微生物純系分離應注意哪些問題

A. 為什麼微生物的純系分離操作必須按無菌操作的方式進行

純系分離，就是要保證你要的菌不被其他的菌種污染，如果不是無菌操作的話，很容易（基本上是一定）會被污染。

B. 影響微生物純系分離的因素有哪些

影響微生物純系分離的因素：
1.其它細菌侵害；
2.生長過程中變異；
3.溫度和濕度要適宜。
簡介：
微生物的純系分離：通過某些方法設法把某種細胞挑選出來達到「菌落線」或「菌株線」的水平的選種方法。
微生物的純系分離的方法：
（1）稀釋平板分離
將待檢樣品按照一定方法逐級稀釋成一定濃度梯度，選擇適合稀釋濃度樣品，並接種，培養一定時間，可獲得微生物
菌落。
（2）平板劃線分離
用接種工具挑取適量樣品（微生物混合樣），按照一定方法在培養基平板上劃線，經過一定時間的培養，可獲得微生
物菌落，進而獲得微生物純培養體。
（3）選擇培養分離
根據所培養的微生物的獨特生理特性，採用針對性強的選擇性培養基進行培養。

C. 微生物的分離純化實驗需要注意什麼

操作無菌，先粗篩根據不同的微生物對底物的應用，後復篩定量測相應的酶活。

D. 我想請教一下各位，在微生物的純系分離過程中應注意哪些問題

注意不要讓其它細菌侵害，防止生長過程中變異！！再就是溫度和濕度要適宜

E. 微生物純種分離的方法有哪些

自然界中的微生物總是雜居在一起 即使一粒土或一滴水中也生存著多種微生物 要研究其中某一種微生物 首先必須將它分離出來 下面介紹幾種純種微生物的分離方法
平板劃線分離 將已經熔化的培養基倒入培養皿中製成平板 用接種環沾取少量待分離的材料 在培養基表面平行或分區劃線（圖5-5）然後 將培養皿放入恆溫箱里培養 在線的開始部分 微生物往往連在一起生長 隨著線的延伸 菌數逐漸減少 最後可能形成純種的單個菌落
液體稀釋法 將待分離的樣品經過大量稀釋後 取稀釋液均勻地塗布在培養皿中的培養基表面 培養後就可能得到單個菌落
利用選擇培養基進行分離 不同的微生物對不同的試劑 染料 抗生素等具有不同的抵抗能力 利用這些特點可配製出適合某種微生物生長而限制其他微生物生長的選擇培養基 用這種培養基來培養微生物就可以達到純種分離的目的
菌絲尖端切割 這種方法適於絲狀真菌 用無菌的解剖刀切取位於菌落邊緣的菌絲的尖端 將它們移到合適的培養基上培養後 就能得到新菌落

F. 求一篇微生物的純系分離及保藏的實驗報告。

實驗報告你自己寫下吧，我好多年沒寫這個了。下面是實驗報告的材料，希望對你有幫助：-）！
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~分離~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
分離技術主要是稀釋和選擇培養。稀釋是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體，使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞，並使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法。如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時，需要結合使用選擇培養法，即選用僅適合於所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體，改變群體中各類微生物的比例，以達到分離的目的。為保證分離到的微生物是純培養，分離時必須用。

~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~保種~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
定期移植法 將菌種接種於所要求的培養基上，在最適溫度中培養，至靜止期或產生成熟的孢子時，置入 5℃的冰箱(或冰庫)保存。在培養和保存的過程中，由於代謝產物的累積而改變了原菌的生活條件，結果菌落群體中的個體就不斷衰老和死亡，因此每5～15天或 1～4個月重新移植一次，具體間隔時間因種而異。凡能人工培養的微生物都可用此法保存。此法不需特殊設備，但煩瑣，費時，而且經常移植容易引起菌種退化。
礦油封藏法
將化學純的液體石蠟(礦油)經高壓蒸氣滅菌，放在40℃恆溫箱中蒸發其中的水分，然後注入斜面培養物中，使液面高出斜面約 1厘米。將試管直立，放在15～20℃室溫中保存。由於在斜面培養物上覆蓋一層液體，既能隔絕空氣，又能防止培養基因水分蒸發而乾燥，可以延長菌種保藏的時間。但注入的液體必須不與培養基混溶、對菌種無毒，不易被利用和揮發。此法適用於酵母菌、芽孢桿菌；不適用於固氮菌、乳酸桿菌、明串珠菌、法門氏菌和毛霉目中的大多數屬種。此法簡便易行，但必須注意防火和污染。
沙土管法
將沙或土過篩、烘乾、裝管、滅菌、然後將菌種製成孢子懸液滴入其中混勻，放到盛氯化鈣的乾燥器里吸除水分，乾燥後保存或用火焰封管後保存。吸附在乾燥沙土上的孢子因缺水而處於休眠狀態，可保存較長時期。此法適用於芽孢桿菌、梭狀芽孢桿菌、放線菌、鐮刀菌等。
麩皮法
將麩皮製成培養基，培養要保存的菌種，待生長良好後，置乾燥器中保存。這是根據中國釀造酒、醋、醬時制麴的經驗所採用的一種保藏方法，適用於穀物微生物區系中的種類。
L－乾燥法
又稱液體乾燥法或真空乾燥法，用含3％谷氨酸鈉的0．1M磷酸緩沖溶液 (pH7.0)做分散媒，將待保藏的微生物製成高濃度的細胞懸液，滴入無菌安瓿瓶中，每管0.05毫升；將安瓿瓶固定在多歧管上，並以水浴保持安瓿瓶內樣品溫度為10℃，在 13.3～1.3帕的真空度下乾燥，火焰封管保存。此法不經凍結，用真實泵迅速抽乾，可避免菌種的凍傷或死亡。廣泛應用於病毒、噬菌體、細菌、酵母菌、藍藻、原生動物等。
梭氏法
將容有 1滴細胞懸液的小管，置於盛有氫氧化鉀或五氧化二磷吸水劑的大試管中，用真空泵抽至1.3帕時，將大試管密封保存。這是為減少細胞死亡率而採取的一種不經凍結、緩慢脫水的乾燥保藏法，適用於多種細菌、真菌。
冷凍真空乾燥法
將細胞懸液每0.1～0.2毫升注入一無菌安瓿瓶，於-40℃預凍1小時，再於-20～30℃、真空度為13.3帕的條件下脫水。在脫水過程後期，安瓿瓶外溫度可逐漸升至25℃。脫水後的樣品含水量應在 3％以下。最後，將安瓿瓶保持真空度 1.3帕，用火焰溶封，置10℃保存。為防止細胞在凍結和脫水過程中損傷或死亡，要用保護劑制備細胞懸液。保護劑有脫脂牛奶、血清、10％蔗糖或葡萄糖溶液等，其作用是通過氧和離子鍵對水和細胞所產生的親合力來穩定細胞成分的構型。此法適用於病毒、衣原體、枝原體、細菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌等的長期保存，是當前保藏菌種的一個重要方法。但是，鹽桿菌、發光桿菌、黏桿菌、阿舒囊霉、多囊霉、擔子菌中的大多數屬種不適用於此法保存。
液態氮超低溫凍結法
用甘油或二甲亞(DMSO)作保護劑制備細胞懸液，分裝入無菌安瓿瓶，每管0.2毫升，在控制溫度下降速率為1℃/分鍾的條件下預凍至-40℃，然後立即放入液氮生物貯存罐中氣相(-150℃)保存。恢復培養時，先直接侵入38℃水浴中解凍 5～10分鍾，再種植於適宜培養基內培養。這是根據在低於-130℃時一切生化反應處於停止狀態、微生物也不能進行代謝活動而設計的凍結法。為避免凍死、凍傷和細胞內形成大量冰晶，用保護劑制備懸液並控制預凍時的冷卻速率和解凍時融化速率。微生物的大多數屬種適於慢速凍結和快速解凍。此法適用於病毒、枝原體、各種細菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌、藍藻等。

G. 微生物各種分離方法的優缺點

最常用的兩種方法：
1．平板劃線分離法
把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平板培養基，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養後生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種
優點：可以觀察菌落特徵，對混合菌進行分離。
缺點：不能計數，一般用於從菌種的分離純化。
例如：篩選大腸桿菌菌種。
2．稀釋塗布平板法
將菌液進行一系列的梯度稀釋，然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。
優點：可以計數，可以觀察菌落特徵。
缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不幹燥效果不好，容易蔓延。一般用於平板培養基的回收率計數。
例如：測定純凈水中大腸桿菌的含量。

H. 在微生物實驗中分離純化操作過程中注意哪些問題

無菌操作、純培養技術、單孢分離技術、細胞染色技術、顯微觀察技術,這些是微生物分離純化操作所必須的技術,也是必須注意的問題.

I. 微生物分離方法

微生物分離法是獲得微生物純培養物的一種分離方法。通過這個方法可實現一種微生物的培養，或獲得一個細胞的後代。其具體方法有：

1、稀釋倒平皿法。將待分離的材料作一系列稀釋，取不同稀釋度適量塗布於固體培養基平板上或與已熔化的固體培養基一起傾注入平板內，經過培養即有一個微生物細胞繁殖來的單個菌落。

2、劃線法。先將已熔化的固體培養基製成平板，待凝後，取分離材料在上面劃線，可作平行劃線、扇形劃線或其他形狀的連續劃線，使菌樣逐漸減少，最後得到單個孤立的菌落。

(9)微生物純系分離應注意哪些問題擴展閱讀：

微生物分離技術的應用措施：

1、減少毒性氧物質的毒害作用：由於常規培養方法使用的高濃度營養基質不利於微生物生長，適當降低營養基質的濃度可以減弱這種不利影響。發現低濃度基質的培養基培養出的細菌在數量和種類上均多於高濃度基質的培養基，但營養濃度過低時會使培養出的微生物數量反而下降。

2、維持微生物間的相互作用：在培養基中加入微生物相互作用的信號分子就可簡單模擬微生物間的相互作用，滿足微生物生長繁殖的要求。

3、供應新型的電子供體和受體：不同微生物的代謝過程不同，因此對反應的底物要求也不盡相同。供應微生物需要的特有底物有助於新陳代謝反應的進行及微生物的正常生長。大量的研究表明，將新穎的電子供體和受體應用到微生物培養中，能夠發現未知的生理型微生物。

4、分散微生物細胞：自然界中很多微生物聚集生長，形成「絮體」和「顆粒」等，致使其內部的微生物不易被培養。對「絮體」和「顆粒」進行適度的超聲處理，將細胞分散再進行培養，可以使更多的微生物接觸培養基而得到培養。

5、延長培養時間：對「寡營養菌」的培養，可適當延長培養時間，使其能長至肉眼可見的尺度。當然培養時間不能無限增長，因為培養時間越長，對培養環境的無菌要求就越高[4]。

6、利用瓊脂替代物：瓊脂對某些微生物具有毒性作用，採用無害且凝結作用較好的替代物質作為培養基固化劑，可以增加微生物的可培養性。

J. 採用稀釋平板法分離微生物的過程中,應該注意哪些問題

1.全過程要在無菌條件下進行
2.接種環使用前在酒精燈上灼燒至紅熱
3.蘸取少量菌液,先在培養皿上劃一條,不要轉動接種環
塗布平板操作的步驟: ①將塗布器浸在盛有酒精的燒杯中. ②取少量菌液,滴加到培養基表面. ③將沾有少量酒精的塗布器在火焰上引燃,待酒精燃盡後,冷卻 8～10s. ④用塗布器將菌液均勻地塗布在培養基表面.
滅菌後,培養基冷卻到 55℃後應及時進行倒平板操作.如果不能及時操作,需要將培 養基放到 55℃左右的電熱箱中保溫,以防止瓊脂凝固
實驗後,所有用過的培養基,培養液等都需要統一進行高壓蒸汽滅菌後再丟棄,否則 將會造成環境污染