高溫生物監測怎麼看

㈠ 3M生物培養指示劑的壓力蒸汽滅菌生物監測

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該壓力蒸汽滅菌生物培養指示劑用於壓力蒸汽滅菌效果的生物監測(包括下排氣鍋和預真空鍋);通過培養基顏色變化，反應嗜熱脂肪桿菌芽孢是否存活，從而判斷壓力蒸汽滅菌生物監測結果。
1. 將壓力蒸汽滅菌生物培養指示劑放於一標准測試包中;
2. 按照國家規范, 分別將測試包放於鍋內不同位置;
3. 滅菌完畢, 取出該生物指示劑;
4. 擠破內含的安瓿, 與一支對照管一起放於56℃培養鍋內培養;48小時後閱讀結果。
結果閱讀：
1.培養後指示管不變色(呈紫色), 表示滅菌通過;
2.培養後指示管變色(呈黃色), 表示滅菌不通過,(必須及時查出滅菌失敗原因)。
3.同時培養的對照管應為陽性(呈黃色), 如陰性,可能的原因為: 培養條件不符合要求; 生物指示劑有問題; (應及時查出陰性原因)。
注意事項：
1. 滅菌完畢, 含生物指示劑的包裹很熱並有一定壓力; 需至少冷卻10分鍾以上, 否則可能引起塑料管內的安瓿破裂, 飛濺的碎片導致損傷;
2. 只有對照管為陽性, 其生物監測結果才算有效。
3. 貯存於室溫: 15-30℃; 相對濕度為35-60%;避免靠近滅菌器和化學消毒劑。
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該生物指示劑可用以121℃下排氣和132℃預真空壓力蒸汽滅菌鍋。
3M™ ATTESTTM壓力蒸汽滅菌生物培養指示劑(快速)在與3M ATTEST 290 培養鍋共用時, 通過酶活性的滅活與否，探測嗜熱脂肪桿菌芽孢是否存活，從而判斷壓力蒸汽滅菌結果。
使用方法:
1－在生物指示劑標簽上註明滅菌器鍋號, 負荷數量, 滅菌日期; 不要在指示劑的瓶或蓋上另貼一個標簽。將生物指示劑放於一個標准測試包內，並置於最難滅菌的位置。
2- 將含有生物指示劑的測試包放在滅菌器最難滅菌的位置，通常是滅菌器底層，近門或排氣口上面。
3- 正常裝載。
4－滅菌循環完畢, 取出生物指示劑。
5- 滅菌結束後，從滅菌器內取出含有生物指示劑的測試包，打開散熱5分鍾後才能取出生物指示劑。同時在壓碎安瓿之前，讓生物指示劑在培養鍋外再冷卻10分鍾後才能壓碎，然後進行生物培養。
6－檢查生物指示劑標簽上的化學指示劑，顏色由玫瑰色變成棕色證明生物指示劑經過壓力蒸汽滅菌過程的處理。該顏色的變化並非表明該處理達到滅菌的目的，如果化學指示劑沒有變化，請檢查滅菌過程。
7－戴上防護眼鏡，擠碎安瓿，然後培養生物指示劑。詳細步驟請參閱3M ATTEST 290 培養鍋操作說明。
8－每次培養須同時培養一個未滅菌過的生物指示劑進行陽性對照，陽性對照生物指示劑與經過滅菌處理的生物指示劑為相同生產日期和批號。
陽性對照的目的是保證：1）－正確的培養條件
2）－指示劑的活性（不適當的貯存條件可能影響有效期內的指示劑活性）
3）－3M ATTEST 290 培養鍋功能完好
9－在3M ATTEST 290 培養鍋（培養溫度62+/-20C）內，培養陽性對照和已處理的指示劑3小時，讀出最終結果。陽性對照必須得出熒光陽性結果(閱讀器顯示為紅燈或+)，如陽性對照讀出熒光陰性(綠燈或-)，應檢查培養鍋溫度和操作過程，直至陽性對照為陽性結果，生物監測的結果才是有效的。對於經過滅菌處理的指示劑，熒光陽性(紅燈或+)表明滅菌過程失敗，熒光陰性(綠燈或-)表明滅菌過程合格。
10－如果需要通過顏色變化檢測生物監測結果，應將生物指示劑放在培養鍋內繼續培養。同時隨時監測陽性結果的出現，如8、12、24，直至168小時（7天），最終視覺效果應在168小時（7天）得出。黃色表明細菌生長，滅菌過程失敗。168小時（7天）沒有顏色變化（培養基為紫色）表明滅菌過程合格。
11－對任何為陽性生物監測結果應立即採取行動，如追回同鍋次的滅菌物品，和尋找原因。直至生物指示劑的結果呈陰性。
注意事項:
冷卻之前壓碎或過度處理生物指示劑可能導致玻璃安瓿的破碎, 飛濺的碎屑會使人員受傷; 因此建議在從滅菌器內取出生物指示劑時戴防護眼鏡和手套, 在壓碎生物指示劑時也需要戴防護眼鏡。
禁忌：該生物指示劑不能用於121℃預真空和132℃下排氣壓力蒸汽滅菌鍋，及乾熱、化學蒸汽、環氧乙烷和其他的低溫滅菌過程的生物監測。
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3M™Attest™壓力蒸汽滅菌標准生物測試包能夠可靠地檢測壓力蒸汽滅菌過程的生物監測結果。通過培養基顏色變化，反應嗜熱脂肪桿菌芽孢是否存活，從而判斷壓力蒸汽滅菌生物監測結果。該生物測試包用於132℃預真空壓力蒸汽滅菌器時在132℃運行≥4分鍾。
1-在生物測試包標簽上註明滅菌器，負荷數，滅菌日期，將測試包置於滅菌器最難滅菌的位置。
2-最難滅菌的位置，通常是底層，近門或排氣口上面。
3-正常裝載。
4-滅菌循環完畢，取出生物測試包。
注意事項：
冷卻之前壓碎或過度擠壓生物指示劑可能導致玻璃安瓿瓶的破碎，飛濺的碎屑會使人員受傷。因此建議在從滅菌器內取出生物測試包時戴防護眼鏡和手套，在從測試包內取出及壓碎生物指示劑時也需要戴防護眼鏡。
1－從滅菌器內取出測試包，打開散熱5分鍾後才能取出生物指示劑，在壓碎之前，讓生物指示劑在培養器外再冷卻10分鍾後才能壓碎。
2－檢查生物指示劑標簽上的化學指示劑，顏色由玫瑰色變成棕色證明生物指示劑經過壓力蒸汽滅菌過程的處理。該顏色的變化並非表明該處理達到滅菌的目的，如果化學指示劑沒有變化，請檢查滅菌過程。
3－戴上防護眼鏡，擠碎安瓿瓶，然後在56±2°C培養生物指示劑。
4－每次培養須同時培養一個未處理的測試包的生物指示劑進行陽性對照，包內陽性對照生物指示劑與處理的生物指示劑為相同製造日期和標號。
陽性對照的目的是保證：1）－正確的培養條件
2）－指示劑的活性（不適當的貯存條件可影響有效期內的指示劑活性）
3）- 培養基促進細菌快速生長的能力
5－通過顏色變化檢測生物監測結果，隨時監測陽性結果出現，如8、12、24，直至48小時（2天）。最終視覺效果應在48小時（2天）得出。黃色表明細菌生長，滅菌過程失敗。48小時（2天）沒有顏色變化（培養基為紫色）表明滅菌過程合格。
8－對任何為陽性生物監測結果應立即採取行動，直至生物指示劑的結果呈陰性。
禁忌：該生物指示劑不能用於121℃預真空和132℃下排氣壓力蒸汽滅菌鍋，及乾熱、化學蒸汽、環氧乙烷和其他的低溫滅菌過程。
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3M™Attest™壓力蒸汽滅菌標准生物測試包(快速) 內含有3M™壓力蒸汽滅菌生物指示劑(快速)，在與3M™Attest™閱讀器配合使用時，能夠迅速可靠地檢測壓力蒸汽滅菌過程的生物監測結果。
通過閱讀器觀測熒光發生與否或者後繼培養基顏色變化與否，反應嗜熱脂肪桿菌芽孢是否存活，從而判斷壓力蒸汽滅菌生物監測結果。該生物測試包用於132℃預真空壓力蒸汽滅菌器時在132℃運行≥4分鍾。
1-在生物測試包標簽上註明滅菌器，負荷數，滅菌日期，並將測試包置於滅菌器最難滅菌的位置。
2-最難滅菌的位置，通常是底層，近門或排氣口上面。
3-正常裝載。
4-滅菌循環完畢，取出生物測試包。
注意事項：
冷卻之前壓碎或過度擠壓生物指示劑可能導致玻璃安瓿瓶的破碎，飛濺的碎屑會使人員受傷。因此建議在從滅菌器內取出生物測試包時戴防護眼鏡和手套，在從包內取出生物指示劑及壓碎時也需要戴防護眼鏡。
1－從滅菌器內取出測試包，打開散熱5分鍾後才能取出生物指示劑，在壓碎之前，讓生物指示劑在閱讀器外再冷卻10分鍾後才能壓碎，不要用手指壓碎玻璃安瓿瓶。
2－檢查生物指示劑標簽上的化學指示劑，顏色由玫瑰色變成棕色證明生物指示劑經過壓力蒸汽滅菌過程的處理。該顏色的變化並非表明該處理達到滅菌的目的，如果化學指示劑沒有變化，請檢查滅菌過程。
3－戴上防護眼鏡，擠碎安瓿瓶，然後培養生物指示劑。詳細步驟請參閱Attest™290閱讀器操作說明。
4－每次培養須同時培養一個未處理的生物測試包的指示劑進行陽性對照，包內陽性對照生物指示劑與處理的生物指示劑為相同製造日期和標號。
陽性對照的目的是保證：1）－正確的培養條件
2）－指示劑的活性（不適當的貯存條件可影響有效期內的指示劑活性）
3）－Attest™閱讀器功能完好
5－在Attest™閱讀器60+/-20C內，培養陽性對照和已處理的指示劑3小時，讀出最終結果。陽性對照必須得出熒光陽性結果(閱讀器顯示為紅燈或+)，如陽性對照讀出熒光陰性(綠燈或-)，應檢查閱讀器溫度和紫外燈，直至陽性對照為陽性結果，生物監測的結果才是有效的。對於經過滅菌處理的指示劑，熒光陽性(紅燈或+)表明滅菌過程失敗，熒光陰性(綠燈或-)表明滅菌過程合格。
6－如果通過顏色變化檢測生物監測結果，應在閱讀器內繼續培養，如培養基仍為紫色，檢查閱讀器溫度和貯存條件。該指示劑應在專門的閱讀器60+/-20C的濕性環境中培養，避免乾燥。隨時監察陽性結果的出現,如8、12、24，直至168小時（7天）。最終視覺效果應在168小時（7天）得出。黃色表明細菌生長，滅菌過程失敗。168小時（7天）沒有顏色變化（培養基為紫色）表明滅菌過程合格。
7－對任何陽性生物監測結果應立即採取行動，直至生物測試包內生物指示劑的結果呈陰性。
禁忌：該生物測試包不能用於121℃預真空和132℃下排氣壓力蒸汽滅菌鍋，及乾熱、化學蒸汽、環氧乙烷和其他的低溫滅菌過程。
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該產品用於壓力蒸汽滅菌過程常規檢測。該產品用於121°C（≥30分鍾）下排氣或132°C（≥4分鍾）預真空壓力蒸汽滅菌器中裝載棉布包、金屬器械及硬質容器等的滅菌監測。每個測試包含一個1292 3M™ATTEST™壓力蒸汽滅菌生物培養指示劑(快速)(棕色瓶蓋)，一片記錄卡，和一個1243 3MTM壓力蒸汽滅菌包內化學指示卡(爬行式)。在蒸汽條件下，化學指示卡中的黑色顏料染料條達到或通過ACCEPT區，並且1292安瓿瓶上的化學指示劑由玫瑰色變為棕色，同時培養和閱讀1292生物指示劑。
1292 3M™ATTEST™壓力蒸汽滅菌生物培養指示劑(快速) 是一種雙重閱讀生物指示系統，當結合3M ATTEST 190/290閱讀器共用時，可以快速可靠的監測壓力蒸汽滅菌過程。1292 3M™ATTEST™壓力蒸汽滅菌生物培養指示劑(快速) 通過酶活性的滅活與否，探測嗜熱脂肪桿菌芽孢是否存活。通過非熒光培養基中酶分解產生的熒光劑來檢測酶的存在。熒光劑的產生可以通過3M ATTEST 190/290閱讀器檢測。熒光劑的變化指示壓力蒸汽滅菌過程失敗。
1292 3M™ATTEST™壓力蒸汽滅菌生物培養指示劑(快速) 也可以通過可見的顏色變化判斷嗜熱脂肪桿菌芽孢的存在。嗜熱脂肪桿菌芽孢的繁殖和代謝會產生酸性副產品，pH降低導致培養基顏色由紫色變為黃色，指示壓力蒸汽滅菌過程的失敗。然而，由於3小時熒光結果的高靈敏性，就沒必要培養1292 3M™ATTEST™壓力蒸汽滅菌生物培養指示劑(快速)超過3小時。
使用方法:
1. 將該測試包標簽朝上放在滿負載的滅菌器中最難滅菌的區域，通常為滅菌器底層、近門處和排氣口上方。
2. 按照程序運行滅菌循環。
3. 滅菌循環結束後，佩戴好防護眼鏡和手套將滅菌器的門完全打開冷卻至少5分鍾，然後取出測試包。
4. 打開測試包冷卻5分鍾，然後取出生物指示劑再冷卻10分鍾後才能壓碎。
5. 取出指示劑。
6. 閱讀1243化學指示卡。當黑色顏料塊到達化學指示卡的ACCEPT窗口時說明整個滅菌負荷達到滅菌條件；當黑色顏料塊沒有到達化學指示卡的ACCEPT窗口時即在REJECT區域時說明未達到滅菌條件。視為滅菌失敗，此時須察看滅菌過程。
7. 檢查1292生物指示劑標簽上的化學指示劑，顏色由玫瑰色變成棕色證明生物指示劑經過壓力蒸汽滅菌過程的處理。該顏色的變化並非表明該處理達到滅菌的目的，如果化學指示劑沒有變化，請檢查滅菌過程。
8. 在1292生物指示劑標簽上註明滅菌器鍋號, 負荷數量, 滅菌日期。
9. 在記錄卡和1243化學指示卡背面填寫必要的滅菌信息作為永久記錄；記錄生物指示劑的監測結果。
10. 丟棄測試包，因為該測試包為一次性使用，反復使用導致測試結果無效。
11. 戴上防護眼鏡，擠碎安瓿，然後培養生物指示劑。詳細步驟請參閱3M ATTEST 190/290 培養鍋操作說明。
12. 每次培養須同時培養一個未滅菌過的1292生物指示劑進行陽性對照，陽性對照生物指示劑與經過滅菌處理的生物指示劑為相同生產日期和批號。
13. 在陽性對照1292指示劑標簽上註明C和日期。擠碎安瓿，然後培養陽性對照生物指示劑。詳細步驟請參閱3M ATTEST 190/290 培養鍋操作說明。
14. 在3M ATTEST 190/290 培養鍋內，培養陽性對照和已處理的指示劑3小時，讀出最終結果。
15. 得到結果後，可丟棄生物指示劑。也可以通過陽性對照生物指示劑的目測顏色變化來指示蒸汽滅菌過程。這樣可以確保：
 正確的培養條件
 指示劑的活性（不適當的貯存條件可能影響有效期內的指示劑活性）
 培養基的能力
3M ATTEST 190/290 培養鍋功能完好
黃色表明細菌生長，滅菌過程失敗。沒有顏色變化表明滅菌過程合格。最終陰性結果應在培養48小時後得出。陽性對照為陽性結果時，生物監測的結果才是有效的。
16. 記錄經過滅菌過程和陽性對照指示劑的結果。對任何結果為陽性的生物監測結果應立即採取行動。如追回同鍋次的滅菌物品，和尋找原因。直至生物指示劑的結果呈陰性。
警告：
冷卻之前壓碎或過度處理生物指示劑可能導致玻璃安瓿的破碎，飛濺的碎屑會使人員受傷，因此需要注意以下事項：
 將安瓿瓶擠碎前需要冷卻一定時間
 從滅菌器內取出生物指示劑時戴防護眼鏡和手套
 在壓碎生物指示劑時也需要戴防護眼鏡
 不要用手指直接擠碎玻璃安瓿瓶
 不要在手指間滾動瓶子避免弄濕孢子帶

㈡ 怎樣進行高壓滅菌生物監測法

用生物指示劑（自含式）：
1、將自含式生物指示劑置於滅菌最難達到的位置；
2、對負載滅菌，應根據有關規定，放置遍及負載的足夠數量的自含式生物指示劑。註：建議不少於2個，通常每個循環使用10個。
3、使負載暴露於一個滅菌循環；
4、暴露後，在負載冷卻或接觸空氣時盡快取出自含式生物指示劑；
5、壓碎裝有培養基的小玻璃瓶；
6、在適宜條件下培養，達規定時間後進行觀察，讀取結果；
7、若經過一個滅菌周期後，若有芽孢存活，則培養液會變渾濁或由紫色變為黃色；若芽孢被全部殺死，則培養液會保持最初的顏色。
8、記錄試驗結果；
9、陽性樣品需經高壓蒸汽滅菌處理。

自含式生物指示劑是一種帶培養液的生物指示劑，根據其構造的不同可分為兩類，一類是將菌片與裝有培養液的小玻璃安瓿同放在一塑料軟管中，軟管頂端有濾紙封好的通氣孔，滅菌後壓碎安瓿，培養液與菌片混合之後培養觀察；另一類是將培養液與細菌芽孢一同封於小玻璃安瓿中製成，滅菌後直接進行培養觀察。不同類型的自含式生物指示劑適用於不同的滅菌方法、滅菌環境。自含式生物指示劑使用方便，具有無需無菌移種和無菌配製培養基、可避免假陽性結果、且培養時間短等優點，在醫療衛生及工業領域應用廣泛。

㈢ 醫用高壓鍋生物指示劑監測方法

每周監測一次，可以用自含式的壓力蒸汽滅菌生物指示劑，隨同待滅菌物品一起放到裡面進行滅菌，滅菌後56℃培養48小時，觀察顏色變化，如顏色依然為淡紫色，說明滅菌合格；注意，要有一支沒經過滅菌的作陽性對照試驗。

㈣ 高壓滅菌的溫度,時間,適用范圍,如何對高壓滅菌效果進行監測

壓力蒸汽滅菌效果監測包括物理監測、化學監測和生物監測。
(1)物理監測：每次滅菌應連續監測並記錄滅菌時的溫度、壓力和時間等滅菌參數。溫度波動范圍在+3℃以內，時間滿足最低滅菌時間的要求，同時應記錄所有臨界點的時間、溫度與壓力值，結果應符合滅菌的要求。
(2)化學監測：包括包外、包內化學指示物監測。具體要求為滅菌包包外應有化學指示物，高度危險性物品包內應放置包內化學指示物，放於包內最難滅菌的部位。通過觀察化學指示物顏色的變化，判定是否達到滅菌合格要求。採用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時，應直接將包內化學指示物置於待滅菌物品旁進行化學監測。
(3)生物監測：將嗜熱脂肪桿菌芽孢片製成標准生物測試包、生物PCD（滅菌過程驗證裝置），或使用一次性標准生物測試包，對滅菌器的滅菌質量進行生物監測。將生物監測包置於滅菌器最難滅菌的部位，並設陽性對照和陰性對照。根據微生物芽孢的死亡情況來判斷滅菌是否成功，考核滅菌器負荷是否達到無菌保障水平，這是確定壓力蒸汽滅菌是否有效的最可靠的方法

㈤ 微生物生長的常用檢測方法

一、生長量測定法

1.1體積測量法：又稱測菌絲濃度法。

通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養液（如10毫升）放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間（如5分鍾）和轉速（如5000rpm），離心後，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物，結果會有一定偏差。

1.2稱乾重法：

可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10-20%。在離心法中，將一定體積待測培養液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，並用清水離心洗滌1-5次，進行乾燥。乾燥可用烘箱在105℃或100℃下烘乾，或採用紅外線烘乾，也可在80℃或40℃下真空乾燥，乾燥後稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾後用少量水洗滌，在40℃下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常採用這種方法，如活性乾酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。

1.3比濁法：

微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時，可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.Coli的生長及誘導時間。

1.4菌絲長度測量法：

對於絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管，到入合適

的培養基，卧放，在開口的一端接種微生物，一段時間後記錄其菌絲生長長度，藉此衡量絲狀微生物的生長

二、微生物計數法

2.1血球計數板法:

血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平台，兩嵴的表比兩平台的表面高0.1mm，每個平台上刻有不同規格的格網，中央0.1mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統計一定大格內微生物的數量，即可算出1毫升菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。

2.2染色計數法：

為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色後在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。

2.3比例計數法：

將已知顆粒（如黴菌孢子或紅細胞）濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的'細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。

2.4液體稀釋法：

對未知菌樣做連續十倍系列稀釋，根據估計數，從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15隻裝培養液的試管中，經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然後查最大或然數表MPN（mostprobablynumber）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。

2.5平板菌落計數法：

這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9cm的平板上出現50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養，獲得了單克隆。

2.6試劑紙法：

在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。

2.7膜過濾法：

用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。

2.8生理指標法：

微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化，例如酸鹼度，發酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。

2.9測定含氮量：

大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%，酵母為7.5%，黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱後產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。

2.10測定含碳量：

將少量（乾重0.2-2.0mg）生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在1000C下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標准樣品做標准曲線。

2.11還原糖測定法：

還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是，離心發酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鍾，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。

2.12氨基氮的測定：

方法是，離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02N的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。

2.13其他生理物質的測定：

P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙醯胞壁酸）等含量以及產酸，產氣，產CO2（用標記葡萄糖做基質），耗氧，黏度，產熱等指標，都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，最終產氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如我所在BMP-2的發酵生產上，隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化，判斷細菌的長勢。

拓展：微生物的現代定義

肉眼難以看清，需要藉助光學顯微鏡或電子顯微鏡才能觀察到的一切微小生物的總稱。微生物包括細菌、病毒、真菌和少數藻類等。（但有些微生物是肉眼可以看見的，像屬於真菌的蘑菇、靈芝等。）病毒是一類由核酸和蛋白質等少數幾種成分組成的「非細胞生物」，但是它的生存必須依賴於活細胞。根據存在的不同環境分為空間微生物、海洋微生物等，按照細胞結構分類分為原核微生物和真核微生物。

微生物的主要特徵

體小面大

一個體積恆定的物體，被切割的越小，其相對表面積越大。微生物體積很小，如一個典型的球菌，其體積約1mm，可是其表面積卻很大。這個特徵也是賦予微生物其他如代謝快等特性的基礎。

吸多轉快

微生物通常具有極其高效的生物化學轉化能力。據研究，乳糖菌在1個小時之內能夠分解其自身重量1000-10000倍的乳糖，產朊假絲酵母菌的蛋白合成能力是大豆蛋白合成能力的100倍。

生長繁殖快

相比於大型動物，微生物具有極高的生長繁殖速度。大腸桿菌能夠在12.5-20分鍾內繁殖1次。不妨計算一下，1個大腸桿菌假設20分鍾分裂1次，1小時3次，1晝夜24小時分裂24×3=72次，大概可產生4722366500萬億個（2的72次方），這是非常巨大的數字。但事實上，由於各種條件的限制，如營養缺失、競爭加劇、生存環境惡化等原因，微生物無法完全達到這種指數級增長。 已知大多數微生物生長的最佳pH范圍為7.0 (6.6~7.5)附近，部分則低於4.0。

微生物的這一特性使其在工業上有廣泛的應用，如發酵、單細胞蛋白等。微生物是人類不可或缺的好朋友。

適應強 易變異

分布廣 種類多

微生物對我們生活的影響

微生物對人類最重要的影響之一是導致傳染病的流行。在人類疾病中有50%是由病毒引起。微生物導致人類疾病的歷史，也就是人類與之不斷斗爭的歷史。在疾病的預防和治療方面，人類取得了長足的進展，但是新現和再現的微生物感染還是不斷發生，像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治療葯物。一些疾病的致病機制並不清楚。大量的廣譜抗生素的濫用造成了強大的選擇壓力，使許多菌株發生變異，導致耐葯性的產生，人類健康受到新的威脅。一些分節段的病毒之間可以通過重組或重配發生變異，最典型的例子就是流行性感冒病毒。每次流感大流行流感病毒都與前次導致感染的株型發生了變異，這種快速的變異給疫苗的設計和治療造成了很大的障礙。而耐葯性結核桿菌的出現使原本已近控制住的結核感染又在世界范圍內猖獗起來。

微生物千姿百態，有些是腐敗性的，即引起食品氣味和組織結構發生不良變化。當然有些微生物是有益的，它們可用來生產如乳酪，麵包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必須通過顯微鏡放大約1000 倍才能看到。比如中等大小的細菌，1000個疊加在一起只有句號那麼大。

微生物能夠致病，能夠造成食品、布匹、皮革等發霉腐爛，但微生物也有有益的一面。最早是弗萊明從青黴菌抑制其它細菌的生長中發現了青黴素，這對醫葯界來講是一個劃時代的發現。後來大量的抗生素從放線菌等的代謝產物中篩選出來。抗生素的使用在第二次世界大戰中挽救了無數人的生命。一些微生物被廣泛應用於工業發酵，生產乙醇、食品及各種酶制劑等；一部分微生物能夠降解塑料、處理廢水廢氣等等，並且可再生資源的潛力極大，稱為環保微生物；還有一些能在極端環境中生存的微生物，例如：高溫、低溫、高鹽、高鹼以及高輻射等普通生命體不能生存的環境，依然存在著一部分微生物等等。看上去，我們發現的微生物已經很多，但實際上由於培養方式等技術手段的限制，人類現今發現的微生物還只佔自然界中存在的微生物的很少一部分。

微生物間的相互作用機制也相當奧妙。例如健康人腸道中即有大量細菌存在，稱為正常菌群，其中包含的細菌種類高達上百種。在腸道環境中這些細菌相互依存，互惠共生。食物、有毒物質甚至葯物的分解與吸收，菌群在這些過程中發揮的作用，以及細菌之間的相互作用機制還不明了。一旦菌群失調，就會引起腹瀉。

隨著醫學研究進入分子水平，人們對基因、遺傳物質等專業術語也日漸熟悉。人們認識到，是遺傳信息決定了生物體具有的生命特徵，包括外部形態以及從事的生命活動等等，而生物體的基因組正是這些遺傳信息的攜帶者。因此闡明生物體基因組攜帶的遺傳信息，將大大有助於揭示生命的起源和奧秘。

工業微生物涉及食品、制葯、冶金、采礦、石油、皮革、輕化工等多種行業。通過微生物發酵途徑生產抗生素、丁醇、維生素C以及一些風味食品的制備等；某些特殊微生物酶參與皮革脫毛、冶金、採油采礦等生產過程，甚至直接作為洗衣粉等的添加劑；另外還有一些微生物的代謝產物可以作為天然的微生物殺蟲劑廣泛應用於農業生產。通過對枯草芽孢桿菌的基因組研究，發現了一系列與抗生素及重要工業用酶的產生相關的基因。乳酸桿菌作為一種重要的微生態調節劑參與食品發酵過程，對其進行的基因組學研究將有利於找到關鍵的功能基因，然後對菌株加以改造，使其更適於工業化的生產過程。國內維生素C兩步發酵法生產過程中的關鍵菌株氧化葡萄糖酸桿菌的基因組研究，將在基因組測序完成的前提下找到與維生素C生產相關的重要代謝功能基因，經基因工程改造，實現新的工程菌株的構建，簡化生產步驟，降低生產成本，繼而實現經濟效益的大幅度提升。對工業微生物開展的基因組研究，不斷發現新的特殊酶基因及重要代謝過程和代謝產物生成相關的功能基因，並將其應用於生產以及傳統工業、工藝的改造，同時推動現代生物技術的迅速發展。

經濟作物柑橘的致病菌是國際上第一個發表了全序列的植物致病微生物。還有一些在分類學、生理學和經濟價值上非常重要的農業微生物，例如：胡蘿卜歐文氏菌、植物致病性假單胞菌以及中國正在開展的黃單胞菌的研究等正在進行之中。日前植物固氮根瘤菌的全序列也剛剛測定完成。借鑒已經較為成熟的從人類病原微生物的基因組學信息篩選治療性葯物的方案，可以嘗試性地應用到植物病原體上。特別像柑橘的致病菌這種需要昆蟲媒介才能完成生活周期的種類，除了殺蟲劑能阻斷其生活周期以外，只能通過遺傳學研究找到毒力相關因子，尋找抗性靶位以發展更有效的控制對策。固氮菌全部遺傳信息的解析對於開發利用其固氮關鍵基因提高農作物的產量和質量也具有重要的意義。[10]

在極端環境下能夠生長的微生物稱為極端微生物，又稱嗜極菌。嗜極菌對極端環境具有很強的適應性，極端微生物基因組的研究有助於從分子水平研究極限條件下微生物的適應性，加深對生命本質的認識。

㈥ 怎樣進行壓力蒸汽滅菌生物監測謝謝

1、檢測方法:
將壓力蒸汽滅菌生物指示劑放於標准測試包中，分別將測試包放於鍋內不同位置，滅菌完畢，取出該生物指示劑，擠破內含的安瓿，於56℃培養鍋內培養，48小時後閱讀結果。
2、結果判定:
每個指示劑接種的溴甲酚紫蛋白腖水培養基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白腖水培養基，由紫色變為黃色時，則滅菌過程不合格。
3、注意事項:
監測所用菌片須經衛生部認可，並在有效期內使用。生物指示物監測應1月1次。