微生物檢驗方法怎麼做方法驗證

1. 白假絲酵母菌的微生物學檢驗方法有哪些

(1)直接檢查：①直接顯微鏡檢查：取標本直接塗片，革蘭氏染色後鏡檢，見到革蘭陽性(著色不均勻)、圓形或卵圓形菌體或孢子及假菌絲，可確認為假絲酵母菌感染。②抗原檢測：取病人血清作ELISA、免疫印跡法等檢測自假絲酵母菌抗原。③核酸檢測：用PCR法將白假絲酵母菌DNA分子擴增後以分子探針檢測，具有較好的敏感性和特異性。
(2)分離培養與鑒定：將標本接種在沙保弱培養基上，25℃或37℃培養1～4d後，培養基表面可出現奶油色類酵母型菌落。鏡檢可見假菌絲和芽生孢子。
(3)其他方法：①芽管形成試驗：將待測菌株接種於0.2～0.5ml人或動物血清中，37℃孵育1.5～4小時，顯微鏡下觀察有芽管形成。白假絲酵母菌可形成芽管，但並非所有的白假絲酵母菌都形成芽管，其他假絲酵母菌一般不形成芽管。②厚膜孢子形成試驗：將假絲酵母菌接種於玉米粉培養基25℃孵育1～2d後，僅白假絲酵母菌在菌絲頂端、側緣或中間形成厚膜孢子。③糖同化或發酵試驗：不同的假絲酵母菌對糖類的發酵和同化能力是不同的。常用葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖進行發酵試驗，用葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、半乳糖進行同化試驗。④現在臨床用商品化的產色培養基可快速鑒定白假絲酵母菌和其他假絲酵母菌。⑤動物試驗：將假絲酵母菌懸液注射1ml於家兔耳靜脈或注射0.2ml於小白鼠尾靜脈，觀察5～7d，注意動物是否死亡。剖檢時如發現臟器有多種小膿腫，即為白假絲酵母菌感染，其他假絲酵母菌對動物無致病性。

2. 假定有一個保健品要投入市場該怎麼鑒定用微生物的方法

1、應分別採用培養基稀釋法和薄膜過濾法進行方法學驗證。
2、分別對菌落總數、大腸桿菌、黴菌和酵母菌、及金黃色葡萄球菌、枯草桿菌等致病檢驗。

3. 微生物計數方法驗證需要怎麼准備

微生物限度檢查方法學驗證

1、供試品：XXXXX膠囊（批號：XXXXXX）

2、菌種：

菌落計數用菌種：

(1) 枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]

(2) 金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]

(3) 大腸埃希菌[CMCC（B）4]

(4) 白色念珠菌[CMCC (F) 98001]

控制菌檢查用菌種：

(1) 大腸埃希菌[CMCC（B）4]

(2) 金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]

3、培養基：營養肉湯培養基、改良馬丁培養基、營養瓊脂培養基、玫瑰紅鈉瓊脂培養基、膽鹽乳糖培養基、4-甲基傘形酮葡糖苷培養基（MUG）。

4、預試驗 按照中國葯典2005年版微生物限度檢查法中常規法及培養基稀釋法檢驗，金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的回收率均小於70%，本品有抑菌作用。

5、細菌、黴菌及酵母菌計數

按照中國葯典2005年版微生物限度檢查法進行細菌、黴菌及酵母菌計數的方法學驗證試驗及菌落計數。

5.1菌液制備：

(1) 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至10ml營養肉湯中，35～37℃培養18～24小時，取此培養液1ml加0.9％無菌氯化鈉溶液9ml，採用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5～10-7，使菌數約為50～100cfu/ml。

(2) 接種白色念珠菌的新鮮培養物至10ml改良馬丁培養基中，23～28℃培養24～48小時，取此培養液1ml加0.9％無菌氯化鈉溶液9ml，採用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5～10-7，使菌數約為50～100cfu/ml。

5.2 供試液的制備 取供試品10g，pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至100ml，振搖，使呈1：10的供試品儲備液。取1：10的供試品儲備液 10ml

4. 法莫替丁微生物限度檢查方法學驗證

2015版葯典微生物學擬收載情況

檢查法

①無菌檢查法

②非無菌葯品微生物計數法

③非無菌葯品控制菌檢查法

④抑菌劑效力檢查法

⑤滅菌法

⑥生物指示劑抗性檢查法

⑦中葯飲片的微生物限度檢查法

標准

非無菌葯品微生物限度標准

指導原則

非無菌葯品微生物限度檢查指導原則

制劑通則中

制劑通則中有關制劑項下的無菌和微生物限度檢查要求的修訂

制劑通則中有關制劑項下的[無菌]和[微生物限度]檢查要求的修訂

(1)為保證用葯安全，眼用液體、半固體制劑仍應符合無菌檢查法的規定

(2)為保證用葯安全，對用於手術、創傷、燒傷的外用制劑如鼻用制劑、軟膏劑、乳膏劑、噴霧劑、氣霧劑、凝膠劑、散劑、塗劑、滴耳劑等仍應符合無菌檢查的規定。但在其通則無菌檢查項下增加：「除另有規定外」。給予有不按無菌檢查的原因

(3)在搽劑和酊劑通則項下的微生物限度檢查項下增加：「除另有規定外」 。給予有可能需要按無菌檢查的原因

品種正文中的無菌或微生物限度檢查及其標准要求

1、受熱不穩定、制劑不能進行最終滅菌的無菌工藝產品如：抗生素原料葯、抗生素粉針劑正文中無菌檢查的規定

2、經驗證後各論化品種檢查項下的：無菌…..或微生物限度……(有具體檢查的規定)

3、葯用敷料的無菌或微生物限度要求及標准

4、純化水、注射用水的微生物限度要求及標准

2015年版葯典的純化水、注射用水[微生物限度]價差方法在參考歐、美葯典只要用水微生物檢查要求的基礎上，由浙江所立課題考察、比對，在所用培養基和方法上將有較大的修訂與USP35版、EP7.0版、JP16版比較，2015年版中國葯典微生物學檢驗體系規劃收載的項目和內容已基本趨向一致，將使我國葯典的微生物學檢驗成為一個比較完備的標准體系，其意義在於：

1）全面與國際葯典標准接軌；

2）從對終產品的檢驗向過程式控制制轉變。

2015年版微生物學檢驗中的重大修訂及意義

1、實驗環境的重大修訂

①無菌檢查環境潔凈度規定

②微生物限度檢查環境潔凈度規定

2、培養系統的重大修訂

①無菌檢查中培養基的修訂

②微生物計數法中培養基的修訂

③控制菌檢查法中培養基的修訂

④控制菌檢查法中培養基的修訂

⑤抑菌效力測定法中培養基的修訂

3、對一、二、三部微生物學附錄的整合、修訂

與USP35版、EP7.0版、JP16版比較，2015年版中國葯典微生物學檢驗體系規劃收載的項目和內容已基本趨向一致，將使我國葯典的微生物學檢驗成為一個比較完備的標准體系，其意義在於：

1）全面與國際葯典標准接軌；

2）從對終產品的檢驗向過程式控制制轉變。

培養基系統的重大修訂

修訂依據：

通過科研課題的建立及大量實驗，以國際品牌培養基為對照，考察了中國葯典微生物限度檢查法、無菌檢查法中所用國產培養基與USP/BP/JP中所規定的培養基的粗軍生長能力比較，得出大量的實驗數據，並經過可靠的統計分析名為整體微生物檢驗培養基的修訂提供了有利的技術支持。

修訂意義：

(1)糾正了我國在微生物檢驗系統中長期存在的對微生物分了培養的概念，提高污染微生物的檢查可能。

（2）與先進國家葯典所用培養基一致，為實現結果夫人打下重要基礎。

對一、二、三部微生物學附錄的整合、修訂

需進行整合、修訂的微生物學檢驗記錄：

①無菌檢查法

②微生物檢查法

③指導原則

微生物限度檢查法應用指導原則

葯品微生物實驗室規范指導原則

中國葯典2015年版微生物限度檢查法增、修訂

1、微生物限度檢查法收載形式的增、修訂

2、實驗環境的增、修訂

3、微生物計數法中的增、修訂

4、控制菌檢查法中的增、修訂

5、非無菌葯品微生物限度標準的整合、修訂

《中國葯典》2015年版微生物限度檢查法修訂後將分為三個附錄：

1、非無菌葯品微生物限度檢查：微生物計數法

5. 測定樣本中微生物的方法有哪些

1、PCR-DGGE法，此法被廣泛應用於污水、污泥中的菌群的分析。對一些實驗室內不可培養性微生物也能檢測分析出。
2、用選擇培養基進行分離、測定，但有實驗表明，這種方法不能完全反應出樣本中的微生物的種類。

6. 微生物的傳統檢測方法有哪些

微生物的傳統檢測方法有哪些通過顯微鏡直接觀察。一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。這些特徵包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。因此可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。使用選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件。

7. 食品微生物檢驗內容與檢測技術方法

食品微生物檢驗內容與檢測技術方法

近年來，世界各地出現了諸多嚴重的食品安全事故，由於食品微生物污染而造成的質量事故嚴重威脅著人們的身體健康，如何做好食品微生物檢驗，確保食品質量安全，就需要社會各界共同努力。根據國際和國內衛生組織的相關規定和要求，所有的食品生產廠商都要對食品的質量進行嚴格的檢驗，對於生產出來食品的菌落種類、細菌數量、大腸菌群、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等進行檢測，必須達到要求的合格標准才能進入市場進行出售。下面是我為大家帶來的食品微生物檢驗內容與檢測技術方法的知識，歡迎閱讀。

需要注意的問題

一是工作人員及活動規定。必須保證參加檢測的人員具有相應的資格，並通過相關的考試後，持證上崗才能開展相關活動。同時要求工作人員不僅需要具有高超的專業技術，還應該有良好的職業道德修養，盡可能降低人為問題的制約。檢測過程需要按照相關的活動規范和流程進行，使用無菌設備認真地進行抽樣活動，採用先進技術獲取相關信息。二是存放裝置。若想檢測過程順利進行，除了確保實驗室有必要的設施外，還應該重點考慮裝置存放的條件和要求。三是裝置和葯品的配置。在各項裝置進行安裝時應該對氣溫進行調節，確保其安穩，對裝置氣溫穩定性合乎規定要用的具體時間詳細記錄。同時在規定的時間內對各種裝置進行消毒處理，並通過感應設備對其運作狀態進行監測。對於葯品的配置，培養基往往在121℃下採用高壓濕熱滅菌法滅菌15分鍾;較為敏感的'培養基一般採用膜過濾法。四是樣本的處理。在樣本收集過程中，需要確保抽樣活動是在無菌環境下展開的，有效避免了樣本被污染。在樣本輸送時，應該防止樣本受到光線的影響而出現污染現象，抽樣之後就應該及時將其送至測試場地。一般樣本輸送時間要控制在3h內，如果無法及時送到，要確保在近乎之前的氣溫時將其完整的存放。

食品微生物檢驗內容

一是檢驗食品污染程度指示菌。細菌總數即菌落總數，是食品和生活飲用水檢樣處理後，在特定培養條件下，所得1g或者1mc檢樣中所含有的細菌菌落個數，這就是判斷食品和生活飲用水污染程度的關鍵指標。大腸菌群系是在37℃下培養24h的一群發酵乳糖、產氣、產配以及需氧或者厭氧的革蘭氏染色陰性無芽胞桿菌。這種菌群主要來源於人和牲畜的糞便，因此，可以用糞便的污染指標菌對食品的衛生質量進行評價。二是檢測食品中治病菌。在食品微生物相關檢驗標准中已經明確規定某些微生物的數量，因此在對食品污染程度指示菌檢測的同時，還應該對一些治病菌進行測定，如沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等。

食品微生物檢測技術方法

很長時間以來，開展的此項檢測活動，是按照瓊脂平板的措施來進行的，通常要兩到三天的時間才可以完成。最近，許多的專家和組織都不斷地對工藝以及措施進行深化分析，獲取了非常高的成就，對許多措施進行了改進，切實提升了檢測的精準性以及安穩性特徵，而且獲取了許多全新的工藝，具體有如下的措施：

1.採用電阻抗法。具體的講，它是指細菌繁衍的時候，將會使培養基中的火分電惰性物質如碳水化合物、蛋白質和脂類等，代謝為具有電活性的小分子物質，其能增加培養基的導電性，進而導致阻抗出現改變，因此，可以通過檢測培養基的電阻抗變化情況來判定細菌在培養基中的生長繁殖特性，即可檢測出相應的細菌。

2.採用快速酶觸反應及代謝產物的檢測。細菌在生長繁殖過程中可合成和釋放某些特異性的酶，所以根據其特性來選用相對應的底物和指示劑，而且合理的記載信息。

3.採用分子生物學技術。它涵蓋兩項內容：1)核酸探針技術。結合鹼基互補相關的概念，使用獨特的措施來對物體進行標注。2)聚合酶鏈式反應(PCR)技術。其原理為通過加熱使雙鏈DNA經裂解成兩條單鏈，成為引物和DNA聚合酶的模板;接下來把氣溫變低，使寡聚核苷酸引物與DNA分子上的互補序列退火。通常狀態中，當退火的氣溫非常高的話，它的擴增特性就十分的優秀。

4.採用免疫學方法檢測細菌抗原和抗體的技術。具體有三項措施：1)熒光抗體檢測技術(IFA)，它又有兩種，分別是直接的以及間接地。其中第一種是直接在樣本上滴加已知特異性熒游標記的抗血清，然後對其清洗，進而獲取信息。而後一種措施是在檢樣上滴加已知細菌特異性抗血清，等到發生反映之後再仔細地清洗，再加入熒游標記的抗體後在熒光顯微鏡下觀察結果。2)免疫酶技術(EIA)，其是將抗原、抗體特異性反應和酶的高效催化作用原理結合，此法非常的獨特，而且功效非常好。通過共價結合將酶與抗原或抗體結合，形成酶標抗原或抗體，或通過免疫方法使酶與抗酶抗體結合，形成酶抗體復合物。3)免疫磁珠分離法(IMS)，即應用抗體包被的免疫磁珠，用一個磁場裝置收集鐵珠。

5.採用儀器法。1)微型全自動熒光酶標分析儀(Mini-VIDAS)，其主要採用具有優異的敏感性和特異性的酶聯熒光技術(ELFA)，得到的熒光和抗原的比例是一種順向的關系。2)全自動微生物分析系統(Vietk-AMS)。它能夠一次對非常多的樣本開展分析，而且檢測的時間不需要非常久，通常在兩到三個小時即可，此法的效率非常好，同時也將成為檢測行業全行的發展趨勢。

8. 食品微生物的檢測方法有哪些

目前主要有普通培養法（簡稱國標方法）一般出報告的要用，儀器法、核酸檢測法（PCR）、還有目前的快速檢測法（主要包括：免疫磁珠、酶聯免疫試劑盒、金標檢測卡等。這個根據自己的需求來選擇吧。

9. 膏劑微生物檢測方法

膏劑微生物檢測方法
答案如下：膏劑微生物檢測方法：取供試品，去掉防粘層，將粘貼面朝上放置在無菌玻璃或塑料器皿上，在粘貼面上覆蓋一層適宜的無菌多孔材料

10. 純化水的微生物驗證大家是怎麼做的

首先：只做菌落總數和總大腸菌群兩項。
其次：當總大腸菌群產酸產氣時，根據需要做耐熱大腸菌群，和大腸埃希氏菌檢測。
在做大腸檢測時，有多管發酵法、濾膜法、酶底物法三種方法，可根據實驗室實際情況選擇具體方法。
標准參照「GB/T 5750.12-2006 生活飲用水標准檢驗方法 微生物指標」
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