怎麼鑒定細胞污染的微生物

㈠ 細胞培養中如何識別細胞污染

細胞培養中細胞發生污染就是一個災難，既耽誤時間又傷神，熟練的無菌操作能避免許多問題，但早期檢測污染也是一種可以預警的方法。對於培養箱中的每瓶細胞都要注意觀察，要養成習慣，每次打開培養箱時，迅速看看有沒有發生污染。

細菌、酵母、真菌、黴菌、支原體以及其他的培養細胞都可能引起污染。

一、肉眼觀察

肉眼觀察，把培養瓶或培養皿拿起來，對著光線檢查。

渾濁情況。 即使細胞密度很高，培養基也應該是透明的。輕輕移動或晃動培養瓶，觀察培養基的渾濁或懸浮情況，一些黴菌可能會在培養基的表面形成菌落。

培養基顏色的變化。 酸性條件下，加了酚紅的培養基會由紅變黃，而鹼性條件下會變成紅紫色。細菌污染常常會使培養基變成黃色，真菌污染會使培養基變成深紫紅色。

聞！ 當然不能打開瓶子去聞，把鼻子貼在瓶口聞，許多污染發生以後都會散發出易察覺的、特殊的氣味，甚至一打開培養箱門就聞到了。

二、顯微觀察

顯微觀察。在倒置顯微鏡下，先用低倍(10X) 再用高倍(40X) 物鏡（總放大倍數為400) 觀察細胞培養皿或培養瓶中的細胞。

其他有機體。 在低倍鏡下，真菌的菌絲體成長棒狀，並橫穿整個視野，還可以觀察到酵母，有時呈小圓球形，有時還有芽。在高倍鏡下可以觀察到細菌，它們可能是棒狀或球狀，單獨成鏈或成團存在，它們也可能和細胞混在一起，並且明顯處於細胞內部，有些細胞可能已經裂解變得模糊。觀察時可能每兩個視野才出現一個污染（當然也算被污染了！），而且可能污染物是可以運動的。

損傷細胞。 感染會殺死細胞，可能導致每個細胞都裂解和／或細胞層從附著物上完全剝離，更可能的是細胞變得不規則（或大或小），在低倍鏡下是黑色的粒狀。

懸浮培養細胞比貼壁培養細胞更加難以顯微觀察，尤其是高倍顯微鏡下。

將培養瓶或培養皿放在顯微鏡的載物台上，靜置一會。

將焦距對准器皿的底部，觀察那些輕微附著的細胞，因為它們可能已經接觸到了微生物。

對准整個培養瓶焦距，當發現細胞的時候，用細聚焦調節旋鈕調節，仔細檢查周圍的培養基有沒有污染發生。

三、交叉污染

細胞還可能被別的細胞污染，這種交叉污染可能更廣泛，許多實驗人員在不經意之間培養、使用和凍存了其他的細胞。

如何避免交叉污染：

只從有保障的地方得到細胞，或者自已檢查細胞。

不要同時操作多株細胞。不要把多種培養瓶同時放在超凈台內。

不要使用同一個移液管操作多種細胞。

不同細胞株不要使用同一瓶培養基或胰蛋白酶。

操作後不要把移液管放回培養基的瓶中。

培養維護時，使用栓塞式移液管。

四、支原體污染

支原體污染 是一種很難發現卻經常存在的問題。

支原體是最小的（0.3 μm）能夠自我復制的有機體，倒置顯微鏡下通常觀察不到。

支原體沒有細胞壁，對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的，可能直到出現了可以觀察到的病變或發現細胞正常功能喪失的時候，才意識到是發生了支原體感染。

在沒有採用特殊的染色方法，也沒有觀察到病變的情況下，實驗總是不成功，就應懷疑被支原體污染。預防支原體污染的惟-途徑是經常對細胞進行篩選。

支原體個體很小，需要使用透射電鏡才能清晰看到其結構及分布。

注意：如果你發現了支原體污染

最好的方法是立即把細胞丟棄，從新復甦。

可以不理會它。

可以採取某些挽救措施，但是會很困難，只適用於那些不可代替的細胞。最簡單的方法是訂購 支原體清除試劑盒 。

如果你不能確定是否發生了污染

製作濕塗片或染色片。取1 ml 培養基離心，用50 μl 培養基或緩沖液重新懸浮細胞，滴一滴到載玻片，蓋上蓋玻片製成濕塗片；或塗片、固定並染色（甲基蘭或革蘭氏染液），在高倍鏡下觀察。

將細胞在營養培養基或瓊脂培養基上劃線， 37℃培養3 天。如果有菌落，那麼細胞被污染了。

取1 ml 的細胞培養液至無菌的微量離心管中， 37℃培養3 天。觀察到渾濁物，做濕塗片顯微鏡觀察。

㈡ 微生物檢測或鑒定技術或方法有哪些

微生物檢測或鑒定技術或方法有哪些
通過顯微鏡直接觀察。一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。這些特徵包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。（見高中生物選系1《生物技術實踐》圖2-8）因此可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。
使用選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件。選擇培養基，顧名思義其作用是允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長。例如，使用以尿素作為唯一氮源的培養基能夠培養出可合成脲酶的微生物；在培養基中PH調至酸性有利於黴菌的生長繁殖（抑制細菌的生命活動）等。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷，得到的微生物往往並不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。
使用鑒別培養基。即根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。例如，水質檢驗中大腸桿菌的檢驗（大腸桿菌的存在數量用以衡量水被糞便污染的程度）就用到了伊紅—美藍試劑，該試劑與水或乳製品中的大腸桿菌反應出現深紫色且帶有金屬光澤，屬於大腸桿菌的特徵反應。與選擇培養相比，鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小，一般可直接測定某微生物的種類。

㈢ 傳統鑒定方法如何將環境中的微生物鑒定到屬

簡單的分為3步
1）觀察菌落形態
2）菌體形態
3）生理生化反應

㈣ 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

1、快速測試片技術法

快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。

細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。

2、生物電化學方法

生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷，從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中，培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化，所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。

常見的有：阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。

3、微菌落技術

微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點，其研究始於 20 世紀50年代，定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始，國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。

4、氣相色譜法

氣相色譜應用到微生物的檢測中，主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異，利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

5、高效液相色譜法

利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。