1. 求助生物素標記的EMSA相關問題
EMSA結合反應：(1) 如下設置EMSA結合反應陰性對照反應：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift結合緩沖液(5X) 2微升細胞核蛋白或純化的轉錄因子 0微升標記好的探針 1微升總體積 10微升樣品反應：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift結合...
2. 請教：生物素標記蛋白
d take this beautiful moment.
3. gbs生物活化素
生物素的活化與活化生物素的標記2007-01-12 03:33 1． 生物素的活化
生物素預先活化後，通過噻吩環的戊酸側鏈上羧基與抗體、酶等生物大分子以醯胺鍵偶聯。活化生物素的制備是獲得高敏感度BAS制劑的關鍵環節。常用方法有以下幾種：
1） 生物素N—羥基丁二醯亞胺酯（biotinyl-N-hydroxy-succinnimide，BNHS）的制備：
取生物素1g混懸於12 ml，N,N-二甲基甲醯胺(DMF)，加人0．6g N-羥基丁二醯亞胺(HOSU)和0. 8 g二環己基碳二亞胺(DCC)，置於密閉容器內，室溫下磁力攪拌作用過夜。過濾，濾液經旋轉蒸干。加10mL乙醚洗滌，繼加200 ml異丙醇使其重結晶，獲得白色粉末狀晶體。
BNHS酯鍵中的-C=0基團可與蛋白質分子中賴氨酸的氨基結合，使生物素標記在蛋白分子上，含賴氨酸殘基越多，或蛋白質的等電點在pI 6.0以上，其標記效果越好。因此，BNHS適用於標記抗體及中性和偏鹼性的抗原。
2）長臂活化生物素(N-hydroxy-succinimido-6-biotinyl amido hexanoate，BCNHS)的制備
生物素的分子量僅為244.31，當與抗體或酶結合後應用於免疫試驗時，極易受到大分子蛋白空間位阻效應(steric hindrance)的影響。使用長臂生物素可以減少位阻效應，提高試驗的靈敏度。長臂生物素是在生物素和N-羥基丁二醯亞胺之間添加2分子6－氨基己糖，猶如給生物素分子增添一隻手臂，使其不受位阻效應影響，更易與抗體、酶等生物大分子結合而發揮作用、BCNHS的制備過程分為兩步：先製成長臂生物素，然後再使其活化。
長臂生物素的制備：稱取BNHS 3 41 mg ,6-氨基己糖鹽酸鹽200mg，溶解於5mLDMF，再加入0.152 mL三乙胺(TEA)，室溫攪拌下作用20h。蒸發去除DMF，加l mmol/L NaOH 3mL，繼加甲醇至溶液變清，攪拌2h。蒸發去甲醇，加10mL蒸餾水，攪拌下滴加濃鹽酸酸化至剛果紅指示劑恰好變色。室溫靜置2h後，移放冰箱過夜。收集白色固體物，乾燥後用水重結晶，再經真空乾燥，所得物即為長臂生物素，平均獲得率為64％。熔點為206-215℃。
長臂生物素的活化：稱取長臂生物素357mg溶於DMF10ml 。中，加HOSU 130 mg和適量縮合劑，室溫攪拌下作用48h。過濾，收集濾液蒸發干，加乙醚洗滌後，用無水異丙醇10－15ml重結晶。所得粉末狀固體即為活化長臂生物素，平均獲得率為41％，熔點為156-162℃。
3) 生物素醯肼(biotin hydrazide，BHZ)的制備
BHZ是水合肼(hydrazine hydrate)與生物素的合成物，因在生物素的羧基側鏈上帶有肼基，故能標記帶醛基的蛋白質。
BHZ制備過程：取10生物素和氯化亞碸0.1 ml，在攪拌下緩慢加入冰冷的無水甲醇1ml中。溶解後放置28℃24h，繼經真空乾燥；加無水甲醇lml，待溶解後再次真空乾燥。殘余物溶於0.5mL無水甲醇，並緩慢加入水合肼0.1ml，置28℃24h後用濾紙過濾，沉澱物用乙醚20ml反復淋洗，最後用DMF l0 ml淋洗，移置37℃溫箱內烘乾，放4℃保存備用。
BHZ主要用於標記偏酸性的糖蛋白。如在其側鏈上添加1分子賴氨酸作為連接臂，可使生物素免受位阻作用，更易與親合素結合。
4）肼化生物胞素 (biocytin hydazide ，BCHZ)的制備 生物胞素為ε生物素賴氨酸，是生物素通過C=O基與賴氨酸的ε-氨基連接生成的化合物。BCHZ可與蛋白質的醛基和氨基結合，優於只能與醛基結合的BHZ。
BCUZ制備過程：取生物胞素甲酯100mg溶於甲醇2 ml，加入無水肼0.1 ml，25℃反應48h.濃縮至近乎乾燥時，在H2SO4乾燥裝置中減壓抽干，直至只測出少量的肼。產物溶於l ml蒸餾水中，通過聚苯乙烯型色譜固定相Q去肼。BCHZ可在熱乙醇中結晶。
2．生物素結合物的制備
經過活化的生物素及其衍生物可以和各種蛋白質(包括抗體、葡萄球菌A蛋白、酶、激素等)、多肽、多糖、核酸及核素、熒光素、膠體金等結合；並可藉助交聯劑與細胞、瓊脂糖珠等偶聯。廣泛應用於免疫學、細胞生物學和分子生物學的實驗研究領域，以及作為親和分離制劑，用於相應配基的分離與純化。以下重點介紹生物素化抗體、抗原及酶結合物的制備方法。
1）生物素化抗體制備
(1)BNHS溶液lmg／ml以二甲亞碸(DMSO)制備。
(2)將待偶聯的抗體溶液以0．1m01／LpH9．0NaHCO。配成1—2mg／m1。
(3)將BNHS與待偶聯抗體(如IgG)按1：8混合，室溫攪拌4h。
(4)4℃條件下使上述混合液體以o．05m01兒，pH7．2PBS透析過夜，加等體積甘油
或0．02％NaN：一30℃分裝存放。
生物素化抗體應避免反復凍融，按使用需量分裝小瓶。一旦啟封稀釋使用，勿繼續凍存保留。
2）生物素化辣根過氧化物酶(bio—HRP)制備：
(1)取BNHS(MW454)2．?mg溶於4m1DMF。
(2)以0．1m01兒pH8．4的NaHC02配製5mg／m1的HRP，按BNHS：HRP為1：8
混合(應將BNHS溶液緩慢加至HRP溶液)。置22℃反應4h。；
(3)上述混合液於4℃條件下對0．01m01兒pH7．4PBS透析，48h，中間換液8次以上。
(4)收集透析液加等量甘油混合，或加o．02％NaN，分裝，-20℃存放。
4. 生物素開關法原理
標記紅細胞。生物素開關法原理是標記一定量的紅細胞，使之參與血液循環，並在體衰老，利用biotin與抗生物素蛋白(avidin)之間的高親和力，分離帶有標記的、具有特定年齡的紅細胞。 生物素又稱維生素H、輔酶R，是水溶性維生素，也屬於維生素B族，B7。它是合成維生素C的必要物質，是脂肪和蛋白質正常代謝不可或缺的物質。
5. 生物題：底物一定要添加酶才會反應
不是的，酶並不能讓不能發生的反應發生，只是加速了本來就能發生，但是很慢的反應。
聽起來好像有點繞口，總結就一句話，底物沒有酶也會反應，但是速度可能很感人。
6. 怎樣用生物素標記dna
先用限制性內切酶在DNA上切出兩個粘性末端，然後在DNA連接酶的配合下用與這個粘性末端相配的有標志性的（可以是放射性和熒光性等同位素一般屬於放射性）DNA片段標記出來，簡單地說就是這樣～
7. 熒光二抗標記用HRP、AP、FITC、生物素法各發什麼顏色熒光
這四個不是一碼事，HRP和AP是酶，二抗上掛了酶，要給相應的底物才能顯色，顯色方式可以通過發熒光也可以不發熒光（例如給予ECL底物，其中的H2O2和魯米諾在HRP的作用下，能在黑暗中發出熒光；也可以給予雙氧水和DAB，反應產生棕色不溶於水的物質）；FITC為異硫氰酸熒光素，本身就是黃綠色熒光，二抗結合後可直接在熒光顯微鏡下觀察；生物素一般也是掛在二抗上的，利用卵白素分別連接生物素標記的第二抗體和生物標記的酶，由酶催化底物，生成終產物，這個終產物也是不溶於水的。
8. 如何純化生物素標記的IgG
如何純化生物素標記的IgG
EMSA結合反應：(1) 如下設置EMSA結合反應陰性對照反應：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift結合緩沖液(5X) 2微升細胞核蛋白或純化的轉錄因子 0微升標記好的探針 1微升總體積 10微升樣品反應：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift結合...
BAS-ELISA是在常規ELISA原理的基礎上，結合生物素(B)與親和素(A)間的高度放大作用，而建立的一種檢測系統。生物素很易與蛋白質(如抗體等)以共價鍵結合。這樣，結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產生反應，既起到了多級放大作用，又由於酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。
BAS用於檢測的基本方法可分為三大類。
第一類是標記親和素連接生物化大分子反應體系，稱BA法，或標記親和素生物素法(LAB)。
9. 2021-07-21 神奇的單鏈DNA合成技術(2)——生物素標記純化
生物素-鏈霉親合素系統同樣可以應用於ssDNA的純化。
在這種基於生物素標記的ssDNA純化方法中，首先使用會進行PCR，不同之處在於使用的兩條引物中，根據需要將其中一條引物的5'端進行生物素標記，另一條未非生物素標記的引物。因此，經過PCR擴增後，獲得的dsDNA中一條鏈為生物素標記的ssDNA，另一條為未標記的ssDNA。後續將dsDNA變性（使用鹼變性或者高溫）後，使用聯鏈霉親和素進行生物素標記ssDNA的純化。