微生物菌種乾粉活化實驗怎麼做

A. 菌種發酵活化的方法步驟

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秸稈飼料新技術
發布時間：2001-11-29 文章來源： 作者：[ ]
農作物秸稈是農業生產的副產物，也是大自然賦予人類的寶貴資源。我國每年產生的農作物秸稈達6億噸以上，國家和各級政府都十分重視秸稈的再利用問題，不斷加大資金投入，研究有效利用秸稈的方法，其中一條重要途徑是將農作物秸稈轉化為動物飼料，為養殖業開辟新的飼料來源。但由於農作物秸稈纖維物質含量高，營養成分低，一般不適合直接當作飼料飼養畜禽，必須經過適當處理。如現在使用的青黃貯、氨化等方法，多用於牛、羊等反芻動物。然而對如何進一步提高秸稈飼料的營養成分，擴大秸稈飼料的應用范圍，就必須使用新技術新方法。一、秸稈飼料製作方法 1、准備工作 選用無霉變的玉米秸、稻草、麥秸、豆秸等農作物秸稈，根據飼養對象進行適當粉碎，喂豬、鵝、鴨的秸稈粉碎粒度越細越好，喂牛、羊的秸稈應切成長度0.5-2厘米的段。發酵容器根據養殖規模可選用塑料袋、塑料桶、缸和水泥池等。 2、製作方法（1）菌種活化 將2.5公斤糖溶解在10公斤30度左右溫水中，加入發酵劑1公斤，充分混合後放置1-2小時，促進劑1公斤和食鹽2公斤先用50公斤水充分溶解，然後與活化好的發酵劑混合在一起，加水到1000公斤，可處理500公斤干秸稈。（2）發酵方法 在水泥地上放切好的秸稈，也可摻入適量玉米面、豆粕等，將配製好的發酵劑和促進劑與秸稈均勻混合，裝入塑料袋中壓實，密封發酵5-12天。發酵時間長短根據環境溫度而定，最低發酵溫度為10度，溫度升高發酵時間相應縮短。發酵好的秸稈飼料色澤金黃或淺黃，具有酒香或蘋果香味，手感質地松軟。 3、飼喂方法 秸稈發酵後干物質消化率提高40%以上，粗蛋白質含量提高8-12%，有機酸和糖提高30-40%，粗脂肪3-7%，同時還產生大量維生素、氨基酸等生理活性程序控制物質，因此可替代部分精飼料直接用於飼喂牲畜。用於飼養育肥豬可替代30%的精料，育肥牛可替代50%的精料，鴨、鵝可替代90%的精料。 4、幾點建議 秸稈在發酵和使用期間要避免頻繁開蓋，開蓋後應立即重新封好，以防發生霉變，一旦出現霉變現象或有異味產生，應停止使用。各種秸稈可單獨使用或搭配使用，優先選用秸稈的順序是，玉米秸、稻草、麥秸，豆秸可按5-15%的比例添加到上述秸稈中。青綠秸稈和干黃秸稈均可使用，但霉變秸稈和高粱稈不能用來做飼料。二、秸稈生物飼料應用實例 1、養豬實例：規模：育肥豬300頭，母豬10頭。用量：發酵玉米秸稈育肥豬用30%，母豬用50%。效果：育肥豬4個月出欄，料肉比2.8-3.1：1，平均每頭豬節省飼料款80元。生長期採食量正常，未發生腸道疾病。 2、養牛實例：規模：30頭。選8月齡牛犢，示範組3頭，對照組3頭。用量：精料相同，粗料示範組用發酵稻草，對照組用乾草。效果：喂飼期2個月，示範組平均每頭牛日增重0.79公斤，對照組平均每頭牛日增重0.355公斤。示範組平均每頭牛獲純利潤155.48元，對照組平均每頭牛獲純利潤31.24元。

酸奶是以鮮奶為原料，接種乳酸桿菌在一定條件下發酵而成的。酸奶經過發酵後，原有的乳糖部分轉變成乳酸，但仍保留有部分的乳糖，所以形成特有的酸甜風味。不同品種可能發酵的程度不同，乳糖和乳酸的比例有一定差異，因而在口感上有的品種會稍甜一些，而有的品種會稍酸一些。但不會是很甜，如果真是很甜，可能是添加了糖。
目前市面上有凝固型和攪拌型兩種酸奶，後者因為在酸性環境下，蛋白質部分變性形成凝乳。前者在此基礎上，還加了少量凝乳酶，促進蛋白質凝固。兩種類型的酸奶與鮮奶的營養成分沒有多大差異。但請注意，酸奶與市面上乳酸型飲料不同，後者是在各種飲料上添加一定量的酸味劑，使之呈一定的酸味，營養價值低。
酸奶是一種營養價值很高的食品，健康人一天吃多少較合適沒有嚴格限制。專家們認為，健康成人每天喝不超過一千毫升都是可以的。一天之中任何時候想喝都可以喝。

酸奶是一種傳統發酵乳製品，具有豐富的營養價值和良好的保健功能。隨著冰箱的普及和冷鏈系統的推廣，隨著我國人民消費水平和文明素質的提高，隨著健康理念的流行，酸奶產量以年平均25%的速度增長，已經成為我國第一大發酵乳製品，是最具盈利和發展潛力的產業。

酸奶是新鮮牛奶經酸奶發酵劑發酵而成的乳製品。酸奶發酵劑是製作酸奶所用的特定的微生物培養材料。發酵劑在酸奶生產過程中的作用非常重要，發酵劑是酸奶產品產酸和產香的基礎和主要原因。酸奶質量的好壞主要取決於酸奶發酵劑的品質類型及活力。

酸奶發酵劑的種類

酸奶發酵劑按照物理形態的不同可分為液體酸奶發酵劑、冷凍酸奶發酵劑和直投式酸奶發酵劑這3種。液體酸奶發酵劑比較便宜，但是菌種活力經常發生改變，存放過程中易染雜菌，保藏時間也較短，長距離運輸菌種活力降低很快；冷凍酸奶發酵劑乃經深度冷凍而成，其價格也比直投式酸奶發酵劑便宜，菌種活力較高，活化時間也較短，但是其運輸和貯藏過程中都需要-45~-55℃左右的特殊環境條件；而直投式酸奶發酵劑不僅可以直接投入到發酵罐中生產酸奶，而且貯藏在普通冰箱中即可，運輸成本和貯藏成本都很低，其使用過程中的方便性、低成本性和品質穩定性特別突出。

目前，液體酸奶發酵劑由於其品質不穩定且易受污染，已經逐漸被大型酸奶廠家所淘汰，只有一些中小型酸奶工廠還在聯合一些大學或研究所進行生產；深冷凍酸奶發酵劑因其深冷凍鏈的費用比較高，使用的廣泛性受到限制；而直投式酸奶發酵劑在其價格逐漸為國內廠家所接受後，已經開始在一些大型酸奶廠家推廣使用。

在以前的酸奶生產過程中，酸奶發酵劑的菌種要在酸奶生產廠家單獨設一菌種車間，以完成「純菌→活化→擴大繁殖→母發酵劑→中間發酵劑→工作發酵劑」這一工藝過程，該過程工序多、技術要求嚴格，一般廠家由於生產條件有限，經常出現質量問題。所以，在乳業發達國家，酸奶生產廠家不自製發酵劑，由專門生產發酵劑的企業提供酸奶發酵劑，來滿足發酵乳製品廠家的要求。丹麥的漢森中心實驗室1988年底生產出超濃縮的直投式酸奶發酵劑。

直投式酸奶發酵劑(Directed Vat Set, DVS)是指一系列高度濃縮和標准化的冷凍乾燥發酵劑菌種，可直接加入到熱處理的原料乳中進行發酵，而無需對其進行活化、擴培等其它預處理工作。直投式酸奶發酵劑的活菌數一般為1010 - 1012 CFU/g。由於直投式酸奶發酵劑的活力強、類型多，酸奶廠家可以根據需要任意選擇，從而豐富了酸奶產品的品種，同時省去了菌種車間，減少了工作人員、投資和空間，簡化了生產工藝。直投式酸奶發酵劑不需擴大培養，可直接使用，便於管理。直投式酸奶發酵劑的生產和應用可以使發酵劑生產專業化、社會化、規范化、統一化，從而使酸奶生產標准化，提高酸奶質量，保障了消費者的利益和健康。

直投式酸奶發酵劑的製作方法

酸奶生產技術的一個重大突破就是在於改變了傳統液態發酵劑的生產模式，使用直投式酸奶發酵劑。直投式酸奶發酵劑的產品質量均一，可以預先測定其活性，接種量可精確控制，而且容易混合均勻，因此可以確保發酵劑和酸奶質量的穩定。直投式酸奶發酵劑的生產過程主要包括以下幾個步驟：

1) 優良菌種的選育和保藏。生產優質的商品化發酵劑關鍵在於使用優良菌種。目前國外已經專門成立了酸奶發酵劑生產與研究中心，對發酵劑菌種的功能要求已經基本形成標准。乳酸菌的篩選方向主要有：① 篩選抗冷凍、抗乾燥、抗剪切力等抗逆性強的菌株，因為凍干、深度凍藏、噴霧乾燥是當前制備商品化發酵劑的主要方法；② 篩選乳糖和半乳糖利用率高的陽性菌株，以多產乳酸；③ 篩選粘性菌種以高產胞外多糖等粘性物質，從而增加產品粘度，提高產品的濃厚質地，並減少凝膠斷裂及乳清析出等質量缺陷的發生；④ 酸奶發酵過程中會經常由於噬菌體的污染而導致發酵遲緩甚至發酵失敗，但是目前還缺乏有效的防治措施，因此每個酸奶廠都要求有相應的抗噬菌體菌株以備輪換；⑤ 檸檬酸能夠被分解成為二乙醯等酸奶特有風味物質，檸檬酸利用菌能夠增強酸奶的特有風味；⑥ 篩選雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌等益生菌時，菌株最好來自於人體，而且能耐受人的膽汁酸鹽和酸性環境，以增強其有效性。

篩選得到的純培養物置於超低溫冰箱或液氮罐中長期保藏，以保持其活性和穩定性。

2) 菌種的移植。在進行發酵劑的工廠化生產以前，先在實驗室和菌種車間進行菌種的活化和移植，並進行種子液的擴大培養。

3) 培養基的配製和滅菌。制備直投式酸奶發酵劑，首先要對乳酸菌進行高濃度培養。在選擇好基礎培養基(一般為脫脂奶粉培養基)後，要找到合適的增強因子對培養基進行強化，得到優化培養基，以使乳酸菌的繁殖量達到最大。

4) 接種培養。乳酸菌的高濃度培養方法有幾種：① 恆定pH值培養法：乳酸菌在發酵過程中，代謝產生的乳酸、醋酸等物質對其生長具有反饋抑製作用。發酵罐中培養液的pH值維持在5.8 - 6.0，以解除乳酸等物質對菌體生長的抑製作用，延長培養時間，制備出含活菌數高的發酵液。培養過程中，使用化學中和法或緩沖鹽法維持培養液pH值的穩定。② 膜滲析法：利用膜的選擇性將培養液與營養液進行成分交換，使培養液中的乳酸部分滲出，營養液中的成分滲入培養液中，以維持乳酸菌正常的生長繁殖。

5) 細胞濃縮。對數期後期至穩定期前期是乳酸菌細胞收獲的最佳時期，因為此時收獲的菌體細胞的存活率和抗凍、抗乾燥能力最強。這時就可以將乳酸菌培養液進行離心分離，收集菌體細胞，使菌液濃度得到濃縮。也可以選擇膜分離。濃縮倍數在20 - 50倍以上，操作過程應盡量柔和，盡量降低剪切力和空氣的影響。

6) 冷凍乾燥。將乳酸菌冷凍後，在減壓環境下利用升華現象除去水分。當菌體中的大部分水分被去除後，細胞的生理活動就會停止，從而達到了長期保藏的目的。冷凍過程中產生的冰晶體會損壞細胞膜，導致細胞大量死亡，所以在冷凍乾燥前需加抗冷凍保護劑，以減少細胞的損害程度。

7) 包裝。一般採用袋裝、無菌包裝，便於貯存、運輸

B. 如何對微生物菌種進行活化

有同學已經說的很專業了，我就給你說些簡單實用的。不知道你出於何種目的要進行活化。如果你是用凍存管保存的菌株進行活化，取出2顆小珠放在適宜的固體培養基上，合上蓋讓小珠在平皿上滾動，適宜條件培養就可以了。長出一個菌落，你再繁殖就可以了。如果你是凍乾粉的菌種，准備適宜的液體培養基，少少一點點粉末接種就可以了，根據此菌種一般液體培養所需時間，大概在36-48h，你還可以在觀察到液體渾濁、試管底部有沉澱時（沉澱者也可能為原本死亡的細菌），取100微升液體塗抹在固體培養基上。
一般的話，復甦的菌種需要重復幾次復壯。

C. 如何對微生物菌種進行活化

方法如下：

1 定期移植法的菌種復甦較簡單，直接轉接即可；

2 液體石蠟法保存的菌種在復甦時，挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養基上，生長繁殖後，再重新轉接一次；

3 沙土管法保存菌種在復甦時，在無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒於適宜的斜面培養基上，長出菌落後再轉接一次。或取沙土粒於適宜的液體培養基中，增殖培養後再轉接斜面；

4 真空冷凍乾燥法保存菌種在復甦時先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿管頂部燒熱， 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端，用無菌水或培養液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養基上，進行適溫培養；

5 -80℃ 冰箱凍結法保存菌種復甦時，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置38℃-40℃水浴中快速復甦並適當快速搖動。直到內部結冰全部溶解為止，約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養

6 液氮超低溫凍結法保存菌種復甦與-80℃ 冰箱凍結法保存菌種復甦相似，從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置在38℃-40℃水浴中快速復甦並適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養。

D. 凍乾粉怎麼做微生物檢測

得看是水針劑使用的還是口服的，或者外用的。
如果水針劑需要進行無菌檢查，把樣品溶解後過濾，然後加入液體培養基，如果長菌即是不合格。
口服的溶劑後加入固體TSA和SDA分別培養。33℃細菌25℃黴菌。控制菌做大腸桿菌和沙門。
如果外用，同微生物限度測試。

E. 買回的乳酸菌凍乾粉菌種如何活化想要用甘油繼代保存在-80度冰箱里，又該如何保存求詳細步驟！

菌種以脫脂乳試管保存時，活化方法可直接用滅菌蝸卷鉑耳環取之，轉接入新鮮滅菌脫脂乳試管中即可。
菌種以凍干方式保藏時，首先用酒精棉將菌種管玻璃表面擦拭消毒，而後於酒精火焰處打開管口（事先用玻璃刀或小砂片割出刻痕），以滅菌鉑耳環取之，轉移入滅菌脫脂乳試管中。
將上述接種完畢的脫脂乳試管置恆溫箱中，根據不同菌種的特性選擇培養溫度與時間。培養至凝固再移植到新的脫脂乳試管中，依此類推，傳代幾次至十幾次，直至活力恢復為止。傳代次數依菌種活力是否恢復而定，一般酸奶菌種43°C培養5-7hr或37oC過夜培養乳即凝固，表明其活力已恢復。注意每次活化之後均要塗片，Grams染色鏡檢，如菌種純一旦活力恢復，即可投產使用；若污染雜菌，則必須採用乳酸菌培養基（如乳清培養基、蕃茄汁培養基等）重新分離培養、純粹培養，鏡檢無雜菌才可使用。活化凍二菌種時，傳代用的脫脂乳可添加0.5％葡萄糖與0.5％酵母膏，以加快乳菌活化速度.

F. 怎樣復活安培管里休眠的菌種乾粉，具體操作，請知道的朋友幫忙啊！

一、安瓿瓶裝微生物菌種開封
1-1、用浸過70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿瓶。
1-2、用火焰將安瓿瓶口加熱滅菌。 1-3、用鑷子將鋁封口撕開。
二、菌株恢復培養
2-1、用無菌吸管，吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養基，滴入安瓿管內，輕輕振 盪，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。
2-2、取約0.2ml菌體懸浮液，移植於指定的瓊脂斜面培養基上，剩餘的菌液，注入指定的液體培養基內（3-4ml），然後在建議的溫度下培養。
三、注意事項
3-1、菌種活化前，請將安瓿瓶保存在5-10℃的環境下。
3-2、厭氧菌的培養，如無特別說明，自開封至接種完成，均需以無氧氣體充 填，以保持厭氧狀態。
3-3、某些菌種經過冷凍乾燥保存後，延遲期較長，需連續兩次繼代培養才能 正常生長。
四、製作ｅｍ菌液

4-1、菌種活化:用ｅｍ菌種10克、紅糖0.1公斤（紅糖先用熱水溶化），加入1公斤的水。註：（先把水加熱到100°c後加入紅塘或白糖，而後繼續加熱5分鍾。冷卻到40°c時加入ｅｍ菌種），密閉發酵(35°c-40°c溫度)下活化3天，打開容器口聞到有酸甜味即活化成功。可以作為液體菌種使用。
4-2、製作原液：將活化好的液體菌種加入二級發酵罐。菌種——二級發酵罐(密閉) (加水比例:按1:10的比例加入) 二級發酵液:（10%的無菌糖水！ 0.1%瓊脂粉！溫度35-40度！發酵5-7天！）成品發酵液標准（氣味：酸甜！ ph值：4.0-5.0！ 活菌含量：100億/ml ！）

G. 做微生物實驗的步驟

1、准備工作，培養基的配製及滅菌（121-126度滅30分鍾高壓蒸汽式滅菌），玻璃器皿的滅菌（170度滅2小時乾熱滅菌，也可用濕熱滅菌）若量大可加長滅菌時間。

H. 我要做抑菌實驗，拿到的是啤酒酵母粉，請問我該怎樣活化，然後怎樣接種，還有接種時使用培養基是什麼

稱取定量的酵母粉，如1g,溶於9ml生理鹽水中混勻。再取出1ml加入到另一9ml生理鹽水中，以此類推，直到第6或7管。取後面三管（5、5、7號管）的100到200μl塗PDA平板。市售的PDA培養基中有氯黴素，可抑制細菌生長。如果，能保證拿到酵母粉是純種，就可以直接用接種針，挑起一環粉末，PDA平板劃線。當然，你也可以接種到液體培養基，搖床活化。相較而言，固體接種活化利於觀察是否純種，對於好氣菌生長也快。另外，活化與接種有時是一回事。當為了恢復菌種活力而接種，就叫做活化。培養基有許多，也不一定要局限在PDA，可以根據實驗室實際條件，作出相應的調整。謝謝！