢者，可暫存4℃冰箱。若晚1-2h接種，會失去苛氧菌，並使得革蘭陰性菌過分生長。c.可接受的標本：痰；支氣管灌洗液，支氣管刷，支氣管活檢；肺吸出物和肺活檢。不能接受的標本：唾液；24h留的痰（結核桿菌培養除外）；拭子。d.痰標本的質量評價：（用顯微鏡篩選）在低倍鏡下，檢查鱗狀上皮細胞，至少10個視野，集中在有白細胞處，合格標本為白細胞與鱗狀上皮細胞比例大於2:1。
五、鼻咽喉拭子標本
A.用濕的拭子（生理鹽水）；需插兩個鼻孔；深入3.3cm左右，轉動4-5次；以上用於診斷金黃色葡萄球菌暴發時的鼻帶菌者。
B.咽拭子、口腔拭子（1）採集方法（到細菌室取專用拭子）a.患者清水漱口後，由檢查者將其舌外拉，用棉拭子將咽後壁或懸雍垂的後側反復擦拭數次；b.化膿性扁桃體炎、口腔念珠菌病時，直接用棉拭子在病灶部位擦拭；c插入運送培養基中立即送檢，防止乾燥。
(2)注意事項a.棉拭子應避免觸及舌、口腔黏膜和唾液;b.採集標本前數小時不可用消毒葯物漱口或接觸病灶局部。
六、胃腸道
1、糞便a.採集方法選取膿血、黏液糞便2-3g，液體糞便取絮狀物1-2ml。盛於滅菌瓶中或蠟紙盒中及時送檢。b.注意事項①標本要採集新鮮的，陳舊標本影響陽性檢出率；②切忌糞尿混合；③若要分離阿米巴，標本要立即送檢並注意保溫；④運送培養基可提高陽性率；⑤分離難辨梭菌時需選不成形或水樣便；⑥霍亂弧菌、大腸桿菌Ο157感染的腹瀉便則為水樣便或血性便；⑦標本在病理早期或治療前採集；⑧一般認為用抗菌葯三天後，標本培養病原菌陰性。
2、肛拭子在無法獲得糞便的情況下，可用經無菌甘油水或無菌生理鹽水濕潤的肛拭子插入肛門4-5cm（幼兒2-3cm）處，輕輕旋轉擦取直腸表面黏液後取出，置運送培養基中送檢。

㈨ 微生物檢測應注意什麼事項

1、工作室要矮小平整、光滑、無凹凸不平或稜角、四壁及屋頂用不透水之材質，便於擦洗及殺菌。

2、室內採光面積應大，從室外應能看到室內的情況。

3、為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設緩沖走廊，走廊旁再設緩沖間，其面積可小於無菌室。

4、無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設有日光燈及紫外燈，殺菌紫外燈離工作台以一米為宜，其電源開關應設在室外。

5、無菌室與緩沖間進出口應設推拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門要錯開，以免空氣對流造成污染。

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㈩ 用稀釋法進行微生物計數時,怎樣保證准確並防止污染答案

首先稀釋過程中，每一次稀釋10倍後，要充分震盪，搖勻，吸取過程中一定要吸取中部偏底部的菌液。在稀釋過程中，做好實驗室的滅菌工作，以及操作者進入無菌室前洗手消毒，穿無菌服的基本工作，另外要有較強的無菌意識。