① 如何對一株細菌作出種屬的鑒定
(1)常規鑒定 常規鑒定內容有形態特徵和理化特性。形態特徵包括顯微形態和培養特徵;理化特性包括營養類型、碳氮源利用能力、各種代謝反應、酶反應和血清學反應等。(2)BIOLOG碳源自動分析鑒定 BIOLOG鑒定系統以微生物對不同碳源的利用情況為基礎,檢測微生物的特徵指紋圖譜,建立與微生物種類相對應的資料庫。通過軟體將待測微生物與資料庫參比,得出鑒定結果。(3)分子生物學鑒定 提取細菌基因組DNA,然後PCR擴增16srDNA片段並測序,將結果與GeneBank或者Eztaxon對比分析,一般序列相似度在97%以上就可以認為是同種細菌,該方法也是目前微生物分類學研究普遍採用的鑒定方法。——源自網路
② 分子生物實習鑒定自我鑒定怎麼寫
分子生物實習鑒定自並納我鑒定
(大綱)
一、分子生物實習概述、實習目標的完成情況和取得的成績
二、實兄桐習絕塵沒態度、實習紀律等
三、問題、努力方向
③ 細菌的分子生物學鑒定要怎麼做
是的,要做PCR。
首先你要提出細菌的DNA。
方法如下:
1、液體培養及保種:從斜面上挑取菌苔於液體培養基中放搖床上震盪(轉速160r/min)培養16小時。吸取菌液於1.5ml的經過滅菌的EP管中,再加甘油(30-40%)進行保種。(-80攝氏度保藏2年)
2、提取DNA(CTAB法):
(1)取1.5ml菌液於1.
5ml離心管中,12000r/min離心2min,棄上清。
(2)向沉澱物中加入350ul雙蒸水,重新懸浮沉澱。
(3)加入20ul10%SDS和3ul的蛋白酶K(20mg/ml),溶菌酶3ul,混勻,於50℃溫育1h。
(4)加入50ul
5mol/L
NaCl溶液,充分混勻,再加入50ul
CTAB/NaCl溶液,混合後再65℃溫育30min。
(6)冷卻後加入等體積的酚(沉澱蛋白質):氯仿:異戊醇(增強酚的作用)(25:24:1),小心上下顛倒混勻,12000r/min離心5min,將上清液轉移到新的EP管,重復此步驟2-3次,直至分層界面無白色沉澱。
(7)加入等體積的氯仿:異戊醇(24:1),小心顛倒混勻,12000r/min離心5min將上清液轉移到新的EP管。(純化作用)
(8)加入0.6倍體積的異丙醇,輕輕混合直到DNA沉澱下來,12000r/min離心15min棄上清。
(9)向離心管中加入75%乙醇,12000r/min離心5min洗滌DNA沉澱,小心棄上清,重復洗滌1次,棄上清將離心管倒置於吸水紙上,晾乾。
(10)加入50ul(雙蒸水)/
TE
Buffer溶解DNA於4℃保存。
(11)電泳檢測
6、PCR擴增:(細菌的通用引物為27F和1492R)將提取得到的DNA進行PCR擴增,電泳檢測擴增得到的16S
rDNA(如果菌類分明,條帶清晰,PCR原液可直接送去測序,雙向測通,得到測序序列後到NCBI的BLAST頁面比對,得出鑒定結果)
7、酶切帶型分型確定操作單元:將擴增產物用HhaI和HaeIII兩種限制性內切酶進行酶切,電泳檢測酶切產物,酶切帶型相同的分為一個操作單元。
8、連接轉化:從每一個操基此作單元中選取一株菌的16S
rDNA進行連接實驗。將連接產物轉入感受態細胞中,將感受態細胞塗布於含有Amp的平板上,倒置培養12-16h。
9、克隆子挑選及PCR鑒定:從上一步的平板上挑取單菌落於含有Amp的液體培養基中震盪培養12h,以培養液為模板直接進行PCR擴增鑒定(1000-2000bp)。將含有目的片段的克隆子菌液低溫保存。
10、測序:將含有目的片段的克隆子菌液送去測序。
11、序列拼接:運用DNAMAN軟體對測序得到的序列進行拼接。
12、建樹:對拼接得到的序列用Blast進行比對,最後將比對得到的春沖所有扒鋒殲序列運用MEGA6建立系統發育樹。