贏潤生物科技有限公司怎麼樣

Ⅰ RT -PCR的操作步驟

1. 總RNA的提取：見相關內容。
2. cDNA第一鏈的合成：目前試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。現以長沙贏潤生物技術有限公司提供的操作手冊為例：
（1）在0.5ml微量離心管中，加入總RNA 1-5μg，補充適量的DEPC H2O使總體積達11μl。在管中加10μM Oligo（dT）12-18 1μl，輕輕混勻、離心。
（2）70℃加熱10min，立即將微量離心管插入冰浴中至少1min。
然後加入下列試劑的混合物：
10×PCR buffer 2μl
25mM MgCl2 2μl
10mM dNTPmix 1μl
0.1M DTT 2μl
輕輕混勻，離心。42℃孵育2-5min。
（3）加入SuperscriptⅡ1μl ，在42℃水浴中孵育50min。
（4）於70℃加熱15min以終止反應。
（5）將管插入冰中，加入RNase H 1μl ，37℃孵育20min，降解殘留的RNA。-20℃保存備用。
3．PCR：
（1）取0.5ml PCR管，依次加入下列試劑：
第一鏈cDNA 2μl
上游引物（10pM） 2μl
下游引物（10pM） 2μl
dNTP(2mM) 4μl
10×PCR buffer 5μl
Taq 酶（2u/μl） 1μl
（2） 加入適量的ddH2O，使總體積達50μl。輕輕混勻，離心。
（3） 設定PCR程序。在適當的溫度參數下擴增28-32個循環。為了保證實驗結果的可靠與准確，可在PCR擴增目的基因時，加入一對內參（如G3PD）的特異性引物，同時擴增內參DNA，作為對照。
（4） 電泳鑒定：行瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察結果。
（5） 密度掃描、結果分析：採用凝膠圖像分析系統，對電泳條帶進行密度掃描。

Ⅱ 我們院里要進質粒提取試劑盒求助

常規的使用小提試劑盒提取得到的質粒，並不適合用來轉染細胞，其原因在於：

1.小提質粒濃度較低，一般僅為0.1~0.2ug/ul。而用質粒轉染細胞，一般至少需要2~5ug左右，如果使用小提質粒，只能加大上樣量，這樣對轉染操作會有一定影響。
2.小提質粒純度不夠，且內毒素含量較高，會對目的細胞有一定毒性，影響轉染效率。
基於以上原因，如果提取的質粒在用質粒轉染目的細胞時，可以選擇長沙贏潤生物技術有限公司的質粒大量提取試劑盒。