1. 微生物菌種保藏的方法有哪些
菌種的優劣是食用菌生產成敗的關鍵。菌種是國家重要的生物資源,也是微生物工廠首要的生產資料。由於微生物繁殖快、易變異,因此微生物菌種特別需要妥善保藏。世界各國對微生物菌種都很重視。中國科學院微生物研究所專門設立了菌種的保藏機構,為各生產單位收藏和供應各種優良菌種。當然就具體的生產單位而言,大量的生產用菌種還得靠自己來生產和保藏。
菌種保藏的目的:是使優良菌種經過較長時間後,仍能保持菌種的優良性狀、生活能力及純度,降低菌種的衰亡速度,確保菌種的純一,防止雜菌污染及絕種。
保藏菌種的方法:人們在長期的生產實踐中,積累了不少保藏菌種的經驗,常用的保藏方法有:斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、砂土管保藏法、濾紙片保藏法、穀粒保藏法等。常用保藏菌種的方法有以下幾種:
(1)斜面低溫保藏法這是最簡單最普通的保藏方法。首先將菌種在適宜的斜面培養基(一般PDA)上培養成熟後,選擇菌絲生長粗壯,邊緣保存。一般保存溫度4~6℃,除草菇和銀耳菌種外(10~15℃),此方法對其他食用菌都適宜,一般菌種可保藏2~4個月,所以需定時移接。此法保藏雖然方便,但是保藏時間短,需經常轉管,也很容易發生衰退變異現象。因此,不能用作長期保藏,最好與其他方法結合起來保藏。
另外,為了減少保藏期間培養基水分蒸發,瓊脂最好加到2.5%。為防止菌種在保藏過程中產酸分的積累,應加入0.2%的磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等緩沖鹽類,同時,培養成熟後,最好將棉塞管口外剪平,並用礦蠟封或換以無菌木塞,這樣做也可以減少培養基水分的散失,延長保存時間。
在農村如果沒有冰箱,可採用土法保藏。即把保藏用的斜面菌種換上無菌橡皮塞,並用礦燭蠟封後密閉的廣口瓶中,懸入井底保藏。(2)貯藏室保藏法原種和栽培種一般只在貯藏室短期保藏,貯藏室溫度0~10℃為好。室內應清潔、乾燥、無光,應經常檢查溫度和濕度,以降低其生活力,減少變異退化,防止雜菌污染,避免過早出菇。溫度越高,保存的時間越短。
2. 微生物學實驗設計
沒有什麼時間,我簡單解釋一下,語言你可以自己組織,意思對了豐富一下以下內容就可以了哈:
1、取材。指材料選擇,微生物分離一般來源是自然界的土壤及其他生物體內。你最好選擇在常年高溫的環境中采樣。譬如火山口,熱泉口,常年高溫的戈壁沙漠土壤等。
2、分離。指分離野生菌株。在實驗室,分離微生物的傳統途徑是選擇合適的培養基選擇性分離土壤中的微生物,這個題目的要求說明實驗中需要在高溫條件培養,最好選用多種培養基,以便於分離到種類較多的各類微生物。相關實驗技術請自行查閱書籍。
3、純化。微生物分離過程中重要一步,目的是需要得到菌株的純培養,即多次純化過程中需挑取單菌落接種擴培,同時可以起到活化菌株生命力的作用。當然此過程中合適的培養基相當重要。否則菌株可能反而退化失活。
4、篩選。獲得適合高溫生長的菌株庫之後,依據要求篩選菌株。即指提供單因子培養條件篩選,譬如選擇能產高溫蛋白酶的,需要在培養基中單一添加高級蛋白(即未降解過的或未腖化過的)作為氮源,以葡萄糖或其他易利用糖類作單一碳源。又如選擇產高溫澱粉酶的,以澱粉作為單一碳源,補充其他無碳利用的氮源。能在選擇條件下生長的為目的菌株。
5、確證。得到目的菌株後即可通過相應的酶提取方法確證。提取總酶在高溫條件下進行體外蛋白消化或者澱粉消化實驗來確證。
3. 如何從環境中分離產蛋白酶的微生物菌株如何對該菌株進行鑒定
用低濃度氨基酸的培養基培養,然後再逐步降低氨基酸濃度到零做富集。最後得到的應該就是能產蛋白酶的菌株
4. 微生物菌種保藏的方法有哪些
菌種的優劣是食用菌生產成敗的關鍵。菌種是國家重要的生物資源,也是微生物工廠首要的生產資料。由於微生物繁殖快、易變異,因此微生物菌種特別需要妥善保藏。世界各國對微生物菌種都很重視。中國科學院微生物研究所專門設立了菌種的保藏機構,為各生產單位收藏和供應各種優良菌種。當然就具體的生產單位而言,大量的生產用菌種還得靠自己來生產和保藏。
菌種保藏的目的:是使優良菌種經過較長時間後,仍能保持菌種的優良性狀、生活能力及純度,降低菌種的衰亡速度,確保菌種的純一,防止雜菌污染及絕種。
保藏菌種的方法:人們在長期的生產實踐中,積累了不少保藏菌種的經驗,常用的保藏方法有:斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、砂土管保藏法、濾紙片保藏法、穀粒保藏法等。常用保藏菌種的方法有以下幾種:
(1)斜面低溫保藏法這是最簡單最普通的保藏方法。首先將菌種在適宜的斜面培養基(一般PDA)上培養成熟後,選擇菌絲生長粗壯,邊緣保存。一般保存溫度4~6℃,除草菇和銀耳菌種外(10~15℃),此方法對其他食用菌都適宜,一般菌種可保藏2~4個月,所以需定時移接。此法保藏雖然方便,但是保藏時間短,需經常轉管,也很容易發生衰退變異現象。因此,不能用作長期保藏,最好與其他方法結合起來保藏。
另外,為了減少保藏期間培養基水分蒸發,瓊脂最好加到2.5%。為防止菌種在保藏過程中產酸分的積累,應加入0.2%的磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等緩沖鹽類,同時,培養成熟後,最好將棉塞管口外剪平,並用礦蠟封或換以無菌木塞,這樣做也可以減少培養基水分的散失,延長保存時間。
在農村如果沒有冰箱,可採用土法保藏。即把保藏用的斜面菌種換上無菌橡皮塞,並用礦燭蠟封後密閉的廣口瓶中,懸入井底保藏。(2)貯藏室保藏法原種和栽培種一般只在貯藏室短期保藏,貯藏室溫度0~10℃為好。室內應清潔、乾燥、無光,應經常檢查溫度和濕度,以降低其生活力,減少變異退化,防止雜菌污染,避免過早出菇。溫度越高,保存的時間越短。
5. 如何對一株細菌進行種屬鑒定
一般來說,對一株從自然界或其他樣品中分離純化的未知菌種的鑒定要做以下幾個方面工作。①個體形態觀察,進行革蘭氏染色,分辨是G(+)菌還是G(-)菌。並觀察其形狀、大小、有無芽孢及其位置等;②菌種形態觀察,主要觀察其形態、大小、邊緣情況、隆起度、透明度、色澤、氣味等特徵;③做動力試驗,看他能否運動及其鞭毛著生類型(端生、周生);④做生理生化反應及做血清學反應實驗。最後根據以上實驗項目的結果,通過查閱微生物分類檢索表,給未知菌進行命名。
6. 想進行微生物實驗 怎樣獲得常用的細菌
想進行微生物實驗 怎樣獲得常用的細菌
獲得方法:一是野生株,就是自分離菌株,也就是檢測過程中分離出的大腸埃希氏菌.2是買標准菌株,比如ATCC或者CICC標准菌,保存的話有很多種方法,
保存方法:一般是純培養後用LB或者營養肉湯隔夜培養然後加10-20%的滅菌甘油分裝1.5ml離心管後貼簽,-70℃凍存或者直接帶吸附珠的凍存管凍存,有說明的,也很好用.
微生物實驗用的微生物都是純培養微生物,不能用多菌種混合培養的,以免造成實驗結果的不準確。
而要得到純培養微生物,首先要保證實驗用的器皿沒有微生物,這就要求在使用前,所使用的器皿先進行滅菌。而包裝是為了器皿在滅菌後、使用前不受到微生物的二次污染。
7. 如何從環境中分離澱粉酶的微生物菌株的實驗原理和實驗設計
以澱粉作為惟一碳源(其它物質必需物質都有)的培養基培養未分離細菌(先制備固體培養基,凝固後,在表面塗一層澱粉溶液),能產澱粉酶的細菌能生長,且菌落周圍出現透明圈(澱粉不透明,被消化後變透明),則菌群被分離。
8. 如何了解未知微生物菌株的背景及其應用
菌種活化就是將保藏狀態的菌種放入適宜的培養基中培養,逐級擴大培養是為了得到純而壯的培養物,即獲得活力旺盛的、接種數量足夠的培養物。菌種發酵有一般需要2-3代的復壯過程,因為保存時的條件往往和培養時的條件不相同,所以要活化,讓菌種逐漸適應培養環境
要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國際國內常用的菌種保存方法包括:定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍乾燥法、80℃ 冰箱凍結法、液氮超低溫凍結法。
對於不同的保存方式活化的方式也不同:
1 定期移植法的菌種復甦較簡單,直接轉接即可;
2 液體石蠟法保存的菌種在復甦時,挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養基上,生長繁殖後,再重新轉接一次;
3 沙土管法保存菌種在復甦時,在無菌條件下打開沙土管,取部分沙土粒於適宜的斜面培養基上,長出菌落後再轉接一次。或取沙土粒於適宜的液體培養基中,增殖培養後再轉接斜面;
4 真空冷凍乾燥法保存菌種在復甦時先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部,將安瓿管頂部燒熱, 用無菌棉簽沾冷水,在頂部擦一圈,頂部出現裂紋,用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,敲下已開裂的安瓿管的頂端,用無菌水或培養液溶解菌塊,使用無菌吸管移入新鮮培養基上,進行適溫培養;
5 -80℃ 冰箱凍結法保存菌種復甦時,從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管,應立即放置38℃-40℃水浴中快速復甦並適當快速搖動。直到內部結冰全部溶解為止,約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管,將內容物移至適宜的培養基上進行培養
6 液氮超低溫凍結法保存菌種復甦與-80℃ 冰箱凍結法保存菌種復甦相似,從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管,應立即放置在38℃-40℃水浴中快速復甦並適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止,一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管,將內容物移至適宜的培養基上進行培養。
總結一下菌種活化需要以下幾個步驟:
第一配置菌種適宜生長的培養基
第二將菌種從保藏狀態恢復到室溫狀態,比如將冷凍的菌種解凍
第三將通過操作將保藏的菌種接種到培養基中培養,此步驟稱為菌種復壯
第四步挑選培養基茁壯的菌落,挑選其中部分菌落接種到新的培養基中培養,重復此步驟2-3次,從而得到生長良好的菌落
9. 微生物的菌種鑒定方法與步驟(鑒定到「株」一級)
基本上認可的方法就是隨機擴增多態性RAPD
10. 微生物試驗中,菌種的傳代實驗怎麼做微生物的酶活怎麼測
微生物傳代最常用的就是斜面接種法,大致意思就是你從原代菌種里挑一點劃線法保存到小試管里的斜面培養基上,進而讓菌種不斷增殖保存下來。 其方法步驟如下:首先,點燃酒精燈。將菌種和斜面培養基的兩只試管平行放在左手上,用拇指與其它四指夾住,並使中指位於兩試管之間,兩試管的管口齊平(圖9-5①)。其次,用右手先將棉塞擰轉松動,並稍拉出一些,以利又質卑緯觶ㄍ?9-5②)。第三,右手持接種針,在酒精燈將針頭部分燒紅滅菌(圖9-5③)。針頭以上凡是接種時可能進入試管的部分,均應用火灼燒。以下操作都要使試管口靠近火旁。第四,用右手的小指與掌間拔掉左手上兩只試管上的棉塞,同時迅速將試管口在酒精燈上燒灼3秒鍾左右,使管口上可能沾染的少量雜菌得以燒死。第五,將燒過的接種針伸入菌種管內,先將針頭接觸培養基上沒有菌的部位(如斜面的頂端),使其冷卻,以免燙死被接種的菌體。然後輕輕接觸菌體,取出少許,慢慢將接種針抽出試管,接種針抽出時不要使針頭部分碰到管壁和管口,取出後,不可使針頭通過火焰,更不可觸及其它無關物品或桌面。第六,迅速將接種針伸進另一試管,在培養基上輕輕劃線,接種菌體於其上。劃線時,要由底部起劃較密的平行線,一直劃到頂部,以充分利用斜面面積,但不要將培養基劃破。第七,燒灼試管口,將棉塞塞上。塞棉塞時,不要移動試管迎接棉塞,以免試管在移動中納入可能含菌的空氣。第八,將針頭在火焰上燒灼滅菌。放回原處後,騰出手將棉塞塞緊。二、關於微生物酶活性測定,比較復雜,網上比較多,不同酶測定方法也不一樣,同學你自己慢慢查吧,O(∩_∩)O哈哈~