A. 基因文庫 從基因文庫中提取基因
有了基因文庫,獲取目的基因可以通過下面三種方法.1.可以通過鹼基序列人工合成,2.通過特定的限制性內切酶將目的基因剪切下來,3.可以用mRNA通過逆轉錄合成目的基因.
為了篩選真核生物的某種基因,常從它的轉錄產物mRNA經反向轉錄(見中心法則)合成相應的互補DNA(cDNA),再加入用32P標記的核苷三磷酸,用DNA多聚酶切口移位方法製成有同位素標記的探針。把探針DNA和硝酸纖維濾膜上的菌落或噬菌體分別進行變性處理,然後進行分子雜交。再將X光底片覆蓋在經過處理的濾膜上以進行放射自顯影。在培養皿上找出和X光底片上的黑點相對應的菌落或噬菌斑。這些菌落或噬菌體中便包含著所需要的基因,經過擴增便能得到大量的細菌或噬菌體,從中可以分離出所需基因的DNA片段。
在構建受體細胞載體時需要用到限制酶,在從基因文庫中提取時,需要特定限制酶