如何測微生物生長曲線

⑴ 生長曲線怎麼測定

一：細菌生長曲線的測定

1 目的
1.1 了解細菌生長曲線特點及測定原理
1.2 學慣用比濁法測定細菌的生長曲線
2 原理
將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養基中，在適宜的條件下進行培養，定時測定培養液中的菌量，以菌量的對數作縱坐標，生長時間作橫坐標，繪制的曲線叫生長曲線。它反映了單細胞微生物在一定環境條件下於液體培養時所表現出的群體生長規律。依據其生長速率的不同，一般可把生長曲線分為延緩期、對數期、穩定期和衰亡期。這四個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線，可了解各菌的生長規律，對於科研和生產都具有重要的指導意義。
測定微生物的數量有多種不同的方法，可根據要求和材料
3.1菌種
大腸桿菌
3.2培養基
肉膏蛋白腖培養基
3.3 儀器和器具
721分光光度計，比色杯，恆溫搖床，無菌吸管，試管，三角瓶。
4 流程
種子液→標記→接種→培養→測定
5 方法
5.1種子液制備
取大腸桿菌斜面菌種1支，以無菌操作挑取1環菌苔，接入肉膏蛋白腖培養液中，靜止培養18h作種子培養液。
5.2標記編號
取盛有50mL無菌肉膏蛋白腖培養液的250mL三角瓶11個，分別編號為0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
5.3接種培養
用2mL無菌吸管分別准確吸取2mL種子液加入已編號的11個三角瓶中，於37℃下振盪培養。然後分別按對應時間將三角瓶取出，立即放冰箱中貯存，待培養結束時一同測定OD值。
5.4生長量測定
將未接種的肉膏蛋白腖培養基傾倒入比色杯中，選用600nm波長分光光度計上調節零點，作為空白對照，並對不同時間培養液從0h起依次進行測定，對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白腖液體培養基適當稀釋後測定，使其OD值在0.10.～0.65以內，經稀釋後測得的OD值要乘以稀釋倍數，才是培養液實際的OD值。
6 結果
6.1 將測定的OD值填入下表：
時 間(h) 對照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
光密度值（OD600）
6.2 以上述表格中的時間為橫坐標，OD600 值為縱坐標，繪制大腸桿菌的生長曲線。

⑵ 微生物生長曲線的檢測方法

生長量測定法
體積測量法：又稱測菌絲濃度法。
通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養液（如10毫升）放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間（如5分鍾）和轉速（如5000 rpm），離心後，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物，結果會有一定偏差。
稱乾重法：
可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10-20%。在離心法中，將一定體積待測培養液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，並用清水離心洗滌1-5次，進行乾燥。乾燥可用烘箱在105 ℃或100℃下烘乾，或採用紅外線烘乾，也可在80℃或40℃下真空乾燥，乾燥後稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾後用少量水洗滌，在40C下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常採用這種方法，如活性乾酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
比濁法：
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時，可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600nm 處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.Coli的生長及誘導時間。
菌絲長度測量法：
對於絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養基，卧放，在開口的一端接種微生物，一段時間後記錄其菌絲生長長度，藉此衡量絲狀微生物的生長。
微生物計數法
血球計數板法:
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平台，兩嵴的表比兩平台的表面高0.1 mm，每個平台上刻有不同規格的格網，中央0.1 mm面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統計一定大格內微生物的數量，即可算出1毫升菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。
染色計數法：
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色後在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。
比例計數法：
將已知顆粒（如黴菌孢子或紅細胞）濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。
液體稀釋法：
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋，根據估計數，從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15隻裝培養液的試管中，經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然後查最大或然數表MPN（most probably number）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。
平板菌落計數法：
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9cm的平板上出現50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養，獲得了單克隆。
試劑紙法：
在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。
膜過濾法：
用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。
生理指標法：
微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化，例如酸鹼度，發酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。
測定含氮量：
大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%，酵母為7.5%，黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱後產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。
測定含碳量：
將少量（乾重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 C下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標准樣品做標准曲線。
還原糖測定法：
還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是，離心發酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鍾，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。
氨基氮的測定：
方法是，離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02N的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。
其他生理物質的測定：
P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙醯胞壁酸）等含量以及產酸，產氣，產CO2（用標記葡萄糖做基質），耗氧，黏度，產熱等指標， 都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，最終產氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如我所在BMP-2的發酵生產上，隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化，判斷細菌的長勢。
商業化快速微生物檢測法：
微生物的檢測，其發展方向是快速，准確，簡便，自動化，當前很多生物製品公司利用傳統微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀器設備，正逐步廣泛應用於醫學微生物檢測和科學研究領域。例如：
1、抗干擾培養基和微生物數量快速檢測技術結合解決了傳統微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統奠定了堅實的基礎。中科院廣州分院合作產業處提供的抗干擾微生物培養基，新型生化鑒定管，微生物計數卡，環境質量檢測試劑盒等，可方便的用於多項檢測。
2、BACTOMETER 全自動各類總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時內獲得監測結果，樣本顏色及光學特徵都不影響讀數，對酵母和黴菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法（IMPEDANCE TECHNOLOGY）將待測樣本與培養基置於反應試劑盒內，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長而產生阻抗改變。如微生物生長時可將培養基中的大分子營養物經代謝轉變為活躍小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從而比傳統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數，酵母菌，大腸桿菌群，黴菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。

⑶ 分光光度計測微生物的生長曲線，主要有什麼特徵呢曲線是啥樣的謝謝

主要是依據菌體濃度來測定的，菌體濃度越大，吸光度越大。生長曲線一般成S型，這是細菌的典型生長曲線，包括四個時期：1延滯期是剛剛接種的時候，細胞適應環境並未細胞分裂做准備
2對數期，細胞大量分裂生長，成對數增漲。3穩定期，細胞增殖於死亡速率相等，曲線表現為表象為水平延伸。4衰退期，由於營養的消耗缺乏，細胞大量死亡。
注意，這中方法只使用於單細胞生物的生長測定。

⑷ 怎樣測乳酸菌的生長曲線

可以用平板菌落計數法。

將等測樣品經適當稀釋後，其中的微生物充分分散為單個細胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經過培養，由每個單細胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數。

但是，由於待測樣品往往不易完全分散成單個細胞，所以長成的一個單菌落也可能來自樣品中的2~3或更多個細胞。因此平板菌落計數的結果往往偏低。現在常使用菌落形成單位。

該計數法的缺點是操作較繁，結果需要培養一段時間才能取得，而且測定結果易受多種因素的影響，但是這種計數方法最大的優點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用於生物製品檢驗，以及食品、飲料和水等含菌指數或污染度的檢測。

(4)如何測微生物生長曲線擴展閱讀：

生長曲線可分為個體生長曲線和群體（平均）生長曲線。一般是在橫軸上標出時間，縱軸上標出測定值。群體生長多呈S形曲線（sigmoid curve），這是最普通的生長曲線。

從微生物直到人類的生物種群，其個體數的增加（人口增加），也常常符合此曲線。此曲線可分為兩種形態，即促進生長的前期和生長減衰的後期。

兩種形態的轉折點（曲折點），植物為開花期，動物相當於成熟期（青春期）。隨著動植物的種類和生長的時期以及器官的種類的不同，還可以得出另外的各種生長曲線，並能求出適合於這些曲線的方程式。一生中的生長也常可分為幾個生長曲線（指數曲線和S形曲線，二或三個S狀曲線等）。

⑸ 測定微生物的生長曲線有幾種方法要配置怎麼的培養基。。。求詳解！！！謝謝，還請附加怎麼測活/總菌數~

微生物生長曲線得看你到底想要的是什麼結果或過程，是要微生物長的多還是微生物在代謝過程中產生你想要的代謝產物？兩者的曲線在你的側重下是不一樣的。培養基也會因為你的選擇而有差別，每種菌的基本培養基都有介紹，網路下吧。不過具體真要做都會有調整，包括所有的生長及發酵條件。測活菌數或總菌數看你要測什麼菌，總菌，一般就用肉湯測個總菌，只是需氧菌的總和。

⑹ 怎樣用分光光度法測菌體的生長曲線要具體過程

我們做過這個實驗，我給你說點具體的（大腸桿菌為例）：

1 配置培養基，就是牛肉膏蛋白腖培養基，要液體的。
2 按一定量分裝到試管里（需要13*3支，3支一組），滅菌。
3 冷卻後取大腸桿菌懸液，用移液槍分別接種到試管培養基中
4 把12組放入37度搖床培養，取一組馬上測OD值，三個值取平均數，偏差太大者捨去
5 在2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小時後分別測其他組。如果無法在特定時間測，也要在那一時間將該組在搖床取出冷凍保存，能測時取出測量即可
6 將得到的值換算後畫圖即可

我做過了不是很難，數據比較變態，但圖作出來還是有正確的走勢的，是個時期都能顯示出來

⑺ 微生物生長曲線測定中遇到的問題

平板計數====精確.
分光光度計====快速.
一般我們不叫"天然培養基"或"合成培養基".針對不同的微生物,所需要的培養基是完全不同的,你這種叫法,實在太籠統了,基本上沒什麼意義.
但很顯然,培養基不同,生長曲線必然不一樣.
道理很簡單,吃的東西都不一樣,生長速度當然不一樣啊!最容易吸收利用的培養基,當然速度最快.