如何快速鑒定未知不明病原微生物

1. 怎麼將未知的微生物鑒定到屬

鑒定方法很多 1、送到鑒定機構裡面，自己只需要准備樣品 2、如果自己做鑒定，方法如下： 各種染色方法+鏡檢 篩選培養基 熒光定量PCR

2. 未知的菌落如何鑒定到種和屬

首先確定種
1.選擇性培養基來做一個種大概的判定（比如SS--志賀沙門，Ecca---大腸，He---好多菌都可以，鹼腖水---霍亂......），根據菌落形態大小和生長情況來做初步判定，其實這個步驟也是為了純化菌，但對菌的方向大概有了一個確定，對下步生化反應的選擇也有幫助；
2.對平板上的可以菌落做生活反應，來做進一步核實，比如說，KIA雙糖，氧化酶反應，v-p動力試驗......；
3.如果以上符合該菌生化特性，你就可以做血清鑒定了，可以鑒定屬
確定屬
4.這時候可以用血清鑒定其血清分型，即屬。
這個一般的微生物實驗室都是有條件的
上面的2.3.4步也可用生化板條來做如API20，這個就會貴一點，但會快很多
如果有條件，有生物酶標儀，軍科院的新產品，可以直接做出來菌的種，有點貴.
當然PCR還是最快捷的方法，但因為是未知菌，沒有范圍，也很麻煩的，引物就得准備好多.
樓上說的塗片現在用的少了，麻煩死了，除非你經驗多，一下就瞧得出來，不然只能看出是球菌，弧菌，桿菌，沒啥意義.
但如果你檢測目標均，就可以查看國標了，差不多就是1.2.3.4幾個步驟.

3. 鑒定一種未知的病害的法則和步驟是什麼

採用細菌溢的方法進行鑒定。
如果是細菌病害，對細菌病害的病原鑒定，多採用「細菌溢」的方法。
切取小塊病組織製片，放載玻片於顯微鏡下檢查，如覺現有「細菌溢」從病組織（維管束）湧出，即可勿步確定為細菌病害。

4. 細菌鑒定辦法有哪些，常見細菌的鑒定辦法就可以

細菌的鑒定通過分離培養獲得的病原菌，必須達到不含有其他微生物的純培養程度，才能進行系統鑒定。系統鑒定就是通過病原菌的形態結構、生長特性、抗原性和病原性等檢測，並用已知標准免疫血清確定分離細菌的屬、種和型。微生物鑒定的程序通常是根據其形態，生長、生化特性等定種，最後根據抗原的免疫血清學檢查定型。(一)形態學檢查各種細菌的形態，在適宜的環境下是相對穩定的。但環境的改變，如培養基條件的改變，抗生素和化學葯品的作用等，均可使細菌產生不規則的形態，並可出現細胞壁的缺陷和多樣性。為此，在作細菌形態鑒定時，必須按被檢菌的生長要求，選擇適宜的培養基和培養條件，以及適宜的培養時間和檢查方法，才能作出正確的形態學鑒定。形態學檢查一般包括二方面：肉眼觀察和顯微鏡檢查。1.肉眼觀察肉眼觀察主要觀察細菌在固體、液體、半固體，鑒別培養基上的生長情況。在固體培養基上要觀察菌落形態、大小、顏色是否均勻一致，表面是光滑濕潤，還是乾燥無光或呈皺紋狀，邊緣是整齊還是不規則，菌落是隆起、扁平，還是乳頭樣，是透明、半透明或不透明。在液體培養基中，要觀察培養基是否呈均勻渾濁，管底有無沉澱，液面有無菌膜，是否產氣等。在半固體培養基上應觀察細菌是否沿著接種線生長，是呈毛刷樣生長還是均勻生長，上下生長是否一致。在鑒別培養基上，應觀察其生長情況是否與預期的相一致，在血瓊脂培養基上還要觀察是否溶血及溶血圈的特點，在某些培養基上還要注意是否有臭味等。2.顯微鏡觀察在作細菌個體形態學檢查時，要根據被檢菌的種類和檢查項目，選用相應的染色方法，同時要注意選擇適合的培養基以及細菌培養的時間，才能達到預期的目的。一般以18－24小時（生長時間長的細菌除外）的幼嫩培養菌為宜。例如，作革蘭氏染色檢查時，培養時間長的陳舊細菌，可能由陽性變為陰性。作細菌運動性檢查時，液體培養基的幼嫩培養物（幾小時到十幾小時）最為適宜。作炭疽莢膜染色時，因炭疽桿菌在一般培養基上不形成莢膜，而在動物體內形成明顯的莢膜，因此，應先接種小鼠，取死亡動物的病料作塗片標本鏡檢。作鞭毛染色時，以液體培養基為宜。芽胞的形成，因細菌種類不同，往往對培養條件如培養基、空氣和培養時間等而異，但一般均要求較長時間。鏡檢時除注意其基本形態結構和大小（要用測微計測量）外，還應注意其排列狀態、菌端形狀、有無兩極染色、有無形成芽胞和莢胞等。必要時可用電鏡觀察其微細結構。3.常用的幾種染色方法塗片用的載玻片需用清潔液洗凈、擦乾、不留油質，否則培養物不能均勻地推開。被檢材料如果是肉湯培養物，用鉑金耳環取一滴，均勻塗抹於載玻片上，塗抹的范圍約有手指甲大即可。隨後，在酒精燈火焰上加熱使之固定（即火焰固定）；被檢材料如果是固體培養物，先滴一滴水（常用生理鹽水）於載玻片上，用鉑金耳環取少許培養物，在水滴中混勻，培養物不宜太多，菌體看不清楚。膿汁、淋巴液、乳汁也按同樣方法制備抹片。血液和病變組織，直接塗抹在載玻片上，組織抹片也不能太厚，否則看不見細菌，細菌培養物抹片用火焰固定，組織抹片常用甲醇或甲醛固定。

5. 如何對樣本中的微生物進行病原學診斷

摘要：病原微生物種類繁多，變異迅速，快速鑒定病原微生物的檢驗技術也在不斷發展前進著。目前，應用比較廣泛的病原微生物檢測方法主要有直接塗片鏡檢、分離培養、生化反應、血清學反應、核酸分子雜交、基因晶元、多聚酶鏈反應等，該文對這些檢測技術進展做一綜述。 對人和動物具有致病性的微生物稱為病原微生物，又稱病原體，有病毒、細菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、真菌、放線菌、朊粒等。這些病原微生物可引起感染、過敏、腫瘤、痴獃等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年來出現的SARS、高致病性禽流感、西尼羅病毒感染等疾病的傳染性極強，往往造成世界性大流行，因此對病原體的檢測必須做到快速、准確。常規病原學檢測方法操作繁瑣，檢測周期長，而且對操作人員技術水平要求比較高。隨著醫學微生物學研究技術的不斷發展，病原學診斷已不再局限於病原體水平，深入到分子水平、基因水平的檢測手段不斷出現並被應用於臨床和實驗室 J。核酸分子雜交技術、PCR技術、基因晶元技術等檢測方法，自動化程度高，快速省時、無污染、結果精確，可以准確靈敏地鑒定病原微生物。1 傳統的病原微生物的檢測方法傳統的病原微生物學實驗室檢查以染色、培養、生化鑒定等為主，將標本直接塗片染色鏡檢和接種在培養基上進行分離培養是對細菌或真菌感染性疾病進行病原學診斷的常用方法。1．1 直接塗片鏡檢病原微生物體形體積微小，大多無色半透明狀，將其染色後可藉助顯微鏡觀察其大小、形態、排列等。直接塗片染色鏡檢簡便快速，對那些具有特殊形態的病原微生物感染仍然適用，例如淋球菌感染、結核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接塗片鏡檢不需要特殊的儀器和設備，在基層實驗室里仍然是十分重要的病原微生物檢測手段。1．2 分離培養與生化反應 分離培養主要用於臨床標本(如血液、痰、糞便等)或培養物中有多種細菌時對某一種細菌的分離。細菌的生長繁殖需要一定時間，檢測周期較長，不能同時處理批量樣本。為解決這一問題，各種自動化培養和鑒定系統不斷產生，傳統鑒定方法也在逐步改進，大大加快了檢驗速度。例如Microscan WalLCAway全自動微生物分析儀，可同時做細菌鑒定和葯敏試驗，檢驗500多個菌種。苛養菌如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對營養要求比較高，常規培養陽性率低。雍剛 等將不要同比例的葡萄糖、玉米澱粉、生長因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌劑加入到巧克力培養基中製成了新型淋病奈瑟菌培養基，大大提高了淋病奈瑟菌的分離培養率。蘇盛通等在營養瓊脂中加人了中葯紅棗、赤小豆培養甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎鏈球菌等細菌，生長指數明顯高於血平板。1．3 組織細胞培養 活組織細胞培養適於專營活組織細胞內生存的病原體，包括病毒、立克次體、衣原體等。不同病原體敏感的組織細胞是不一樣的，將活細胞從病原體敏感的動物組織中取出在體外進行原代培養或用病原體敏感細胞系進行傳代培養，再將病原體接種於相應的組織細胞中後，病原體可在其中繁殖增長，引起特異性的細胞病變效應。也可以將病原體直接接種於敏感動物體內，引起相應組織器官出現特異的病理學改變。往往可以根據這些特異的病變對病原體進行鑒定。2 血清學與免疫學檢測血清學檢測是通過已知的抗體或抗原來檢測病原體的抗原或抗體從而對病原體進行快速鑒定的技術，簡化了鑒定步驟，常用的方法包括血清凝集技術、乳膠凝集實驗、熒光抗體檢測技術、協同凝集試驗、酶聯免疫測試技術等。酶聯免疫技術的應用大大提高了血清學檢測的敏感性和特異性，不僅可檢測樣本中病原體抗原，也可檢測機體的抗體成分。幽門螺奸菌在我國人群感染率高達50％ ～80％ ，應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測唾液中抗HP抗體來診斷HP感染，其結果滿意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國人群中感染率極高，ELISA應用於乙型肝炎病人早期血清學診斷的效果最為明顯。臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何從這些細菌中分離出目標菌是關鍵。免疫磁珠分離技術(IMBS)是近年來發展起來的在微生物檢測領域中一種新技術。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯到磁珠微球上，通過抗原抗體反應形成磁珠一目標病原體復合物或磁珠一一抗一目標病原體復合物，在外部磁場磁力的作用下，將目標病原體分離出來。目前已經開發出了針對各種病原體的免疫磁珠，如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團菌等，廣泛應用到各級科研和實驗室 。經IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測，檢測時間縮短至4 h。IM—Bs還可以和其它檢測技術聯合來檢測病原菌，免疫磁珠分離得到的目標菌可繼續用於分離培養使大腸埃希菌0157最低檢測限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS結合聚合酶鏈反應(IMBS—PCR)可對培養條件比較特殊的細菌如苛養菌、厭氧菌進行快速檢測，肉類中的產毒素型產氣莢膜梭菌經IMBS．PC

6. 食源性致病微生物的快檢方法

檢測致病菌大概有如下幾種方法。
1 傳統生物學方法，按照標准檢測，最麻煩，最傳統，但是最經典，可作為其他方法之驗證。
2 顯色培養基方法，用國外進口顯色培養基檢測，比較方便，目前最流行，使用簡單，也不貴。
3 膠體金試紙條檢測，購買國外進口試紙條，現場檢測，這種方法10分鍾可以檢測到結果。但是檢測靈敏度偏低。
4 ELISA，酶聯免疫實驗。目前只有國外進口，歐美四家大公司壟斷了全球95%以上的市場，一個96孔試劑盒，售價高達5000-6000元，非常無奈，但是是國外最流行的快速篩選技術，檢測靈敏度、檢測周期都比較理想，不過國內現在有公司專業在做這方面的試劑盒了，估計價格很快會降下來，可能是將來主流的檢測技術了，部分已經寫進國標了。
5 IC-PCR，免疫捕捉PCR，用抗體特異性識別捕捉，之後再PCR擴增。最大的優勢是，病原經過抗體識別、PCR檢測雙重檢測，可一次鑒定到種，檢測靈敏度可以達到十的兩次方，不用核酸提取，所有反應在一個PCR管里進行，減少了病原的損失，缺點是檢測時間大致在4個小時，是一張理想的驗證手段。
6 Direct-PCR，增菌後直接PCR，比較簡單的驗證手段，增菌後直接擴增，受PCR檢測體系的現實，靈敏度偏低，但是取決於樣品中的菌含量。
7 Nested-PCR，兩對引物巢式PCR。兩對引物兩次擴增，最大的優勢是檢測准確性、靈敏度可絕對保障，劣勢是檢測時間較長。
8膜過濾PCR，利用病原富集裝置，富集之後檢測，最笨的一種方法，但是是最實用的，病原經過微孔濾膜過濾後，可高效富集病原 ，之後去檢測，大大提高檢測靈敏度。
9 BIO-PCR，培養增菌後PCR擴增，這個技術只能做研究用了，就是分離培養後，用PCR檢測，乏善可陳。
10 IMS-PCR，免疫磁珠PCR，用免疫磁珠捕捉，之後進行PCR，用磁珠富集樣品中的病原，之後直接PCR擴增，非常實用的方法，主要是可以富集病原。
11 BAX快速檢測系統，按照系統說明書操作。貴族實驗室用的東西，靈敏度和其成本、假陽性一樣出色。
12 RiboPrinter快速檢測系統，按照系統說明書操作。同上，大同小異。

7. 細菌分子鑒定的方法有哪些

一般從DNA、RNA和蛋白質這三個方面鑒定。將三種物質分別提取出來，各自進行鑒定。鑒定的方法可以用你提到的這些。
1.核酸雜交：簡單的說，就是將需檢測的核酸與標記的分子結合使得未知核酸可以被檢測到。
2.脈沖場凝膠電泳：利用電場讓不同大小的帶電DNA分子以不同的速度移動，從而將不同大小的分子分開。可分離10kb--10mb的DNA分子。
3.16S rRNA :16S rRNA所對應的 16S rDNA基因在微生物基因組中具有高度保守性；對16S rDNA而言，如果出現3個鹼基以上的差異就可以斷定細菌不屬於同一種屬。它具有高度的靈敏性，而且不需要培養，檢測指標也很單一。可以快速檢測未知微生物或致病微生物。
4.RAPD：對整個未知序列的基因組進行多態性分析的分子技術。先進行PCR擴增，然後電泳分離染色，在紫外透視儀上檢測多態性。
5.質粒質譜分析法：我只了解過蛋白質的質譜分析技術，質粒的沒有了解過。
蛋白質：將蛋白質酶解成小肽段並混合基質，用激光將呈離子化氣體狀態的待測物噴射，經電場到達檢測器，根據到達的時間分析肽段的分子質量。

8. 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

1、快速測試片技術法

快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。

細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。

2、生物電化學方法

生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷，從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中，培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化，所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。

常見的有：阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。

3、微菌落技術

微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點，其研究始於 20 世紀50年代，定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始，國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。

4、氣相色譜法

氣相色譜應用到微生物的檢測中，主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異，利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

5、高效液相色譜法

利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

9. 如何又快又好地檢測細菌病原

細菌是嚴重危害養殖魚類的微生物，個體非常微小，難以在顯微鏡下分辨。細菌性病原的分離及常規鑒定技術耗時較長，一般要2～3天才能獲得結果，而且非常繁瑣。目前發展較快的試劑盒技術，為魚類細菌病原檢測提供了簡便、快速的方法。水產動物細菌性病原檢測試劑盒的研發多採用生化和分子生物學方法，主要採用PCR、LAMP、核酸探針雜交和ELISA等技術，其中ELISA技術具有簡便、快速、准確和靈敏的特點，易為養殖者和基層防疫人員應用。待檢測的樣品只需簡單的研磨處理，加入試劑盒內提供的試劑，經過兩步反應就可肉眼觀察結果，不需特殊的儀器。根據試劑盒說明書上規定的操作步驟，可在一天內完成特定病原的檢測。