水中微生物如何培養

A. 「怎麼培養水生微生物

培養水生微生物主要是要有最佳的生長環境及生長條件，目前實驗室使用最多的是生化培養箱及人工氣候培養箱，生化培養箱主要起到控制溫度、光照的作用，人工氣候培養箱不僅控制溫度、光照還對氧氣量及二氧化氮含量進行控制，模擬好水生微生物的液體培養基質將其放到培養箱內進行培養並不定期進行觀察記錄

B. 水處理中怎麼培養微生物

1,接種法，直接從其它運行的污水廠，將剩餘污泥拿回來，進污水，悶曝培養，必要時加糖、醋酸鈉等有機物加快培養，夏天7-15天即可啟動。
2，自然培養法，進污水悶曝。約需1個月以上。

C. 污水處理菌種怎樣培養

污水處理廠活性污泥的培養，就是為形成活性污泥的微生物提供一定的生長條件，在這種條件下，經過一段時間，就會有活性污泥形成，並且在數量上逐漸增長，並最後達到處理廢水所需的污泥濃度。

為達到污水中污染物質降解的目的，遴選、培養、組合針對污水特別降解能力的微生物菌形成菌群，成為專門的污水處理菌種，是目前污水處理技術中最先進的幾種方式之一。

菌種源自於大自然，加以人工培育馴化，最終回歸大自然，擔任修復水體氮循環的使命，符合無毒、無公害、無二次污染、對人體無害的原則。能有效去除氨氮、BOD、COD、SS、硝酸根、硫酸根、色度、臭味、毒性物質、化合污染物等，而不需化學混凝、助凝的過程。

第一代的生物處理技術利用污水或污泥中的自發性細菌進行硝化與反硝化作用將有機污染物降解，使水體恢復氮循環的自凈能力，由於菌種不全或數量不足，已經應付不了現代化高濃度與高復雜的污水；

第二代生物處理技術則是利用專業的微生物菌劑結合好氧、缺氧、厭氧等各種手段與設施來處理特定污水，由於環境適應能力與配方不全，不易全面解決污水中的高復雜污染成分與頑劣性的污水；

第三代污水處理菌技術是新一代的復合性微生物菌群，結合污水處理菌微生物研發經驗與全球先進微生物基因工程培植技術，遴選萃取多種微生物中對水體污染物具有優秀降解性的菌種基因。

培育成新一代更具降解污染能力的微生物，經過嚴格的篩選與馴化，再運用專用配方將多種微生物構成生物鏈，最終馴養成為專治復雜污水的復合菌群，使能處理各種高難度的廢水。

(3)水中微生物如何培養擴展閱讀：

好氧性微生物污水處理菌種利用水中的溶氧（DO），將有機污染物質分解成水和二氧化碳，或轉化為污水處理微生物的營養物質，並利用這些養分進行繁殖，其過程正好可以降解污染物質，達到除污除臭的目的，此種處理法稱為好氧性處理，利用最多的就是活性污泥法。

通用厭氧性污水處理微生物是在沒有溶氧的環境下將硝酸鹽還原（利用硝酸鹽中的氧），進行脫氮反應，使其產生氮氣，此種方廣泛運用於含有氮氣的廢水處理。而酸生成菌（通用厭氧性微生物）常用於絕對厭氧微生物污水處理工法中的前期酸化反應。

硝化反硝化復合菌種：具備硝化和反硝化雙重作用的復合菌種，在污水處理環境日益復雜的情況下，單一使用硝化或反硝化菌種越來越難達成菌種平衡，硝化反硝化的配比多數企業對污此的掌握也並非准確，造成大量菌種資源浪費或不足，難以達成理想的污水處理效果。復合菌種可根據水質情況自我擴繁，達到菌種平衡，讓污水處理工作更簡單、高效。

D. 怎麼讓水裡長微生物

讓水裡長微生物可以水體富營養化。大量的生活污水排放、過度發展水體養殖等，都會使大量有機營養物質進入水體，稱為水體富營養化，如果水體不能及時稀釋或轉化這些營養物質，就會造成水體富營養化。

使水中微生物和藻類植物大量暴發式增殖，在消耗水中營養物質的時同時，也會迅速消耗，待水中營養物質消耗殆盡時，水中的微生物和藻類植物又會在短時間內大量死％亡，最終形成既無動物，也無植物，發臭發黑的一潭死水。

水體中微生物的來源

水體中固有的微生物，水體中固有的微生物有熒光桿菌、產紅色和產紫色的靈桿菌、不產色的好氧芽孢桿菌、產色和不產色的球菌、絲狀硫細菌、浮游球衣菌及鐵細菌等。

來自土壤的微生物，由於雨水沖刷地面，將土壤中的微生物帶到水體中。來自土壤的微生物有枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、氨化細菌、硝化細菌、硫酸鹽還原菌、蕈狀芽孢桿菌、黴菌等。

水體微生物生態是在一定時間和空間范圍內由微生物的個體、種群、群落與它們所在的水體環境通過能量流動和物質循環所組成的一個自然體。水體有天然水體和人工水體兩種。天然水體包括海洋、江河、湖泊、溪流等，人工水體有水庫、運河、下水道、各種污廢水處理系統。

E. 如何培養水體浮游生物

1、水源

培養浮游動物的水，可以用湖泊里的水，但要做好過濾措施，防止野生雜魚和敵害進入。如果是自己家的井水，要放置2~3周沉澱過濾以後才能使用。在用自來水時，要做好消毒措施，每一升水用5毫克的硫酸鈉清除水中的有害氯。

2、水溫

養魚時，要用微生物制劑來控制有害細菌的生長繁殖。在適宜的溫度環境下，浮游生物的生長速度也會加快。到了冬天寒冷的季節，可以用塑料薄膜來提高溫度。溫差變化較大的情況下，特別要注意水溫變化的幅度。

3、PH值與溶氧量

培養浮游動物最適宜的PH值是7.2~8.5，在剛開始培養時，由於經過清塘消毒處理，水中的PH值比較穩定。但在中期的時候，由於水質發生變化，會發生PH值下降的問題，可以用適量的生石灰來調節水質，改善PH水平，生石灰的用量根據池塘環境和水溫來決定。

浮游生物對池塘的溶氧含量有一定的要求，比如橈足類的浮游生物，當池塘的溶氧量低於3毫克時，就會全部死亡。在溶氧偏低的環境下，應補充新水，充氣增氧，以防止浮游動物死亡。

4、光照

培養浮游動物時，對光照沒有太多的要求，但在高溫季節，不能直接接受強光照射。高溫的時候，可以用安裝遮陽棚的方法，減少陽光的照射，調節水溫，有利於魚類和浮游動物的生長

5、水藻

浮游動物的餌料是微藻，要想培養浮游動物，首先就要肥水培藻。適合浮游生物生長的藻類有伊樂藻、苦草、小球藻等，根據藻種的需求，合理施加肥料和微量元素，特別是鈣、磷、鉀等元素，可以促進水體中的藻相平衡，避免出現倒藻的情況發生。

F. 如何培養微生物

實驗一 常用培養基的制備、滅菌與消毒
實驗二 土壤中微生物分離純化培養
實驗三 菌種保藏
實驗四 細菌形態觀察及單染色
實驗五 放線菌及黴菌形態觀察
實驗六 革蘭氏染色及芽孢染色
實驗七 酵母菌的形態觀察及死活細胞的鑒定
實驗八 微生物直接計數法及測微技術
實驗九 大腸桿菌生長曲線的測定
實驗十 水中細菌總數的測定
實驗十一細菌細胞的生化反應實驗
實驗十二噬菌體的分離、純化及效價測定

實驗一 常用培養基的制備、滅菌與消毒

一、實驗目的
了解培養基的配製原理；掌握配製培養基的一般方法和步驟；了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握乾熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。

二、實驗原理
培養基是人工按一定比例配製的供微生物生長繁殖和合成代謝產物所需要的營養物質的混合物。培養基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水。根據微生物的種類和實驗目的不同，培養基也有不同的種類和配製方法。
牛肉膏蛋白腖培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基，有時又稱為普通培養基。由於這種培養基中含有一般細胞生長繁殖所需要的最基本的營養物質，所以可供微生物生長繁殖之用。
乾熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質變性從而達到殺死微生物的效果。

三、試劑與器材
1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、吸管、培養皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等。
2.試劑 牛肉膏、蛋白腖、NaCl、瓊脂

四、實驗內容
1.稱量→溶化→調pH→過濾→分裝→加塞→包紮→滅菌→無菌檢查
2.乾熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恆溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恆壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按配方配製。
2.調pH不要過頭。
3.乾熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時間控制，70ºC以下放物、取物。
4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱後排除冷空氣，到時降壓回零取物。
5.過濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時，壓力要適當，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。

實驗二 土壤中微生物分離純化培養

一、實驗目的
掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養基和液體培養基中的生長特徵；進一步熟練和掌握微生物無菌操作技術；掌握微生物培養方法。

二、實驗原理
從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的分離、純化方法：單細胞挑取法，稀釋塗布平板法，稀釋混合平板法，平板劃線法 稀釋塗布平板法步驟：倒平板－制備土壤污水稀釋液－塗布－培養－挑菌落；平板劃線法步驟：倒平板－標記培養基名稱－劃線。
三、試劑與器材
1.器材 盛9m1無菌水的試管、盛90m1無菌水並帶有玻璃珠的三角燒瓶、無菌玻璃塗棒、無菌吸管、接種環、酒精燈、無菌培養皿、顯微鏡、血細胞計數板等。
2.試劑 牛肉膏蛋白腖培養基，高氏1號培養基，查氏培養基

四、實驗內容
1.土壤稀釋液的制備
2.微生物分離純化：稀釋塗平板法，平皿劃線分離法，微生物培養技術

五、關鍵步驟及注意事項
1.掌握含菌培養基的配製，嚴格控制溫度。
2.平板劃線應防止染菌，同時應注意劃線深度及密度。
實驗三 菌種保藏
一、實驗目的
1.學習並掌握菌種保藏的基本原理。
2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。

二、實驗原理
微生物個體微小、代謝旺盛、生長繁殖快，如果保存不妥容易發生變異和雜菌污染，甚至導致細胞死亡等現象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括傳代培養法、載體法、懸液法、冷凍法和真空乾燥法

三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌、青黴菌、放線菌
2.試劑 液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無水氯化鈣、食鹽、乾冰
3.器材 無菌吸管、無菌滴管、無菌培養皿；安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、乾燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(—30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等。

四、實驗內容
1.斜面保藏法
2.液體石蠟法
3.穿刺保藏法
4.砂土管保藏法
5.冷凍真空乾燥保存法

五、關鍵步驟及注意事項
1.清楚各種保藏方法的優缺點，針對不同要求選擇適宜的保藏方法。
2.熔封安瓶時防止封閉不嚴。
3.液氮凍存操作應防止凍傷。

實驗四 細菌形態觀察及單染色

一、實驗目的
1.了解簡單染色法的原理，並掌握其操作方法。
2.學習並掌握微生物塗片、染色的基本技術和無菌操作技術。
3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。
4.初步認識細菌的形態特徵。

二、實驗原理
細菌個體微小，且較透明，必須藉助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對比，以便在顯微鏡下進行觀察。根據實驗目的不同，可分為簡單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等。簡單染色法是最基本的染色方法，是利用單一染料對細菌進行染色。此法操作簡便，適用於菌體一般形狀和細菌排列的觀察。常用鹼性染料進行簡單染色。

三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌，枯草芽孢桿菌
2.試劑 呂氏鹼性美藍染液(或草酸銨結晶紫染液)、齊氏石炭酸復紅染液。
3.器材 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環、雙層瓶(內裝香柏油和二甲苯)等。

四、實驗內容
簡單染色法：塗片→乾燥→固定→染色→水洗→乾燥→鏡檢

五、關鍵步驟及注意事項
1.塗片時，生理鹽水及取菌不宜過多，塗片應盡可能均勻，
2.水洗步驟水流不宜過大，過急，以免塗片薄膜脫落。

實驗五 放線菌及黴菌形態觀察

一、實驗目的
1.了解放線菌、黴菌形態觀察的原理。
2.學習並掌握觀察放線菌、黴菌形態的操作方法。
3.初步了解放線菌、黴菌的形態特徵。

二、實驗原理
放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養基表面或深入培養基內生長的叫基內菌絲(簡稱「基絲」)，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲(簡稱「氣絲」)，並進一步分化產生孢子絲及孢子。有的放線菌只產生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。
黴菌可產生復合分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。黴菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態特徵是識別不同種類黴菌的重要依據。黴菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多，常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們設計了各種培養和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長狀態下的形態特徵。本實驗採用插片法。
插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片後培養，使放線菌菌絲沿著培養基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上。觀察時，輕輕取出蓋玻片，置於載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態下的特徵，而且便於觀察不同生長期的形態。

三、試劑與器材
1.材料 黑麴黴、青黴和根霉，細黃鏈黴菌或青色鏈黴菌，滅菌的高氏I號瓊脂和滅菌的查氏培養基。
2.實驗器材 經滅菌的：平皿、玻璃紙、無菌吸管、蓋玻片、玻璃塗棒，以及載玻片、接種環、接種鏟、鑷子、顯微鏡等。

四、實驗內容
倒平板→接種→插片→培養→鏡檢

五、關鍵步驟及注意事項
1.倒平板要厚一些，接種時劃線要密。
2.插片時要有一定角度並與劃線垂直。
3.觀察時，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當視野，更換高倍鏡觀察。
4.如果用0.1%美藍對培養後的蓋玻片進行染色後觀察，效果會更好。
實驗六 革蘭氏染色及芽孢染色
一、實驗目的
1.了解革蘭氏染色法和芽孢染色法的原理，並掌握其操作方法。
2.了解革蘭氏染色法在細菌分類鑒定中的重要性。
3.學習並掌握微生物塗片、染色的基本技術和無菌操作技術。
4.學習顯微鏡(油鏡)的使用方法。
5.初步認識細菌的形態特徵。

二、實驗原理
革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進行染色，再用碘液媒染，然後用乙醇(或丙酮)脫色，最後用復染劑(如番紅)復染。經此方法染色後，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；如果細胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細菌染上復染劑的顏色(紅色)，該菌屬於革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應是細菌重要的鑒別特徵，為保證染色結果的正確性，採用規范的染色方法是十分必要的。
芽孢染色法的基本原理，用著色力強的染色劑孔雀綠或石炭酸復紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進入菌體也可進入芽孢內，進入菌體的染料經水洗後被脫色，而芽孢一經著色難以被水洗脫，當用對比度大的復染劑染色後，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復染劑的顏色，使芽孢和菌體更易於區分。

三、試劑與器材
1.材料：枯草芽孢桿菌12～18h營養瓊脂斜面培養物，大腸桿菌約24h營養瓊脂斜面培養物
2.試劑 革蘭氏染色液(結晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液)。5％孔雀綠水溶液
3.實驗器材 小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無菌水、顯微鏡等、接種環、雙層瓶(內裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等。

四、實驗內容
1.革蘭氏染色法 製片→初染→媒染→脫色→復染→鏡檢。
2.Schaefer-Fulton氏染色法 製片→染色→水洗→復染→水洗→鏡檢。

五、關鍵步驟及注意事項
1.塗片時，生理鹽水及取菌不宜過多，塗片應盡可能均勻，
2.乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關鍵環節，嚴格掌握脫色時間。

實驗七 酵母菌的形態觀察及死活細胞的鑒定

一、實驗目的
1.觀察酵母菌的形態特徵、出芽生殖方式，並掌握酵母菌與細菌形態特徵的區別。
2.學習鑒別死活細胞的實驗方法。

二、實驗原理
酵母菌是單細胞的真核微生物，菌體比細菌大而且不運動。酵母菌的繁殖方式分為無性繁殖和有性繁殖兩種，以無性繁殖為主。芽殖是酵母菌普遍的無性繁殖方式，少數為裂殖；有性繁殖是產生子囊和子囊孢子。本實驗是通過美藍染液水浸片和水一碘液水浸片來觀察酵母的形態和芽殖方式。
美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母活細胞染色時，由於細胞的新陳代謝作用，細胞內具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變為無色的還原型，而對代謝作用微弱或死細胞，無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，不僅用此法可觀察酵母細胞形態，也可用來鑒別酵母菌的死細胞和活細胞。

三、試劑與器材
1.材料 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡爾酵母(Saccharomyces calsbergensis)培養2天左右的麥芽汁(或豆芽汁)液體培養物。
2.試劑 0.05％和O.1％呂氏鹼性美藍染色液、革蘭氏染色用的碘液。
3.器材 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環、灑精燈等。

四、實驗內容
1.美藍浸片觀察 酵母培養→製片→染色→鏡檢→30分鍾後再鏡檢
2.水-碘浸片觀察

五、關鍵步驟及注意事項
1.染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液溢出或出現大量氣泡。
2.用鑷子取一塊蓋玻片，先將一側與菌液接觸，然後慢慢將蓋玻片放下，使其蓋在菌液上，蓋玻片不宜平著放下，避免氣泡產生。

實驗八 微生物直接計數法及測微技術

一、實驗目的
1.了解血球計數板計數原理，並掌握計數方法。
2.掌握用測微尺測定微生物大小的方法。

二、實驗原理
顯微鏡直接計數法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計數板的計數室中，於顯微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法。因為計數板是一塊特別的載玻片。其上由四條槽構成三個平台；中間較寬的平台又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平台上各刻有一個方格網，每個方格網共分為九個大方格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(見圖2—3—44)；另一種是一個大方格分成16個中方格，每個中方格又分成25個小方格，無論哪種每個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為0．1mm，所以計數室的容積為0．1mm3。計數時，通常只用5個中格內的菌體(孢子)數即可。然後求出每個中方格的平均值，再乘上25或16，得出一個大方格中的總茵數，再換算成lml菌液中的總菌數。若設5個中方格中總菌數為N，菌液稀釋倍數為M，如果是25個中方格計數板，則計算方法為：
lml菌液中的總菌數=平均每個中格中菌的個數×25×104×M=50000N·M(個)
微生物細胞的大小是微生物基本的形態特徵，也是分類鑒定的依據之一。微生物大小的測定，需要在顯微鏡下，藉助於特殊的測量工具——測微尺，包括目鏡測微尺和鏡台測微尺。鏡台測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將1mm等分為100格，每格長0．01mm(即10pm)。鏡台測微尺並不直接用來測量細胞的大小，而是用於校正目鏡測微尺每格的相對長度。
三、試劑與器材
1.材料 釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養物。
2.實驗器材 細胞計數板、顯微鏡、蓋玻片、無菌毛細滴管、目鏡測微尺、鏡台測微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。

四、實驗內容
1.微生物直接計數法 菌懸液制備→鏡檢計數室→加樣品→顯微鏡計數→清洗血細胞計數板
2.微生物測微技術 裝目鏡測微尺→校正→菌體大小測定

五、關鍵步驟及注意事項
1.防止加樣空氣泡產生。
2.調節顯微鏡光線的強弱適當。
實驗九 大腸桿菌生長曲線的測定

一、實驗目的
1.了解大腸桿菌的生長曲線特徵和繁殖規律，並學會繪制生長曲線。
2.復習光電比濁法測量細菌數量的方法。

二、實驗原理
將一定量的細菌轉入新鮮液體培養基中，在適宜的條件下培養細胞要經歷延遲期、對數期、穩定期和衰亡期四個階段。以培養時間為橫坐標，以細菌數目的對數或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養條件下所繪制的生長曲線也不相同。

三、試劑與器材
1.材料與試劑 大腸桿菌、LB液體培養基70ml、分裝2支大試管(5ml／支)、剩餘60ml裝入250ml的三角瓶。
2.器材 722型分光光度計、恆溫振盪搖床、無菌試管、無菌吸管等。

四、實驗內容
編號→接種→培養→比濁測定

五、關鍵步驟及注意事項
1.測定OD值時，要求從低濃度到高濃度測定
2.嚴格控制培養時間

實驗十 水中細菌總數的測定

一、實驗目的
1.學習水樣的採取方法和水樣細菌總數測定的方法。
2.了解水源水的平板菌落計數的原理。

二、實驗原理
本實驗應用平板計數技術測定水中細菌總數。由於水中細菌種類繁多，它們對營養和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細菌總數僅是一種近似值。目前一般是採用普通牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基。

三、試劑與器材
1.試劑 牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基，滅菌水
2.器材 滅菌三角瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養皿，滅菌吸管，滅菌試管等。

四、實驗內容
1.水樣的採取
2.細菌總數測定
3.菌落計數方法

五、關鍵步驟及注意事項
1.注意全過程防止染菌
實驗十一 細菌細胞的生化反應實驗

一、實驗目的
了解並掌握細菌鑒定中常用生理生化反應的原理和方法。

二、實驗原理
各種細菌由於具有不同的酶系統，致使它們能利用不同的底物，或雖然可以利用相同的底物，卻產生不同的代謝產物，因此可以利用各種生理生化反應來鑒別細菌。
糖發酵是最常用的生化反應，存在於大多數細菌中。不同的細菌在糖的分解能力上存在很大的差異。有些細菌能分解某種糖並產生酸性物質(如乳酸、丙酸、醋酸等)和氣體(如二氧化碳、氫、甲烷等)，而有些細菌只產生酸不產生氣體。例如大腸桿菌分解乳糖和葡萄糖產酸並產氣，普通變形桿菌分解葡萄糖產酸產氣，但不能分解乳糖。酸的產生可利用指示劑來判斷。在培養基中加入溴甲酚紫(pH5．2為黃色，pH6．8為紫色)，當發酵產酸時，使培養基由紫色變為黃色。氣體的產生可由發酵試管中倒置的德漢氏小管中有無氣泡的出現來驗證．

三、試劑與器材
1.材料大腸桿菌、普通變性桿菌、產氣桿菌、糖發酵培養基、蛋白腖水培養基、葡萄糖蛋白腖水培養基。
2.試劑甲基紅試劑、40％KOH、5％a一萘酚、乙醚、吲哚試劑。
3.實驗器材德漢氏小管、試管、接種環、恆溫培養箱。

四、實驗內容
培養基配製→編號→試管→接種→培養→觀察結果

五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按照培養基配方配製培養基。
2.觀察結果時要注意滴加葯量及反應時間。
實驗十二 噬菌體的分離、純化及效價測定

一、實驗目的
1.學習分離、純化噬菌體的原理和方法
2.觀察噬菌斑的形態和大小
3.掌握噬菌體效價測定的基本方法

二、實驗原理
噬菌體是細菌的專性寄生物，自然界中凡是有細菌存在的地方，均可以發現其特異性的噬菌體，噬菌體侵入細菌細胞後，利用宿主細胞的酶系統進行復制和增殖，最終導致細菌細胞裂解，噬菌體從細胞中釋放出來，可以進一步侵染細菌細胞。在液體培養基中，噬菌體可以使渾濁的菌懸液變為澄清。在長有宿主細菌的固體培養基平板上，噬菌體可以裂解細菌形成透明的空斑，即噬菌斑，一個噬菌體產生一個噬菌斑，因此可以利用這個性質對噬菌體進行分離和效價的測定。
噬菌體的效價是指噬菌體的濃度，即一毫升培養液中所含有的噬菌體數量。噬菌體效價的測定方法多採用雙層瓊脂平板法。先在培養皿中倒入底層固體培養基，凝固後再倒入含有宿主細菌和一定稀釋度噬菌體的半固體培養基。培養一段時間後，計算噬菌斑的數量。

三、試劑與器材
1.材料大腸桿菌、牛肉膏蛋白腖固體培養基、牛肉膏蛋白腖半固體培養基(含有瓊脂0．5％，試管分裝，每管3～5m1)、三倍濃縮的牛肉膏蛋白腖液體培養基。
2.器材培養皿、無菌吸管、三角瓶、抽濾瓶、蔡氏細菌濾器、真空泵、陰溝污水。

四、實驗內容
噬菌體分離→噬菌體純化→效價測定

五、關鍵步驟及注意事項
1.噬菌體時要注意細菌濾器的型號。
2.純化噬菌體時要注意形態、大小。
3.效價測定時要注意雙層瓊脂平板法的使用技巧。

G. 污水處理菌種培養方法

第一、生活污水培菌法

在溫度適宜的情況下，使曝氣池內充滿生活污水。進行悶曝（曝氣而不進污水）再過數十小時後，即可開始進水。污水進水量有小到大，如此運行數天後即可出現活性污泥，並逐漸增多。要加快進程的話可以在初期投加一些濃質的糞便水或者泔水，提高營養物質。曝氣初期要注意控制曝氣量不要太大。

第二、干泥接種培菌法

有條件的話可以選取已經正常運行的污水系統中的污水脫水後的干污泥作為菌種源進行接種培養。一般按曝氣池總容積的1%的干泥量。加適量水搗碎，在加適量的工業廢水和糞便水。如此便能很快形成濃度較高的活性污泥。

第三、有毒或難降解工業廢水培菌

有毒或難降解工業廢水，只能先以生活污水培菌，然後再將工業廢水逐步引入，逐步馴化的方式進行。

第四、接引進種菌種培菌

有些特殊水質菌種難於培養，還可利用當地科研力量，利用專業的工業微生物研究所培養菌種後再接種培養，如PVA（聚乙烯醇）好氧消化即有專門好氧菌。此法，投資大，周期長，只有特殊情況才用。

污水菌種的優勢

1、培養周期短：生物接觸氧化法培菌能2-3天快速掛膜，附著在填料上的菌種好氧池是黃棕色，用手接觸時可以感覺到鼻涕一樣黏黏的感覺，同時，產污泥量很少，不需要經常排污泥，排泥周期半個月或者一個月不等；

活性污泥法陪菌，以污泥作為附著點，然後投加固體粉末菌種，可以縮短單獨使用活性污泥培養的周期，周期大概能減少到一半。

2、處理范圍廣：固體粉末微生物菌種能有效去除廢水中的BOD，COD，SS，氨氮，總氮指標，細菌對總磷的處理有限，總磷去除主要與污水處理工藝結構有很大的關系。

3、穩定性強：污水生化池不光需要培養菌種周期快，同時對於後期新的穩定運行也是很重要。

H. 當水中的微生物不夠多時我們可以用什麼來培養微生物

如果是從自然界的水體中取來的水，加點淤泥就可以了，或者是加點葡萄糖之類的速效營養物就可以了。

I. 污水處理微生物菌種如何培養

1、甘度復合菌種：降解COD/BOD/氨氮/總氮/總磷等污染物；助力新老系統快速啟動。

復合菌種主要是降解COD/BOD/氨氮/總氮/總磷等污染物，復合菌種是一個復合型菌種，屬於兼性菌種，主要成分硝化細菌屬、反硝化細菌屬、芽孢桿菌屬、假單胞菌屬和活化酶以及多糖等等。同時應用於新老系統啟動也具有非常好的效果。

2、 甘度硝化細菌：主要降解氨氮

氨氮的去除所用的細菌是硝化細菌，硝化細菌屬於好氧菌種，主要應用於好氧池，其成分主要是亞硝酸菌和硝酸菌組成。

3、 甘度反硝化細菌：主要降解總氮

總氮的去除所用的細菌是反硝化細菌，屬於厭氧菌，主要應用於厭氧池或缺氧池，其主要成分是假單胞菌屬、芽孢桿菌科等等。­­­

硝化階段

硝化階段：含氮有機物（有機氮）在有氧貨無氧環境中被氨化為氨氮，改部分污水進入有氧的處理構築物後，在亞硝酸細菌和硝化菌的做一下轉化為硝酸鹽氮，為後續反硝化提供准備。

控制條件：

1、溶解氧：溶解氧控制在2~3mg/l之間，溶解氧低於0.6mg/l硝化過程將受到較大抑制，

2、水溫：硝化菌比較合適的水溫25~35℃之間。通常低於5℃時，細菌的活性會受到抑制，硝化菌就很難發揮它的作用。

3、PH值：硝化菌選擇在的PH值7.5~8.5之間

4、底物濃度：硝化細菌是自養型好氧菌，底物濃度對於硝化菌不是其生產的必要因素。

5、污泥齡：需要保證好氧系統的微生物有足夠的硝化菌，提供硝化菌的濃度，通常將污泥齡控制在10d左右。

反硝化階段

反硝化階段：承接硝化段的產物硝酸鹽氮，對其進行反硝化反應，使硝酸鹽氮轉化為氮氣排出水體。

PH值：反硝化過程合適的PH值6.5~7.5，PH值控制不當，將影響反硝化細菌的生長速率及反硝化酶的活性。

水溫：反硝化菌和硝化菌對水溫的要求基本相同，反硝化菌耐受高水溫較硝化菌強，一般在20~40℃。

底物濃度：底物濃度對於反硝化的進行至關重要，BOD5/RKN>4.0，否則需要補充底物（投加碳源）。

溶解氧：反硝化進行需要嚴格控制溶解氧，一般控制在DO>0.5mg/l,反硝化菌屬於兼性菌，有氧和無語條件下皆可生存，我們需要利用的是反硝化菌無氧代謝。

培菌方法：

1、所謂活性污泥培養，就是為活性污泥的微生物提供一定的生長繁殖條件，即營養物，溶解氧，適宜溫度和酸鹼度。

（1）營養物：即水中碳、氮、磷之比應保持100∶5∶1。

（2）溶解氧：就好氧微生物而言，環境溶解氧大於0.3mg/l，正常代謝活動已經足夠。但因污泥以絮體形式存在於曝氣池中，以直徑500µm活性污泥絮粒而言，周圍溶解氧濃度2mg/l時，絮粒已低於0.1mg/l，好氧菌生長緩慢，所以曝氣池溶解氧濃度常需高於3－5mg/l，常按5－10mg/l控制。調試一般認為，曝氣池出口處溶解氧控制在2mg/l較為適宜。

（3）溫度：任何一種細菌都有一個適生長溫度，隨溫度上升，細菌生長加速，但有一個低和高生長溫度范圍，一般為10－45ºC，適宜溫度為15－35ºC，此范圍內溫度變化對運行影響不大。

（4）酸鹼度：一般PH為6－9。特殊時，進水高可為PH 9－10.5，超過上述規定值時，應加酸鹼調節。

培菌法：

（1）生活污水培菌法：在溫暖季節，先使曝氣池充滿生活污水，悶曝（即曝氣而不進污水）數十小時後，即可開始進水。引進水量由小到大逐漸調節，連續運行數天即可見活性污泥出現，並逐漸增多。為加快培養進程，在培菌初期投加一些濃質糞便水或米泔水等，以提高營養物濃度。特別注意，培菌時期（尤其初期）由於污泥尚未大量形成，污泥濃度低，故應控制曝氣量，應大大低於正常期曝氣量。

（2）干泥接種培菌法：取水質相同已正常運行的污水系統脫水後的干污泥作菌種源進行接種培養。一般按曝氣池總溶積1％的干泥量，加適量水搗碎，然後再加適量工業廢水和濃糞便水。按上述的方法培菌，污泥即可很快形成並增加至所需濃度

（3）數級擴大培菌法：根據微生物生長繁殖快的特點，仿照發酵工業中菌種→種子罐→發酵罐數級擴大培菌工藝，分級擴大培菌。如某工程設計為三級曝氣池，此時可先在一個池中培菌，在少量接種條件下，在一個曝氣池內培菌，成功後直接擴大至二三級。

（4）工業廢水直接培菌法：某些工業廢水，如罐頭食品、豆製品、肉類加工廢水，可直接培菌；另一類工業廢水，營養成分尚全，但濃度不夠，需補充營養物，以加快培養進程。所加營養物品常有：澱粉漿料、食堂米泔水、面湯水（碳源）；或尿素、硫氨、氨水（氮源）等，具體情況應按不同水質而定。

（5）有毒或難降解工業廢水培菌：有毒或難降解工業廢水，只能先以生活污水培菌，然後再將工業廢水逐步引入，逐步馴化的方式進行。