『壹』 基因文庫 從基因文庫中提取基因
有了基因文庫，獲取目的基因可以通過下面三種方法.1.可以通過鹼基序列人工合成,2.通過特定的限制性內切酶將目的基因剪切下來,3.可以用mRNA通過逆轉錄合成目的基因.
為了篩選真核生物的某種基因，常從它的轉錄產物mRNA經反向轉錄（見中心法則）合成相應的互補DNA(cDNA)，再加入用32P標記的核苷三磷酸，用DNA多聚酶切口移位方法製成有同位素標記的探針。把探針DNA和硝酸纖維濾膜上的菌落或噬菌體分別進行變性處理，然後進行分子雜交。再將X光底片覆蓋在經過處理的濾膜上以進行放射自顯影。在培養皿上找出和X光底片上的黑點相對應的菌落或噬菌斑。這些菌落或噬菌體中便包含著所需要的基因，經過擴增便能得到大量的細菌或噬菌體，從中可以分離出所需基因的DNA片段。
在構建受體細胞載體時需要用到限制酶，在從基因文庫中提取時，需要特定限制酶
『貳』 如何提取目的基因
1.從基因文庫中獲取目的基因（俗稱：鳥槍法）：將含有某種生物的許多dna片段，導入受體菌
的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物不同的基因，稱為基因文庫。
當需要某一片段時，根據目的基因的有關信息，如根據基因的核苷酸序列、基因的功能、基因
在染色體上的位置、基因的轉錄產物mrna，以及基因的表達產物蛋白質等特性來獲取目的基
因。
2.化學合成法。已知目的基因的核苷酸序列，可用dna合成儀直接合成。
3.用pcr技術擴增技術提取。已知目的基因引物的序列，將整個dna放入合成儀，因為只有當
引物與模板結合後dna熱聚合酶才能行使聚合功能，所以只有引物中間的目的基因被大量擴增，
即被提取出來。
『叄』 怎麼提取虛擬生物的基因
想要提取虛擬生物的基因，這應該是很難達到的，或者是通過專業的器材才能夠獲得所以一般人是不能做到的
『肆』 微生物基因組提取的方法有哪幾種
常見的RNA提取方法有苯酚法、陰離子去污劑法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、異硫氫酸胍法、CTAB法、熱硼酸法及改良熱硼酸法、TRIZOL試劑快速提取法。
RNA提取時，就變性劑的選擇來說，CTAB（CTAB法）比異硫氰酸胍（RIZOL試劑法）和SDS（改良熱硼酸法）更有效；就CTAB法來說，由於以CTAB為變性劑，同時加入PVP和β一巰基乙醇共同作用變性蛋白、抑制RNase的活性，使用無水乙醇或異丙醇沉澱雜蛋白和總核酸等，然後再選擇性地分離出RNA。
『伍』 獲取目的基因的方法有哪些（詳細）
..剛好學到 基因工程流程的第一步就是獲得目的DNA片段,如何獲得目的DNA片段就成為基因工程的關鍵問題。所需目的基因的來源,不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有PCR法、化學合成法、cDNA法及建立基因文庫的方法來篩選 直接獲取 1.從基因文庫中獲取 這個沒什麼就是現成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了（基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構建基因組文庫的一般操作程序如下：① 選用特定限制性內切酶， DNA進行部分酶解，得到DNA限制性片段② 選用適當的限制性內切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經適當處理，將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個DNA的重組DNA群體，即文庫。）經典解釋 2.cDNA文庫法（即原教材中提到的逆轉錄法）。cDNA文庫，是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因，但是由於高等真核生物基因組DNA文庫比其cDNA文庫大得多，相關工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉錄本中去除間隔序列，即不能表達真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列（已在拼接過程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA為模板，逆轉錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達。因此，在基因工程中，cDNA文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。 3.直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，又叫「散彈射擊法」。這種方法有如用獵槍發射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標，都能把鳥打下來。鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內切酶）將供體細胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞，讓供體細胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細胞中大量復制（在遺傳學中叫做擴增），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。 用「鳥槍法」獲取目的基因的優點是操作簡便，缺點是工作量大，具有一定的盲目性。 人工合成 1.(主要是序列已知的基因)。主要是通過DNA自動合成儀，通過固相亞磷酸醯胺法合成，具體過程可以網上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連接上去成為核苷酸序列，一般適於分子較小而不易獲得的基因。對於大的基因一般是先用化學合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。 2.聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一DNA片段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研 究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時便可完成。PCR技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑 他只是給目的基因的擴增 好累~....
『陸』 DNA怎麼提取
就那植物來說吧！原理是一致的。方法不同。
1植物組織提取基因組DNA
一、材料
幼嫩葉子。
二、設備
移液器，冷凍高速離心機，台式高速離心機，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。
三、試劑
1、提取緩沖液Ⅰ：100mmol/L
Tris·Cl,
pH8.0,
20mmol/L
EDTA,
500mmol/L
NaCl,
1.5%
SDS。
2、提取緩沖液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸鈉，6.0gPVP，240ul巰基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、
RnaseA母液
5、其它試劑：液氮、異丙醇、TE緩沖液，無水乙醇、70%乙醇、3mol/L
NaAc。
四、操作步驟：
1.
在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液Ⅰ,
60℃水浴預熱。
2.
幼苗或葉子5-10g,
剪碎,
在研缽中加液氮磨成粉狀後立即倒入預熱的離心管中,
劇烈搖動混勻,
60℃水浴保溫30-60分鍾(時間長,DNA產量高),
不時搖動。
3.
加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液,
顛倒混勻(需帶手套,
防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鍾,
使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。
4.
室溫下5000rpm離心5分鍾。
5.
仔細移取上清液至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫放置片刻即出現絮狀DNA沉澱。
6.
在1.5ml
eppendorf中加入1ml
TE。用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團,在干凈吸水紙上吸干,轉入含TE的離心管中,DNA很快溶解於TE。
7.
如DNA不形成絮狀沉澱,則可用5000rpm離心5分鍾,
再將沉澱移入TE管中。這樣收集的沉澱,往往難溶解於TE,可在60℃水浴放置15分鍾以上，以幫助溶解。
8.
將DNA溶液3000rpm離心5分鍾,
上清液倒入干凈的5ml離心管。
9.
加入5μl
RNaseA(10μg/μl),
37℃
10分鍾,
除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。
10.
加入1/10體積的3mol/L
NaAc及2×體積的冰乙醇,混勻,-20℃放置20分鍾左右,DNA形成絮狀沉澱。
11.
用玻棒撈出DNA沉澱,70%乙醇漂洗,再在干凈吸水紙上吸干。
12.
將DNA重溶解於1ml
TE,
-20貯存。
13.
取2μl
DNA樣品在0.7%
Agarose膠上電泳,
檢測DNA的分子大小。同時取15μl稀釋20倍,
測定OD260/OD280,
檢測DNA含量及質量。
[注意]
5g樣品可保證獲得500μg
DNA,
足供RFLP、PCR等分析之用。
『柒』 從生物體克隆目的基因的方法有哪些
1.PCR擴增克隆法
PCR擴增克隆法是在已知植物基因序列的基礎上，進行基因序列克隆的一種方法。先從基因文庫（genebank）中找到有關基因序列，據此合成一對寡聚核苷酸引物，從植物中提取染色體DNA或RNA，進行PCR擴增。擴增的片段純化後插入合適的質粒載體上，用酶切分析和序列分析檢測重組子，並與已知基因序列比較，以獲得目的基因。
2.功能克隆法
功能克隆（functionalcloning）是根據性狀的基本生化特徵，在鑒定已知基因功能後進行克隆。該法在純化相應的編碼蛋白質後，構建cDNA文庫或基因組文庫。然後從文庫中用下述兩種方法進行基因篩選，其一是將純化的蛋白質進行氨基酸測序，據此合成寡核苷酸探針，從cDNA文庫或基因組文庫中篩選編碼基因；其二是將編碼蛋白質製成相應抗體探針，從cDNA載體表達文庫中篩選相應克隆。實行功能克隆的關鍵步驟是分離出高純度蛋白質。對於產物不明的基因，不能利用這一方法進行克隆。
3.定位（圖位）克隆法
定位（圖位）克隆法（positionalcloning）根據目的基因在染色體上的位置，進而通過染色體步移（chromosomewalking）進行克隆。需預先建立具有目的基因的適宜遺傳分離群體（近等基因系或分離群體），將目的基因精確定位在染色體特定的位置之後，用目的基因兩側緊密連鎖的分子標記（RFLP標記）為探針，篩選基因組文庫，得到陽性克隆，然後以陽性克隆的末端作為探針，獲得含有目標基因的大片段克隆，然後以這些新的DNA為探針，獲得更趨近目的基因的DNA片段，不斷縮小篩選區域，逐步向目的基因靠近，最終克隆到該基因。
4.轉座子標記法
轉座子（transposon）是可從一個基因位置轉移到另一位置的DNA片段，而原來位置的DNA片段（轉座子）並未消失，發生轉移的只是轉座子的拷貝。基因轉座可引起插入突變，使插入位置的基因失活，並誘導產生突變型。通過標記基因就可以檢測出突變基因的位置，進而克隆該突變基因。這樣將轉座子作為基因定位的標記，並通過轉座子在染色體上的插入和嵌合來克隆基因稱為轉座子標記法（transposontagging）。para>5.減法雜交法
該法根據植物表現型差異或基因在不同組織或器官的表達差異來克隆植物基因。特異性表達的基因，其mRNA表現不同。分別從表達特異性基因的植物組織和無特異性基因的組織中提取mRNA，反轉錄為cDNA，兩者雜交。在兩種組織中都表達的基因產物形成雜交分子，而特異mRNA轉錄的cDNA仍保持單鏈狀態，將這種單鏈cDNA分離出來即為差異表達的基因，這一策略被稱作減法雜。
6.mRNA差異顯示法
該法可有效鑒別並克隆差異表達的基因。提取不同的mRNA後可用共同的引物反轉錄成cDNA，進行PCR擴增，獲得差異表達的cDNA序列，作為探針，在cDNA文庫或基因組文庫中篩選基因，並作功能分析。該法可直觀篩選差異表達的基因，比減法雜交操作方便、迅速，需要總RNA量少，效率高，短期內可完成cDNA的擴增、鑒定和克隆。