A. 微生物檢驗標本採集和運送原則
采樣時機
抗生素使用前(停用抗生素3至5天或下次用葯前)采樣
采樣方法
採集無菌部位的標本應嚴格無菌操作,非無菌部位盡量減少正常菌群的污染,采樣量足。
采樣容器
專用的無菌,防滲漏,有蓋,無酸、鹼、防腐劑及消毒劑污染。
送檢
盡快送檢,一般不超過2小時。
若不能及時送檢可於4-8℃保存,但對可疑淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌等對外界環境敏感的苛養菌感染的患者標本應室溫保存。
當標本量小於1ml時應於15~30分鍾內送檢,防止揮發和乾燥。
微生物檢查的標本採集和運送原則
1.發現感染應及時採集微生物標本作病原學檢查。
2.盡量在抗菌葯物使用前,或停葯3至5天後採集標本,如不能停用抗菌葯物,應於下次抗菌葯物應用前採集。應在感染的急性期或傷口局部治療前採集標本。
3.選擇正確的解剖部位,並以適當的技術、方法與容器收集足量的標本。
4.采樣時應嚴格執行無菌操作,將污染可能降至最低。
5.收集真正感染的病灶處的標本,且避免鄰近區域常居菌群的污染。
6.採用專用無菌容器收集標本。容器須滅菌處理,防止滲漏,但不得使用消毒劑。標本中不可添加防腐劑。
7.采樣後應立即送檢,最好在2h內。如不能及時送檢,應將標本置於適當的儲存環境待送,但不超過24小時。對可疑淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌等對外界環境敏感的苛養菌感染的患者標本應室溫保存。當標本量小於1ml時應於15~30分鍾內送檢,防止揮發和乾燥。
8.盡量不要以一般棉花拭子收集標本,應使用專用的纖維拭子。
9.每份標本都應貼上標簽並標明必要信息,在檢驗申請單上填寫足夠的有關臨床資料。(要標明病區、病人姓名、感染狀況、近期抗菌葯物使用情況、標本來源、檢驗目的、採集部位、採集及送檢時間等)
10.同一天同一檢測目的、相同標本(血液標本除外)一般只需送檢一次(份)。塗片檢查最好和細菌培養同時做!
拓展:
1.糖類的分解:細菌分泌胞外酶,將菌體外的多糖分解成單糖(葡萄糖)後再吸收。各種細菌將多糖分解為單糖,進而轉化為丙酮酸,這一過程是一致的。丙酮酸的利用,需氧菌和厭氧菌則不相同。需氧菌將丙酮酸經三羧酸循環徹底分解成CO2和水。厭氧菌則發酵丙酮酸,產生各種酸類(如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、琥珀酸等)、醛類(如乙醛)、醇類(如乙醇、乙酸甲基甲醇、異丙醇、丁醇等)、酮類(如丙酮)。不同細菌具有不同的酶,對糖類的分解能力和代謝產物也不同,藉此可以鑒別細菌。
2.蛋白質的分解:蛋白質分子在細菌分泌的蛋白質水解酶的作用下,在肽鍵處斷裂,生成多肽和二肽。多肽和二肽在肽酶的作用下水解,生成各種氨基酸。二肽和氨基酸可被細菌吸收,氨基酸在體內脫氨基酶的作用下,經脫氨基作用生成氨。不同種細菌在不同的條件下所進行的脫氨基作用的方式(氧化脫氨基、水解脫氨基、還原脫氨基)及代謝產物也不同。可藉此鑒別細菌。如有些細菌能使色氨酸氧化脫氨基,生成吲哚、C02和H20.細菌還可以用脫羧酶使氨基酸脫羧,生成胺類(如組胺)和C02.
3.細菌對其他物質的分解:細菌除能分解糖和蛋白質外,對一些有機物和無機物也可分解利用。各種細菌產生的.酶不同,其代謝的基質不同,代謝的產物也不一樣,故可用於鑒別細菌。
(1)對其他有機物的分解:如變形桿菌具有尿素酶,可以水解尿素,產生氨。乙型副傷寒沙門菌和變形桿菌都具有脫硫氫基作用,使含硫氨基酸(胱氨酸)分解成氨和H2S.
(2)對其他無機物的分解:產氣腸桿菌分解檸檬酸鹽生成碳酸鹽,並分解培養基中的銨鹽生成氨。細菌還原硝酸鹽為亞硝酸鹽,氨和氮氣的作用,稱為硝酸鹽還原作用。
4.細菌合成代謝產物的意義
(1)熱原質:大多數為革蘭陰性菌合成的菌體脂多糖。注入人體或動物體內能引起發熱反應,故稱熱原質。
(2)毒素和侵襲性酶:細菌產生毒素,包括內毒素和外毒素。內毒素為草蘭陰性菌的脂多糖。外毒素是革蘭陽性菌產生的蛋白質,毒性強且有高度的選擇性。有些細菌還能產生具有侵襲性的酶,如卵磷脂酶、透明質酸酶等。毒素和侵襲襲性酶在細菌致病性中甚為重要。
(3)色素:有水溶性色素(銅綠假單胞菌的色素)和脂溶性色素(金黃色葡萄球菌的色素)。不同細菌產生不同的色素,在鑒別細菌上有一定意義。
(4)抗生素:是由某些微生物代謝過程中產生的、能抑制或殺死另一些微生物和癌細胞的微量生物活性物質。
(5)細菌素:某些細菌菌株產生的一類具有抗菌作用的蛋白質,細菌素作用范圍狹窄,僅對與產生該種細菌素的細菌有近緣關系的細菌才能起作用,如大腸菌素、綠膿菌素、變形菌素和弧菌素等。
B. 生物製品是怎樣進行保存和運輸的呢
1各生產單位應有冷藏設備,供儲存半成品及成品之用。2 下列各項半成品、成品須分別儲存。如條件可能時應單設儲存庫,否則亦應隔開放置,以免混淆。2.1尚未或正在除菌、滅活、解毒之半成品,必須由製品部門隔離儲存。2.2已經除菌、滅活或解毒之半成品,在尚未得出檢定結果前,仍由製造部門分別儲存。2.3 待分裝製品及分裝後在檢定中或檢定合格尚未包裝之製品,由分、包裝室分別儲存。
2.4 已經檢定合格包裝後之製品,應交成品庫。3 儲存的半成品、成品的容器應有明顯標志,注冊品種、規格、數量,以及貯存日期。4 儲存的半成品、成品應填寫庫存貨位卡及分類帳,由專人負責保管、整理,進出均需及時填寫並簽字。5 各種半成品瓶口須嚴密包紮或封口。6 各種半成品、成品按各該製品製造及檢定規程所規定的溫度、濕度及避光要求儲存,應定時檢查和記錄儲存庫的溫度。7 半成品、成品儲存庫應指定專人負責管理。
8 有疑問之半成品或成品須加明顯標志註明「保留」字樣,待決定後再作處理。9 檢定不合格而應予廢棄之半成品或成品,應及時處理。10 超過規定儲存時間之半成品(如菌苗原液等)或已過有效期之成品,應及時廢棄。
11 生物製品在運輸期間應遵守下列原則:
11.1 盡量採用最快速的運輸方法,以縮短運輸時間。11.2 盡量用冷藏方法運輸,盡量避免夏季運送製品。11.3 冬季運輸應注意防止製品發生凍結。
C. 生物標本怎樣包裝搬運
4.1標本的包裝:
根據衛生部《病原微生物實驗室生物安全管理條例》以及國際民航組織《危險品航空安全運輸技術細則》的要求,採用B類包裝法包裝:共三層包裝。
4.1.1第一層:使用抗凝管及促凝管作為包裝保存標本的原始容器。橡膠蓋口蓋緊,保證密封。
4.1.2第二層:使用耐高壓的塑料自封袋包裹,第一層容器,二者之間要填充足夠的吸水材料,這些材料可採用纖維填料、棉花、紙巾或商業化的吸水包裹。
4.1.3第三層:將第二層包裝好的標本放入10L的接收箱,管蓋朝上豎直放置。第三層包裝用於保護第二層包裝在運輸過程中免受物理性損壞。並在接收箱放置海綿、或泡沫減緩運輸途中震動的影響。防止震動引起包裝破損而導致標本外溢。
4.2標本的運輸
4.2.1標本運輸專人專車運輸。護送人員上崗前必須進行生物安全知識培訓. 《危險貨物運輸條例》要求所有參與運輸的人員都應接受適當的培訓。就B 類感染性物質的運輸而言,必須了解運輸物質的性質,以及分類,並採用正確的包裝材料,和方法。
4.2.2運輸過程中因意外引起標本流失、泄露、擴散等事故採取必要措施:
4.2.2.1運輸人員做好個人安全防護後(戴口罩、手套)對現場進行初步處理,樹立警示標志,控制現場。若出現傳染性標本泄露情況,需立即聯系救援,向事故發生所在地疾病預防與控制中心匯報情況,請求支援。
4.2.2.2隨後向中心安全負責人匯報流失、泄漏、擴散標本類別、數量、發生時間、影響范圍等具體情況,安全負責人需立即制定應急方案並執行,必要時應該組織人員趕赴現場處理。若是傳染性標本意外事件,還需積極配合疾控中心醫務人員,指導工作。
4.2.2.2.1對污染區域進行處理時,應當盡可能減少對現場人員及環境的影響。
4.2.2.2.2採取適當的安全處置措施,對泄漏物及受污染的區域、物品進行消毒或者其他無害化處置,污染或可以污染處用有效氯含為2000mg/L次氯酸鈉消毒液噴灑消毒,停留30分鍾後再處理。必要時封鎖污染區域,以防擴大污染。
4.2.2.2.3對感染性廢物區域進行消毒時,消毒工作從污染最輕區域向污染最嚴重區域進行對可能污染的所有使用過的工具也應當用有效氯2000mg/L次氯酸鈉消毒液噴灑消毒。
4.2.2.2.4處理工作結束後,中心安全負責人應當對事件的起因進行調查,又物流負責人填寫《以外事故調查記錄表》,並採取有效的防範措施預防類似事件的發生。
4.3運輸包裝標識
4.3.1 在接收箱正面粘生物危險標簽