⑴ 簡述從微生物發酵液中提取有效成分,分離純化的基本程序
從微生物發酵液中提取有效成分,分離純化的基本程序通常包括以下幾個步驟:
預處理:對微生物發酵液進行初步處理,提取有效成分。常用的預處理方法包括離心分離、過濾、膜分離等。
分離:對預處理後的液體進行分離,使有效成分和雜質分開。常用的分離方法包括萃取、沉澱、膜分離等。
純化:對分離後的有效成分進行純化,使其中的雜質含量降至最低。常用的純化方法包括蒸餾、色譜、離子交換層析等。
分析:對純化後的有效成分進行分析,確定其組成和性質。常用的分析方法包括質譜分析、光譜分析、表面增強拉曼光譜等。
注意:以上是一般情況下從微生物發酵液中提取有效成分,分離純化的基本程序,具體操作還需要根據具體情況和所使用的設備和葯物來決定。
⑵ 從發酵料液中提取微生物活性物質主要應注意哪些問題
你可以考慮以下幾方面:
1)初步確定你的發酵液中的活性成份的性質,HPLC顯示都是極性非常強只是說明它的水溶性很好,不足以判斷它的性質;你可以查閱質料,看一下相關的菌種產生的活性物質的種類,然後設計相關的實驗來進行初步驗證,比如抗生素能產生抑菌圈,蛋白酶能水解蛋白質底物形成透明圈等相關實驗;
2)根據活性成分的性質來設計分離純化的方法;
3)發酵液的預處理,首先要過濾除去菌體等發酵液中不能溶解的雜質,如果產生色素的話最後先去除色素,以免干擾後面的分離過程;同時要根據活性成分成分的性質對活性成分進行一定的濃縮處理,再根據你要用的柱子來進行必要的處理,比如透析出鹽等,同時要注意在預處理的過程中盡量保持活性成分的活性.
離心去菌體後,你可以先用各種有機溶劑如甲醇、氯仿等進行萃取,檢查萃取液與沉澱物質的活性,確定你的活性成分的大致性質;也可以先用鹽析的方法,用硫酸氨等進行鹽析,測試活性.這些工作完了以後,可以過開放柱進行初步的純化,收集活性物組分.有必要的話,上低壓色譜柱或是高壓色譜.收集活性峰,一般經過高效液相色譜後,就比較純了.
如果活性物質極性很強,那你就需要換一根可以分離極性物質的柱子,好像C18或是凝膠柱.
發酵液的預處理和固液分離
根據活性物質的許可范圍,可以採取酸化、加熱、過濾、絮凝、離心等.
提取(分離濃縮)
經常採用的方法有化學萃取、樹脂吸附、沉澱等.
精製(純化)
常採用的方法有結晶、脫色、色譜層析等.
此外在提取步驟中應用的沉澱、吸附等方法也可用於樣品的純化.
提取方法的選擇
1.產品的基本理化性能,如化學結構、化合物的溶解度、極性、pK值、官能團反映等.
2.化合物的穩定性,如耐受的pH范圍、耐受的溫度條件、光照、氧化等.
此外,在分離純化過程中值得提及的是,盡可能地避免二次污染.如分離純化過程中使用的水要求去離子,有機溶劑要求高純級,使用的樹脂應該經過預處理除去其中殘留的雜質等.
Hplc純化時可試試調節pH值,適當降低乙腈或甲醇的量
⑶ 微生物代謝產物的提取濃縮和鑒定
提取?有什麼現有設備嗎?比如說FAST之類的…大概過程就是提取,然後旋轉蒸發儀濃縮,最後定容下,最後HPLC就行了…我覺得GC不好用,如果不易氣化根本不可性…
⑷ 微生物是怎麼發酵得到酶的
一般都是發酵微生物,生產菌體和表達酶蛋白,提取酶蛋白。純的酶都是經過特異工藝提取和純化的。
⑸ 微生物發酵菌種獲得的一般途徑
獲得微生物發酵菌種的一般途徑有從微生物的保藏單位獲取;從自然界進行分離;使用野生菌進行誘變;基因重組;從動植物的細胞中獲取。防止發酵菌種退化的措施:將液體培養物分接到試管中,然後將其存儲在冰箱內(冷藏室),或者將其存放於溫度范圍處於零下5°C至零下20°C的普通冰箱中即可。