如何對微生物進行選擇性分離

『壹』 分離純化微生物的方法有哪些各方法適用分離什麼菌種

主要有：劃線法、倒平板法、塗布法，根據分離的菌種選擇不同的培養基。

稀釋混合倒平板法、稀釋塗布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用，不需要特殊的儀器設備，分離純化效果好。

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學的研究及應用中，不僅需要通過分離。

分離技術

主要是稀釋和選擇培養，稀釋是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體，使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞，並使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法。

如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時，需要結合使用選擇培養法，即選用僅適合於所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體，改變群體中各類微生物的比例，以達到分離的目的。為保證分離到的微生物是純培養，分離時必須用。

以上內容參考：網路-微生物分離純化

『貳』 微生物純種分離的方法有哪些

自然界中的微生物總是雜居在一起 即使一粒土或一滴水中也生存著多種微生物 要研究其中某一種微生物 首先必須將它分離出來 下面介紹幾種純種微生物的分離方法
平板劃線分離 將已經熔化的培養基倒入培養皿中製成平板 用接種環沾取少量待分離的材料 在培養基表面平行或分區劃線（圖5-5）然後 將培養皿放入恆溫箱里培養 在線的開始部分 微生物往往連在一起生長 隨著線的延伸 菌數逐漸減少 最後可能形成純種的單個菌落
液體稀釋法 將待分離的樣品經過大量稀釋後 取稀釋液均勻地塗布在培養皿中的培養基表面 培養後就可能得到單個菌落
利用選擇培養基進行分離 不同的微生物對不同的試劑 染料 抗生素等具有不同的抵抗能力 利用這些特點可配製出適合某種微生物生長而限制其他微生物生長的選擇培養基 用這種培養基來培養微生物就可以達到純種分離的目的
菌絲尖端切割 這種方法適於絲狀真菌 用無菌的解剖刀切取位於菌落邊緣的菌絲的尖端 將它們移到合適的培養基上培養後 就能得到新菌落

『叄』 從自然界分離篩選微生物菌種的基本程序包括哪些

⑴采樣:從適合微生物生長的環境采樣
⑵富增:根據其特性選擇性的富集目的微生物
;⑶初篩:採用平板對富集的目的微生物純種分離,確定其活性選出高產菌種,一般200株;
⑷復篩:對第一次分離的微生物菌種,再次篩選,一般40株;
⑸二級復篩:從40株選出5株⑹確定菌種,進行生產性能測定.

『肆』 選擇性分離微生物育種的步驟大致有哪些

一、微生物工業對菌種的要求

(一)、微生物工業的生產水平由三個要素決定：生產菌種的性能、發酵及提純工藝條件、生產設備。其中生產菌種的性能是最重要的因素。

（二）、微生物工業對菌種的要求是：

（1）菌株高產，在較短的時間內發酵產生大量發酵產物的能力;

（2）在發酵過程中不產生或少產生與目標產品相近的副產品及其他產物;

（3）生長繁殖能力強，較強的生長速率，產孢子的菌種應該具有較強的產孢子能力;

（4）能夠高效地將原理轉化為產品;

（5）能利用廣泛的原材料，並對發酵原料成分的波動敏感性小;

（6）對需要添加的前體物質有耐受能力，並且不能將這些前體物質作為一般碳源利用;

（7）在發酵過程中產生的泡沫要少;

（8）具有抗噬菌體的能力；

（9）遺傳穩定性，

二、工業用微生物菌種的來源及選育

（一）微生物菌種的來源

一般通過以下幾個途徑收集菌種、採集樣品和分離篩選：

（1）是根據資料直接向有科研單位、高等院校、工廠或菌種保藏部門索取或購買；

（2）從大自然中採集樣品分離；

（3）從一些發酵製品中分離篩選目的菌株。

當前發酵工業所用菌種總趨勢是從野生菌轉向變異菌，自然選用轉向代謝育種，從誘發基因突變轉向基因重組的定向育種。

（二）微生物工業菌種的分離

1、野生菌株的分離、篩選過程

（1）新菌種分離與篩選的步驟

菌種分離的流程如下：

標本採集 →標本材料的預處理→富集培養→菌種初篩→ 菌種復篩→性能鑒定→ 菌種保藏

①采樣

采樣季節：以溫度適中，雨量不多的秋初為好。

采土方式：在選好適當地點後，用小鏟子除去表土，取離地面5-15cm處的土約10g，盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中，紮好，標記，記錄采樣時間、地點、環境條件等，以備查考。為了使土樣中微生物的數量和類型盡少變化，宜將樣品逐步分批寄回，以便及時分離。

②標本預處理

④純種分離：採用劃線分離法、稀釋分離法等純化方法獲取單菌落。

⑤高產菌株的篩選：這一步是採用與生產相近的培養基和培養條件，通過三角瓶的容量進行小型發酵試驗，獲得適合於工業生產用菌種。還要對菌種進行發酵性能測定，

⑥毒性試驗：據有的國家規定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑麴黴、米麴黴和枯草桿菌作為食用無須作毒性試驗外，其他微生物作為食用，均需通過兩年以上的毒性試驗。

2、菌種的分離方法

（1）施加選擇性壓力分離法

主要是利用不同種類的微生物其生長繁殖對環境和營養的要求不同，如溫度、pH、滲透壓、氧氣、碳源、氮源等，人為控制這些條件，使之利於某類或某種微生物生長，而不利於其他種類微生物的生存，以達到使目的菌種占優勢．而得以快速分離純化的目的。如可以控制培養時的氧，可將好氧微生物和厭氧微生物分開；通過控制溫度，可將嗜熱微生物和非嗜熱微生物分開；控制pH，可將嗜酸、嗜鹼微生物分離等。在分離培養基中也可以加入不同的抗生素或試劑來增加選擇性。如在分離放線菌和細菌時，可加入抗真菌抗生素；分離真菌時，可加入抗細菌葯物。

（2）隨機分離方法

有些微生物的產物對篩選沒有直接的選擇性指示作用，因此常採用隨機分離方法分離。

A、抗生素產生菌的分離

抗生素產生菌的分離常用抑菌圈法。實驗必須用工具菌：採用抗生素的敏感菌，傳統上常用金黃色葡萄球菌和枯草桿菌。

Ｂ、抗腫瘤葯物產生菌的分離

抗腫瘤葯物產生菌的分離常用方法：生化誘導法、SOS生色檢測法、DNA修復能力突變株。原理是利用DNA的損傷，微生物發生突變。

B1、生化誘導法：將大腸桿菌的lacZ基因連接在λ噬菌體的PL啟動子下，當DNA損傷時，誘發λ阻遏物CI分解，PL啟動子啟動lacZ基因轉錄，測定表達的ß-半乳糖苷酶活性，來檢測葯物的存在。

B2、SOS生色檢測法：利用當DNA損傷時，可活化yecA蛋白，進而分解噬菌體的阻遏蛋白，再引起sifA基因啟動lacZ基因轉錄，測定表達的ß-半乳糖苷酶活性，來檢測葯物的存在。

Ｃ、生長因子產生菌的分離

以氨基酸產生菌為例，介紹篩選方法。首先將待試菌接入加了抗真菌的化合物（如亞胺環己酮）的分離培養基中生長，然後採用影印法，將菌落復印到能支持氨基酸產生菌生長的培養基中。

『伍』 如何將特殊目的之微生物篩選出來並將這些微生物如何應用於工業加以敘述

如何將特殊目的之微生物篩選出來
微生物產生菌的分離篩選 微生物的分離
經富集培養以後的樣品，目的微生物得到增殖，佔了優勢，其他種類的微生物在數量上相對減少，但並未死亡。富集後的培養液中仍然有多種微生物混雜在一起，即使佔了優勢的一類微生物中，也並非純種。例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產生菌，有的是細菌，有的是黴菌，有的是芽孢桿菌，有的不產芽孢，有的生產能力強，有的生產能力弱等等。因此，經過富集培養後的樣品，也需要進一步通過分離純化，把最需要的菌株直接從樣品中分離出來。
一、好氣微生物的分離
分離的方法很多，大體可分為兩類：一類較為粗放，只能達到「菌落純」，如稀釋塗布法，劃線分離法，組織分離法等。前兩種方法由於操作簡便有效，工業生產中應用較多。組織分離法則通常是從有病或特殊組織中分離菌株。另一類是較細的單細胞或單孢子分離方法，可達到「菌株純」或「細胞純」的水平。這類方法需採用專門的儀器設備，復雜的如顯微操作裝置，簡單的可利用培養皿或凹玻片作分離小室進行分離。下面對這幾種分離純化方法分別加以介紹。
（一） 稀釋塗布法
把土壤樣品以十倍的級差，用無菌水進行稀釋，取一定量的某一稀釋度的懸浮液，塗抹於分離培養基的平板上，經過培養，長出單個菌落，挑取需要的菌落移到斜面培養基上培養。土壤樣品的稀釋程度，要看樣品中的含菌數多少，一般有機質含量高的菜園土等，樣品中含菌量大，稀釋倍數高些，反之稀釋倍數低些。採用該方法，在平板培養基上得到單菌落的機會較大，特別適合於分離易蔓延的微生物。
（二） 劃線分離法
用接種環取部分樣品或菌體，在事先已准備好的培養基平板上劃線，當單個菌落長出後，將菌落移入斜面培養基上，培養後備用。該分離方法操作簡便、快捷，效果較好。
在樣品含菌量較少或某種目的微生物不多的情況下，微生物的純種分離方法可以簡化如下：第一種方法，取一支盛有3～5ml無菌水的粗試管或小三角瓶，取混勻的樣品少許（0.5g左右）放入其中，充分振盪分散，用滅菌滴管取一滴土壤懸液於瓊脂平板上塗抹培養，或者用接種環接一環於平板上劃線培養。這種方法不需要菌落計數，比以上常規稀釋法簡便。第二種方法，取風乾粉末狀的土樣少許（幾十毫克）直接灑在選擇性分離培養基平板上或混入培養基中製成平板，置適溫培養一定時間，長出菌落。例如分離小單孢菌就可採用該方法，從河泥中取樣，風干研碎，取樣品粉末20～50mg直接加到天門冬醯胺培養基中，混合均勻製成平板，培養後長出魚卵狀菌落。這種方法有時分離不夠充分，可用劃線法進一步純化。

『陸』 如何進行生產菌的分離和篩選

（3）從一些發酵製品中分離目的菌株。 菌株的分離和篩選一般可分為采樣、富集，從酒醪中分離澱粉酶或糖化酶的產生菌等。該類發酵製品經過長期的自然選擇，具有悠久的歷史，從這些傳統產品中容易篩選到理想的菌株，為使篩選達到事半功倍的效果，從中篩選所需菌株。
（2）由自然界採集樣品，如土壤、水、動植物體等，從中進行分離篩選，如從醬油中分離蛋白酶產生菌：
（1）向菌種保藏索取有關的菌株，總的說來可從以下幾個途徑進行收集和篩選，二是把分離到的野生型菌株進一步純化並進行代謝產物鑒別。
在實驗工作中工業微生物產生菌的篩選一般包括兩大部分：一是從自然界分離所需要的菌株、分離、產物鑒別幾個步驟

『柒』 自然界分離微生物的一般操作步驟是什麼

先確定要分離的微生物的種類
然後選取合適的選擇性培養基
然後接種，可以用直線，也可以用曲線法，然後在適合條件下培養，
重復幾次直至得到純的菌落