『壹』 計算微生物的繁殖數時有哪些常用方法
測定微生物繁殖，一定要計算各個體的數目。
單細胞狀態的細菌和酵母菌--計算各個體的數目
放線菌和黴菌等絲狀生長的微生物--計算其孢子數
1.繁殖數直接計數法
(1)
計數板直接計數法
指採用計數板(細菌計數板或血球計數板)，在光學顯微鏡下直接觀察微生
物細胞並進行計數的方法。(計算一定容積里樣品中微生物的數量)
缺點:
不能區分死菌與活菌;
不適於對運動細菌的計數;
需要相對高的細菌濃度;
個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察;
(2)染色後活菌計數法
採用特定的染色技術進行活菌染色，然後用光學顯微鏡計數的方法。可分別對活菌和死菌進行計數。
例:美藍染色酵母
活細胞→無色
死細胞→藍色
Eg.
細菌經丫啶橙染色後，在紫外光顯微鏡下可觀察
活細胞→橙色熒光
死細胞→綠色熒光
(3)比例計數法死細胞→藍
將已知顆粒濃度的樣品(例如血液)與待測細胞細胞濃度的樣品混勻後在顯微鏡下根據二者之間的比例直接推算待測微生物細胞濃度。
(4)過濾計數法
當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色，並經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積中)的細菌數。
(5)Coulter
電子計數器
菌體與液體導電性不同,
一個細胞通過小孔,電阻增加,形成一個脈沖。
(6)菌絲長度
平板
U行管
2.繁殖數間接計數法
是一種活菌計數法，這是一種依據活菌在液體培養基中會使其變混或在固體培養基上(內)形成菌落的原理而設計。
最常用的是菌落計數法(colony-counting
methods)。
(1)平板菌落計數法
可用澆注平板(pour
plate)或塗布平板(spread
plate)等方法進行。此法適用於各種好氧菌或厭氧菌。
採用培養平板計數法要求操作熟練、准確，否則難以得到正確的結果。
樣品充分混勻;每支移液管及塗布棒只能接觸一個稀釋度的菌液;
同一稀
釋度三個以上重復,取平均值;
每個平板上的菌落數目合適(30-300)，便於准確計
數;
一個菌落可能是多個細胞一起形成，所以在科研中一般用菌落形成單位
(colony
forming
units，
CFU)來表示，而不是直接表示為細胞數。
根據每皿上形成的CFU數乘上稀釋度可推算出菌樣的含菌數。此方法最為常用，
但操作較繁瑣且要求操作者技術熟練--缺點。
國外出現了微型、快速、商品化的用於菌落計數的小型紙片或密封瓊脂板。原
理是利用加在培養基中的活菌指示劑TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)，它可使
菌落在很微小時就染成易於辨認的玫瑰色。
(2)膜過濾培養菌落計數法
當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器，然後將將膜轉到相應的培養基上進行培養，對形成的菌落進行統計。
(3)厭氧菌的菌落計數法
一般可用亨蓋特滾管培養法進行。此法設備較復雜，技術難度很高。
簡便快速的半固體深層瓊脂法，可測定雙歧桿菌(bifidobacteria)和乳酸菌
(lactic
acid
bacteria)等厭氧菌活菌數。
原理:
試管中的深層半固體瓊脂有良好的厭氧性能，並利用其凝固前
可作稀釋用，凝固後又可代替瓊脂平板作菌落計數用的良好性能。
兼有省工、省料、省設備和菌落易辯認等優點!
『貳』 微生物計數方法有哪些我想知道詳細的操作步驟
微生物的顯微直接計數法
一、實驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法，掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多，通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板，一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤（Petrof Hausser）細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同，只是細菌計數板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特製的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數區（圖21-1），計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數區分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數區都由400個小方格組成。
計數區邊長為1mm，則計數區的面積為l mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後，計數區的高度為0.1mm，所以每個計數區的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。
使用血球計數板計數時，先要測定每個小方格中微生物的數量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數量。
已知：1mm3體積=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以：1mm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/4000mm3=4×106個小方格，即系數K=4×106 。
因此：每ml菌懸液中含有細胞數= 每個小格中細胞平均數（N）×系數（K）×菌液稀釋倍數（d）
三、實驗器材
1．活材料：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培養液。
2．器材：顯微鏡、血球計數板、蓋玻片（22mm×22mm）、吸水紙、計數器、滴管、擦鏡紙。
四、實驗方法
1．視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋到10-2），以每小格的菌數可數為度。
2．取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3．將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區，勿使氣泡產生，並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上，不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片後，造成計數區深度的升高。然後加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。4．靜置片刻，將血球計數板置載物台上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區後，再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。
5．計數時若計數區是由16個大方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數。如果是25個大方格組成的計數區，除數上述四個大方格外，還需數中央l個大方格的菌數（即80個小格）。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。
6．對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2—3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），求出每一個小格中細胞平均數（N），按公式計算出每ml（g）菌懸液所含酵母菌細胞數量。
7．測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾，放入盒內保存。
五、實驗作業：
將實驗結果填入下表中：
計數次數 每個大方格菌數 稀 釋
倍 數 試管斜面中的總菌數 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次
『叄』 微生物酵母菌的血球板計數法二室平均值怎麼計算
計數每個取樣中的細胞數和相鄰邊上的細胞數及對角的細胞數，再求平均數。
『肆』 微生物計數方法有哪些
測定微生物計數的方法有很多,主要有以下幾種：
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數.
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數.
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等.
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法.染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞.
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數.
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目.
此法也是統計樣品中活菌的數目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確.
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目.
『伍』 微生物檢驗菌落總數計算方法是什麼
7.1
菌落總數的計算方法
7.1.1
若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平
均值乘以相應稀釋倍數，作為每 g（mL）樣品中菌落總數結果。
7.1.2
若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，按公式（1）計算：
（1）
式中：
N——樣品中菌落數；
∑C——平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和；
n1——第一稀釋度（低稀釋倍數）平板個數；
n2——第二稀釋度（高稀釋倍數）平板個數；
。
d——稀釋因子（第一稀釋度）
若所有稀釋度的平板上菌落數均大於 300 CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可
7.1.3
記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。
若所有稀釋度的平板菌落數均小於 30 CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計
7.1.4
算。
7.1.5
若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小於 1 乘以最低稀釋倍數計算。
若所有稀釋度的平板菌落數均不在 30 CFU～300 CFU 之間，
其中一部分小於 30 CFU 或大於 300
7.1.6
CFU 時，則以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
這里有個例子參考一下以上是<食品安全國家標准食品微生物學檢驗 菌落總數測定>中的計算方法。
『陸』 微生物計數方法有哪些
測定微生物計數的方法有很多,主要有以下幾種： 1.血細胞計數法 將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數. ①此法的缺點是不能區分死菌和活菌. ②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數. ③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化 2.稀釋塗布平板法 原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌. ①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目 ②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示. ③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等. ④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法.染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞. 3.濾膜法 濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數. 此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目. 此法也是統計樣品中活菌的數目. 4.比濁法 原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確. 5.顯微鏡直接計數法 在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況. 另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目.
『柒』 微生物計數方法有哪些
微生物計數方法有：血細胞計數法、稀釋塗布平板法、濾膜法、比濁法、顯微鏡直接計數法等等。
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上，在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數，並求出每個小格所含細菌的平均數，再以此為依據，估算總菌數。
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。
②對壓在小方格界線上的細菌，應當取平均值計數。
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化。
2.稀釋塗布平板法
原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落，來源於樣品稀釋液中的一個活菌。
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，原因是當兩個活多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。
④此法若不培養成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上，經固定染色後在顯微鏡下計數，這樣又稱塗片計數法。染色可用台盼藍，台盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數死細胞和活細胞。