微生物液氮保存後如何活化

㈠ 菌種發酵活化的方法步驟

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秸稈飼料新技術
發布時間：2001-11-29 文章來源： 作者：[ ]
農作物秸稈是農業生產的副產物，也是大自然賦予人類的寶貴資源。我國每年產生的農作物秸稈達6億噸以上，國家和各級政府都十分重視秸稈的再利用問題，不斷加大資金投入，研究有效利用秸稈的方法，其中一條重要途徑是將農作物秸稈轉化為動物飼料，為養殖業開辟新的飼料來源。但由於農作物秸稈纖維物質含量高，營養成分低，一般不適合直接當作飼料飼養畜禽，必須經過適當處理。如現在使用的青黃貯、氨化等方法，多用於牛、羊等反芻動物。然而對如何進一步提高秸稈飼料的營養成分，擴大秸稈飼料的應用范圍，就必須使用新技術新方法。一、秸稈飼料製作方法 1、准備工作 選用無霉變的玉米秸、稻草、麥秸、豆秸等農作物秸稈，根據飼養對象進行適當粉碎，喂豬、鵝、鴨的秸稈粉碎粒度越細越好，喂牛、羊的秸稈應切成長度0.5-2厘米的段。發酵容器根據養殖規模可選用塑料袋、塑料桶、缸和水泥池等。 2、製作方法（1）菌種活化 將2.5公斤糖溶解在10公斤30度左右溫水中，加入發酵劑1公斤，充分混合後放置1-2小時，促進劑1公斤和食鹽2公斤先用50公斤水充分溶解，然後與活化好的發酵劑混合在一起，加水到1000公斤，可處理500公斤干秸稈。（2）發酵方法 在水泥地上放切好的秸稈，也可摻入適量玉米面、豆粕等，將配製好的發酵劑和促進劑與秸稈均勻混合，裝入塑料袋中壓實，密封發酵5-12天。發酵時間長短根據環境溫度而定，最低發酵溫度為10度，溫度升高發酵時間相應縮短。發酵好的秸稈飼料色澤金黃或淺黃，具有酒香或蘋果香味，手感質地松軟。 3、飼喂方法 秸稈發酵後干物質消化率提高40%以上，粗蛋白質含量提高8-12%，有機酸和糖提高30-40%，粗脂肪3-7%，同時還產生大量維生素、氨基酸等生理活性程序控制物質，因此可替代部分精飼料直接用於飼喂牲畜。用於飼養育肥豬可替代30%的精料，育肥牛可替代50%的精料，鴨、鵝可替代90%的精料。 4、幾點建議 秸稈在發酵和使用期間要避免頻繁開蓋，開蓋後應立即重新封好，以防發生霉變，一旦出現霉變現象或有異味產生，應停止使用。各種秸稈可單獨使用或搭配使用，優先選用秸稈的順序是，玉米秸、稻草、麥秸，豆秸可按5-15%的比例添加到上述秸稈中。青綠秸稈和干黃秸稈均可使用，但霉變秸稈和高粱稈不能用來做飼料。二、秸稈生物飼料應用實例 1、養豬實例：規模：育肥豬300頭，母豬10頭。用量：發酵玉米秸稈育肥豬用30%，母豬用50%。效果：育肥豬4個月出欄，料肉比2.8-3.1：1，平均每頭豬節省飼料款80元。生長期採食量正常，未發生腸道疾病。 2、養牛實例：規模：30頭。選8月齡牛犢，示範組3頭，對照組3頭。用量：精料相同，粗料示範組用發酵稻草，對照組用乾草。效果：喂飼期2個月，示範組平均每頭牛日增重0.79公斤，對照組平均每頭牛日增重0.355公斤。示範組平均每頭牛獲純利潤155.48元，對照組平均每頭牛獲純利潤31.24元。

酸奶是以鮮奶為原料，接種乳酸桿菌在一定條件下發酵而成的。酸奶經過發酵後，原有的乳糖部分轉變成乳酸，但仍保留有部分的乳糖，所以形成特有的酸甜風味。不同品種可能發酵的程度不同，乳糖和乳酸的比例有一定差異，因而在口感上有的品種會稍甜一些，而有的品種會稍酸一些。但不會是很甜，如果真是很甜，可能是添加了糖。
目前市面上有凝固型和攪拌型兩種酸奶，後者因為在酸性環境下，蛋白質部分變性形成凝乳。前者在此基礎上，還加了少量凝乳酶，促進蛋白質凝固。兩種類型的酸奶與鮮奶的營養成分沒有多大差異。但請注意，酸奶與市面上乳酸型飲料不同，後者是在各種飲料上添加一定量的酸味劑，使之呈一定的酸味，營養價值低。
酸奶是一種營養價值很高的食品，健康人一天吃多少較合適沒有嚴格限制。專家們認為，健康成人每天喝不超過一千毫升都是可以的。一天之中任何時候想喝都可以喝。

酸奶是一種傳統發酵乳製品，具有豐富的營養價值和良好的保健功能。隨著冰箱的普及和冷鏈系統的推廣，隨著我國人民消費水平和文明素質的提高，隨著健康理念的流行，酸奶產量以年平均25%的速度增長，已經成為我國第一大發酵乳製品，是最具盈利和發展潛力的產業。

酸奶是新鮮牛奶經酸奶發酵劑發酵而成的乳製品。酸奶發酵劑是製作酸奶所用的特定的微生物培養材料。發酵劑在酸奶生產過程中的作用非常重要，發酵劑是酸奶產品產酸和產香的基礎和主要原因。酸奶質量的好壞主要取決於酸奶發酵劑的品質類型及活力。

酸奶發酵劑的種類

酸奶發酵劑按照物理形態的不同可分為液體酸奶發酵劑、冷凍酸奶發酵劑和直投式酸奶發酵劑這3種。液體酸奶發酵劑比較便宜，但是菌種活力經常發生改變，存放過程中易染雜菌，保藏時間也較短，長距離運輸菌種活力降低很快；冷凍酸奶發酵劑乃經深度冷凍而成，其價格也比直投式酸奶發酵劑便宜，菌種活力較高，活化時間也較短，但是其運輸和貯藏過程中都需要-45~-55℃左右的特殊環境條件；而直投式酸奶發酵劑不僅可以直接投入到發酵罐中生產酸奶，而且貯藏在普通冰箱中即可，運輸成本和貯藏成本都很低，其使用過程中的方便性、低成本性和品質穩定性特別突出。

目前，液體酸奶發酵劑由於其品質不穩定且易受污染，已經逐漸被大型酸奶廠家所淘汰，只有一些中小型酸奶工廠還在聯合一些大學或研究所進行生產；深冷凍酸奶發酵劑因其深冷凍鏈的費用比較高，使用的廣泛性受到限制；而直投式酸奶發酵劑在其價格逐漸為國內廠家所接受後，已經開始在一些大型酸奶廠家推廣使用。

在以前的酸奶生產過程中，酸奶發酵劑的菌種要在酸奶生產廠家單獨設一菌種車間，以完成「純菌→活化→擴大繁殖→母發酵劑→中間發酵劑→工作發酵劑」這一工藝過程，該過程工序多、技術要求嚴格，一般廠家由於生產條件有限，經常出現質量問題。所以，在乳業發達國家，酸奶生產廠家不自製發酵劑，由專門生產發酵劑的企業提供酸奶發酵劑，來滿足發酵乳製品廠家的要求。丹麥的漢森中心實驗室1988年底生產出超濃縮的直投式酸奶發酵劑。

直投式酸奶發酵劑(Directed Vat Set, DVS)是指一系列高度濃縮和標准化的冷凍乾燥發酵劑菌種，可直接加入到熱處理的原料乳中進行發酵，而無需對其進行活化、擴培等其它預處理工作。直投式酸奶發酵劑的活菌數一般為1010 - 1012 CFU/g。由於直投式酸奶發酵劑的活力強、類型多，酸奶廠家可以根據需要任意選擇，從而豐富了酸奶產品的品種，同時省去了菌種車間，減少了工作人員、投資和空間，簡化了生產工藝。直投式酸奶發酵劑不需擴大培養，可直接使用，便於管理。直投式酸奶發酵劑的生產和應用可以使發酵劑生產專業化、社會化、規范化、統一化，從而使酸奶生產標准化，提高酸奶質量，保障了消費者的利益和健康。

直投式酸奶發酵劑的製作方法

酸奶生產技術的一個重大突破就是在於改變了傳統液態發酵劑的生產模式，使用直投式酸奶發酵劑。直投式酸奶發酵劑的產品質量均一，可以預先測定其活性，接種量可精確控制，而且容易混合均勻，因此可以確保發酵劑和酸奶質量的穩定。直投式酸奶發酵劑的生產過程主要包括以下幾個步驟：

1) 優良菌種的選育和保藏。生產優質的商品化發酵劑關鍵在於使用優良菌種。目前國外已經專門成立了酸奶發酵劑生產與研究中心，對發酵劑菌種的功能要求已經基本形成標准。乳酸菌的篩選方向主要有：① 篩選抗冷凍、抗乾燥、抗剪切力等抗逆性強的菌株，因為凍干、深度凍藏、噴霧乾燥是當前制備商品化發酵劑的主要方法；② 篩選乳糖和半乳糖利用率高的陽性菌株，以多產乳酸；③ 篩選粘性菌種以高產胞外多糖等粘性物質，從而增加產品粘度，提高產品的濃厚質地，並減少凝膠斷裂及乳清析出等質量缺陷的發生；④ 酸奶發酵過程中會經常由於噬菌體的污染而導致發酵遲緩甚至發酵失敗，但是目前還缺乏有效的防治措施，因此每個酸奶廠都要求有相應的抗噬菌體菌株以備輪換；⑤ 檸檬酸能夠被分解成為二乙醯等酸奶特有風味物質，檸檬酸利用菌能夠增強酸奶的特有風味；⑥ 篩選雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌等益生菌時，菌株最好來自於人體，而且能耐受人的膽汁酸鹽和酸性環境，以增強其有效性。

篩選得到的純培養物置於超低溫冰箱或液氮罐中長期保藏，以保持其活性和穩定性。

2) 菌種的移植。在進行發酵劑的工廠化生產以前，先在實驗室和菌種車間進行菌種的活化和移植，並進行種子液的擴大培養。

3) 培養基的配製和滅菌。制備直投式酸奶發酵劑，首先要對乳酸菌進行高濃度培養。在選擇好基礎培養基(一般為脫脂奶粉培養基)後，要找到合適的增強因子對培養基進行強化，得到優化培養基，以使乳酸菌的繁殖量達到最大。

4) 接種培養。乳酸菌的高濃度培養方法有幾種：① 恆定pH值培養法：乳酸菌在發酵過程中，代謝產生的乳酸、醋酸等物質對其生長具有反饋抑製作用。發酵罐中培養液的pH值維持在5.8 - 6.0，以解除乳酸等物質對菌體生長的抑製作用，延長培養時間，制備出含活菌數高的發酵液。培養過程中，使用化學中和法或緩沖鹽法維持培養液pH值的穩定。② 膜滲析法：利用膜的選擇性將培養液與營養液進行成分交換，使培養液中的乳酸部分滲出，營養液中的成分滲入培養液中，以維持乳酸菌正常的生長繁殖。

5) 細胞濃縮。對數期後期至穩定期前期是乳酸菌細胞收獲的最佳時期，因為此時收獲的菌體細胞的存活率和抗凍、抗乾燥能力最強。這時就可以將乳酸菌培養液進行離心分離，收集菌體細胞，使菌液濃度得到濃縮。也可以選擇膜分離。濃縮倍數在20 - 50倍以上，操作過程應盡量柔和，盡量降低剪切力和空氣的影響。

6) 冷凍乾燥。將乳酸菌冷凍後，在減壓環境下利用升華現象除去水分。當菌體中的大部分水分被去除後，細胞的生理活動就會停止，從而達到了長期保藏的目的。冷凍過程中產生的冰晶體會損壞細胞膜，導致細胞大量死亡，所以在冷凍乾燥前需加抗冷凍保護劑，以減少細胞的損害程度。

7) 包裝。一般採用袋裝、無菌包裝，便於貯存、運輸

㈡ 硝化細菌低溫保存之後如何活化

從冰箱里取出，放置在室溫下半小時後，在無菌條件下將細菌挑去少許接種在硝化細菌的液體培養基中，兩三天後，細菌便和之前的一樣了。

㈢ 如何用液氮保存腸道內容物中的微生物

你可先獲得腸道中的微生物菌群，將其製成菌懸液，與甘油混合，裝到EP或其他管里中，放入液氮中保存。
也可取含微生物的阻滯進行上述保存

㈣ 如何進行微生物活化

樓上太絕對了。

除了平板你還可以用液體培養基活化，按照1%的接種量接種到新鮮液體培養基。

如果是甘油管的活化，建議還是液體活化。

保溫溫度和時間根據不同的菌種自己調整。

㈤ 我第一次微生物，剛買回來了菌種，但不知道如何復甦和保存，幫幫忙，謝謝

復甦就是挑一點在培養基上培養。保存一般4度冰箱里

㈥ 怎樣利用液氮保藏菌種

液氮超低溫保藏法是把菌種裝在含有冷凍保護劑的安瓿瓶內，將該安瓿瓶放入液氮（-196℃）中保藏。由於菌絲體處於-196℃，其代謝降低到完全停止的狀態。所以不需定期移植。液氮超低溫保藏法是菌種（包括雙孢蘑菇菌種、雞腿蘑菌種）長期保藏的最有效、最可靠的方法。
啟用液氮罐中保存的菌種時，應先將安瓿瓶置於35～40℃的溫水中，使瓶內的冰塊迅速融解，然後在無菌條件下開啟安瓿瓶，用接種針取菌塊移接於適宜的培養基上，置22～24℃活化培養。

㈦ 液氮的瞬間冷凍能力很強，它是如何進行保存的

液氮是一種低溫液體，液氮都是低溫保存的原理。這樣可以保存生物的活性細胞，而且液氮罐本身的特性，低溫的特殊特性，一些顧客擔心危險性，避免了這種現象。我們應該採取什麼合理的方法來確保運營商的安全

保管注意事項存放在涼爽通風的倉庫里。庫恩不能超過30。儲存區應配備泄漏應急處理設備。

操作注意事項密封工作。密閉運行提供了良好的自然通風條件。運營商必須經過專業培訓，嚴格遵守操作規定。運營商最好穿防寒服，戴防寒手套。防止氣體泄漏到車間空氣中。運輸時輕輕卸下，防止鋼瓶和配件損壞。配備泄漏應急處理設備。

㈧ 如何對微生物菌種進行活化

有同學已經說的很專業了，我就給你說些簡單實用的。不知道你出於何種目的要進行活化。如果你是用凍存管保存的菌株進行活化，取出2顆小珠放在適宜的固體培養基上，合上蓋讓小珠在平皿上滾動，適宜條件培養就可以了。長出一個菌落，你再繁殖就可以了。如果你是凍乾粉的菌種，准備適宜的液體培養基，少少一點點粉末接種就可以了，根據此菌種一般液體培養所需時間，大概在36-48h，你還可以在觀察到液體渾濁、試管底部有沉澱時（沉澱者也可能為原本死亡的細菌），取100微升液體塗抹在固體培養基上。
一般的話，復甦的菌種需要重復幾次復壯。