微生物樣品如何絞碎

⑴ 微生物檢驗樣品的採集步驟

微生物檢驗樣品的採集步驟

樣品的採集是微生物檢驗的重要組成部分，用於檢驗的樣品數量和狀況具有重要意義。這對取樣人員和制樣人員提出了很高的專業要求，既要保證樣品的代表性和一致性，又要保證整個微生物檢驗過程在無菌操作的條件下進行。微生物檢驗樣品的採集大致分為取樣、包裝密封、標識、樣品的運輸、接收、保存幾個環節。下面是我為大家帶來的關於微生物檢驗樣品的採集步驟的知識，歡迎閱讀。

樣品的取樣

取樣是指在一定質量或數量的產品中，取一個或多個代表性樣品，用於感官、微生物和理化檢驗的全過程。

首先在取樣之前應確認貨、證是否相符。其次取樣工具要達到無菌的要求，對取樣具和一些試劑材料應提前准備、滅菌。如果使用不合適的採集工具，可能會破壞樣品的完整性，甚至使樣品採集毫無意義。

應根據不同的樣品特徵和取樣環境，對取樣物品和試劑進行事先准備和滅菌等操作。另外要保證樣品能夠代表整批產品，其檢測結果應具有統計學有效性，樣品到達實驗室時的狀況應能反映出取樣時產品的真實情況。

取樣時應根據不同的產品類型、產品狀態等選擇不同的取樣方法和標准。

① 包裝食品：對於直接食用的小包裝食品，盡可能取原包裝，直到檢驗前不要開封，以防污染。對於桶裝或大容器包裝的液體食品，取樣前應搖動或用滅菌棒攪拌液體，盡量使其達到均質;取樣時應先將取樣用具浸入液體內略加漂洗，然後再取所需量的樣品，裝入滅菌容器的量不應超過其容量的3/4，以便於檢驗前將樣品搖勻;取完樣品後，應用消毒的溫度計插入液體內測量食品的溫度，並作記錄。盡可能不用水銀溫度計測量，以防溫度計破碎後水銀污染食品;如為非冷藏易腐食品，應迅速將所取樣品冷卻至0～4℃。對於大塊的桶裝或大容器包裝的冷凍食品，應從幾個不同部位用滅菌工具取樣，使樣品具有充分的代表性;在將樣品送達實驗室前，要始終保持樣品處於冷凍狀態樣品一旦融化，不可使其再凍，保持冷卻即可。

② 生產過程中的取樣：劃分檢驗批次，應注意同批產品質量的均一性;如用固定在貯液桶或流水作業線上的.取樣龍頭取樣時，應事先將龍頭消毒;當用自動取樣器取不需要冷卻的粉狀或固體食品時，必須履行相應的管理辦法，保證產品的代表性不被人為地破壞。

③ 液體產品：通常情況下，液態產品較容易獲得代表性樣品。液態產品一般盛放在大罐中，取樣時，可連續或間歇攪拌，對於較小的容器，可在取樣前將液體上下顛倒，使其完全混勻。較大的樣品(100～500ml)要放在已滅菌的容器中送往實驗室，實驗室在取樣檢測之前應將液體再徹底混勻一次。

④ 固體樣品：固態樣品常用的取樣工具有滅菌的解剖刀、勺子、軟木鑽、鋸子和鉗子等。麵粉或奶粉等易於混勻的食品，其成品質量均勻、穩定，可以抽取小樣品檢測(如100 g)。但散裝樣品就必須從多個點取樣，且每個樣品都要單獨處理，在檢測前徹底混勻，並從中取一份樣品進行檢測。肉類、魚類的食品既要在表皮取樣叉要在深層取樣。深層取樣時要小心不要被表面污染。有些食品，如鮮肉或熟肉可用滅菌的解剖刀或鉗子取樣;冷凍食品可在未解凍的狀態下可用鋸子、木鑽或電鑽(一般斜角鑽人)等獲取深層取樣樣品;全蛋粉等粉末狀樣品取樣時，可用滅菌的取樣器斜角插入箱底，樣品填滿取樣器後提出箱外，再用滅菌小勺從上、中、下部位取樣。

⑤ 表面取樣：通過惰性載體可以將表面樣品上的微生物轉移到合適的培養基中進行微生物檢驗，這種惰性載體既不能引起微生物死亡，也不應使其增殖。這樣的載體包括清水、拭子、膠帶等。取樣後，要使微生物長期保存在載體上，既不死亡又不增殖十分困難，所以應盡早地將微生物轉接到適當的培養基中。轉移前耽誤的時間越長，品質評價的可靠性就越差。表面取樣技術只能直接轉移菌體，不能做系列稀釋，只有在菌體數量較多時才適用。其最大優點是檢測時不破壞樣品。

⑥ 空氣樣品的採取：空氣的取樣方法有直接沉降法和過濾法。在檢驗空氣中細菌含量的各種沉降法中，平皿法是最早的方法之一，到目前為止，這種方法在判斷空氣中浮游微生物分次自沉現象方面仍具有一定的意義。過濾法是使定量的空氣通過吸收劑，然後將吸收劑培養，計算出菌落數。

樣品的包裝密封

為保證樣品的完整性，裝有樣品的包裝物應進行封口，以證實其可靠性，即從取樣地點至實驗室這段時間不發生任何變化。可採用自粘膠、特製的紙黏著劑或者石蠟等封口，封口處應留有填寫日期、檢驗人員和貨主簽字的地方，然後蓋上專用的印章。

樣品的標識

取樣過程中應對所取樣品進行及時、准確的標記。取樣結束後，應由取樣人寫出完整的取樣報告。樣品應盡可能在原有狀態下迅速運送或發送到實驗室。

保存的樣品應進行必要的清晰的標記，內容包括：樣品名稱，樣品描述，樣品批號，企業名稱，地址，取樣人，取樣時間，取樣地點，取樣溫度(必要時)，測試目的等。標記應牢固並具防水性，確保字跡不會被擦掉或脫色。所有盛樣容器必須有和樣品一致的標記。在標記上應記明產品標志與號碼和樣品順序號以及其他需要說明的情況。標記應牢固並具防水性，確保字跡不會被擦掉或脫色。當樣品需要托運或由非專職取樣人員運送時，必須封死樣品容器。

樣品的運輸

取樣結束後應盡快將樣品送往實驗室檢驗。如不能及時運送，冷凍樣品應存放在-15℃以下的冰箱或冷庫內;冷藏和易腐食品存放在0～4℃ 冰箱或冷藏庫內;其他食品可放在常溫暗處。微生物檢驗樣品應在取樣後6 h以內送達實驗室進行檢驗。

樣品的運輸過程必須有適當的保護措施(如密封、冷藏等)，以保證樣品的微生物指標不發生變化。運送冷凍和易腐樣品應在包裝容器內加適量的冷卻劑或冷凍劑，但樣品不可與冷卻劑或冷凍劑直接接觸，保證途中樣品不升溫或不融化，必要時可於途中補加冷卻劑或冷凍劑。運送水樣時應避免玻璃瓶搖動，水樣溢出後又迴流瓶內，從而增加污染。如不能由專人攜帶送樣時，也可托運。托運前必須將樣品包裝好，應能防破損，防凍結或防易腐和冷凍樣品升溫或融化。在包裝上應註明“防碎”、“易腐”、“冷藏”等字樣。同時做好樣品運送記錄，寫明運送條件、日期、到達地點及其他需要說明的情況，並由運送人簽字。

樣品的接收

在接收樣品時，實驗室應與送樣人共同相互確認樣品與委託單上的內容是否一致。確認內容一般包括：品名;檢驗目的;檢驗項目;形狀和包裝狀況(同體、粉狀、冷凍、冷藏、零售、批發、無菌包裝等都不同);抽樣數量(個數和質量);抽樣日期及送達日期;抽樣地點;隨貨樣附帶的許可申請單編號;生產國或者生產廠家名稱(進口商品);抽樣者的單位、姓名及有無封印;其他搬運、儲存、檢驗時的注意事項。

樣品的保存

實驗室接到樣品後應在36 h內進行檢測(貝類樣品通常要在6 h內檢測)，對不能立即進行檢測的樣品，要採取適當的方式保存，使樣品在檢測之前維持取樣時的狀態，即樣品的檢測結果能夠代表整個產品。實驗室應有足夠和適當的樣品保存設施(如冰箱或冰櫃等)。保存的樣品應進行必要和清晰的標記，內容包括：樣品名稱，樣品描述，樣品批號，企業名稱、地址，取樣人，取樣時間，取樣地點，取樣溫度(必要時)，測試目的等;樣品在保存過程中應保持密封性，防止引起樣品pH值的變化。

不同類型的樣品，保存方法不同：

① 易腐樣品：要用保溫箱或採取必要的措施使樣品處於低溫狀態(0～4℃)，應在取樣後盡快送至實驗室，並保證樣品送至實驗室時不變質。易腐的非冷凍食品檢測前不應冷凍保存(除非不能及時檢測)。如需要短時間保存，應在0～4℃ 冷藏保存，但應盡快檢驗(一般不應超過36h)，因為保存時間過長會造成樣品中嗜冷細菌的生長和嗜中溫細菌的死亡。

② 冷凍樣品：要用保溫箱或採取必要的措施使樣品處於冷凍狀態，送至實驗室前樣品不能融解、變質。冰凍樣品要密閉後置於冷凍冰箱(通常為-l8℃)，檢測前要始終保持冷凍狀態，防止樣品暴露在二氧化碳氣體中。

③ 其他樣品：應用塑料袋或類似的材料密封保存，注意不能使其吸潮或水分散失，並要保證從取樣到實驗室進行檢驗的過程中其品質不變。必要時可使用冷藏設備

⑵ 請問：怎樣分離提純微生物

1. 稀釋塗布平板法
(1) 倒平板 將肉膏蛋白腖瓊脂培養基， 高氏Ⅰ號瓊脂培養基；馬丁氏瓊脂培養基加熱溶化，待冷至55~60℃， 高氏Ⅰ號瓊脂培養基加入10%酚數滴，馬丁氏瓊脂培養基加入鏈黴素溶液。混勻後分別倒平板，每種培養基倒三皿；
(2) 制備土壤稀釋溶液 稱取土樣10g，放入盛有90ml無菌水並帶入玻璃珠的三角燒瓶，振動約20min，使土樣與水分混合，將細胞分散.用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，然後用無菌吸管從此試管中吸取1ml加入另一個盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此推製成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6不同稀釋的土壤溶液；
(3) 塗布 將上述每種培養基的三個平板地面分別用記號筆寫上10-4，10-5，10-6三種稀釋度，然後用無菌吸管分別由10-4，10-5，10-6三管土壤稀釋液中各取0.1ml對號放入已寫好室溫下靜置5~10min，使菌液吸附進培養基；
(4) 培養 將高氏Ⅰ號瓊脂培養基平板;馬丁氏瓊脂培養基平板倒置於28℃溫室中培養3~5day，肉膏蛋白腖平板倒置於37℃溫室中培養2~3day；
(5) 挑菌落 將培養後長出的單個菌落分別挑取少許細胞接種到上述三種培養基的斜面上，分別置28℃和37℃溫室培養，大菌苔長出後，檢查其特徵是否一致，同時將細胞塗片染色後用顯微鏡檢查是為單一的微生物。若發現有雜菌，需要再一次進行分離、純化，直到獲得純培養。
2.平板劃線分離法
(1)倒平板 按稀釋塗布平板倒平板，並用記號標明培養基名稱，土樣編號和實驗日期；
(2) 劃線 在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環，挑取上述的土壤懸液一環在平板上劃線.劃線的方法很多，但無論採用那種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋，使之形成單個菌落；
(3) 挑菌落 同稀釋塗布平板法，一直到分離的微生物認為純化為止。

⑶ 食品微生物檢測的程序

（1）採集樣品
采樣前要了解所采樣品的來源、加工、儲藏、包裝、運輸等情況，采樣時必須做到：使用的器械和容器需經滅菌，嚴格進行無菌操作；不得加防腐劑；液體樣品應攪拌均勻後才去采樣，固體樣品應在不同部位採取以使樣品具代表性；取樣後及時送檢。
國際食品微生物標准委員會(ICMSF)制定的食品微生物學分析采樣方法，目前已在國內外被逐步推廣採用。ICMSF根據以下原則來規定不同的采樣數：①各種微生物本身對人的危害程度各有不同；②食品經不同條件處理後，其危害程度可分為3種情況：危害度降低；危害度未變；危害度增加。依據ICMSF采樣方法規定，其中：n：指一批產品采樣個數；c：指該批產品中檢樣菌數超過限量的檢樣數；m：指合格菌數限量；M：指附加條件後判定為合格的菌數限量。
（2）樣品送檢
採集好的樣品應及時送到食品微生物檢驗室，一般不應超過3h，如果路程較遠，可將不需冷凍的樣品保持在1～5℃的環境中，勿使凍結，以免細菌遭受破壞。
樣品送檢時，必須認真填寫申請單，以供檢驗人員參考。
檢驗人員接到送檢單後，應立即登記，填寫序號，並按檢驗要求，立即將樣品放在冰箱或冰盒中，並積極准備條件進行檢驗。
（3）樣品處理
樣品處理應在無菌室內進行，若是冷凍樣品必須事先在原容器中解凍，解凍溫度為2～5℃不超過18h或45℃不超過15min。
a.固體樣品
用無菌刀、剪或鑷子稱取不同部位的樣品，剪碎放入滅菌容器內，加一定量的水混勻，製成1: 10混懸液，進行檢驗。在處理蛋製品時，加入約30個玻璃球，以便震盪均勻。生肉及內臟，先進行表面消毒，再剪去表面樣品，採集深層樣品。
b.液體樣品
原包裝樣品用點燃的酒精棉球消毒瓶口，再用經石炭酸或來蘇兒消毒液消過毒的紗布將瓶口蓋住，用經火焰消毒的開關器開啟。搖勻後用無菌吸管吸取；含有二氧化碳的液體食品，按上述方法開啟瓶蓋後，將樣品倒入無菌磨口瓶中，蓋上消毒紗布，將蓋開一小縫，輕輕搖動，使氣體逸出後進行檢驗；將冷凍食品放入無菌容器內，融化後檢驗。
c.罐頭
罐頭進行密閉試驗、膨脹試驗和檢驗。將被檢驗罐頭置於85℃以上的水浴中，使罐頭沉入水面以下5 cm，觀察5 min，如有小氣泡連續上升，表面漏氣；另外將罐頭放在(37±2)℃環境下7d，如是水果、蔬菜罐頭，放在20～25℃環境下7d，觀察其蓋和底有無膨脹現象。檢驗時，先用酒精棉球擦去罐上油污，然後用點燃的酒精棉球消毒開口的一端，用來蘇兒消毒紗布蓋上，再用滅菌的開罐器打開罐頭，除去表層，用滅菌匙或吸管取出中間部分的樣品進行檢驗。
（4）檢驗
每種指標都有一種或幾種檢驗方法，可根據不同的食品、不同目的來選擇恰當的檢驗方法。通常所用的常規檢驗方法為現行國家標准，或國際標准，（如FAO標准、WHO標准等），或食品進口國的標准（如美國FDA標准、日本厚生省標准、歐共體標准等）。
食品衛生微生物檢驗室接到檢驗申請單，應立即登記，填寫試驗序號，並按檢驗要求立即將樣品放在冰箱或冰盒中，積極准備條件進行檢驗。
一般陽性樣品發出後3d（特殊情況可適當延長）方能處理樣品；進口食品的陽性樣品，需保存6個月方能處理。陰性樣品可及時處理。
（5）結果報告
樣品檢驗完畢後，檢驗人員應及時填寫報告單，簽名後送主管人核實簽字，加蓋單位印章，以示生效，並立即交給食品衛生監督人員處理。

⑷ 怎樣分離才能代表活性污泥中所有微生物群

活性污泥中的微改緩生物種類繁雜，數量龐大。如果不經稀釋就直接做分離培養，則培養基槐肢上的菌落會因為數鉛殲世量過多而互相連結，分不清楚了，就達不到分離目的。

⑸ 微生物實驗可以先把樣品攪碎嗎

沒有充分搗碎的話一些菌體就無法釋放出來,測定的結果會小於實際值.

⑹ 分離純化微生物的方法有哪些各方法適用分離什麼菌種

主要有：劃線法、倒平板法、塗布法，根據分離的菌種選擇不同的培養基。

稀釋混合倒平板法、稀釋塗布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用，不需要特殊的儀器設備，分離純化效果好。

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學的研究及應用中，不僅需要通過分離。

分離技術

主要是稀釋和選擇培養，稀釋是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體，使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞，並使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法。

如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時，需要結合使用選擇培養法，即選用僅適合於所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體，改變群體中各類微生物的比例，以達到分離的目的。為保證分離到的微生物是純培養，分離時必須用。

以上內容參考：網路-微生物分離純化

⑺ 微生物分離方法

微生物分離法是獲得微生物純培養物的一種分離方法。通過這個方法可實現一種微生物的培養，或獲得一個細胞的後代。其具體方法有：

1、稀釋倒平皿法。將待分離的材料作一系列稀釋，取不同稀釋度適量塗布於固體培養基平板上或與已熔化的固體培養基一起傾注入平板內，經過培養即有一個微生物細胞繁殖來的單個菌落。

2、劃線法。先將已熔化的固體培養基製成平板，待凝後，取分離材料在上面劃線，可作平行劃線、扇形劃線或其他形狀的連續劃線，使菌樣逐漸減少，最後得到單個孤立的菌落。

(7)微生物樣品如何絞碎擴展閱讀：

微生物分離技術的應用措施：

1、減少毒性氧物質的毒害作用：由於常規培養方法使用的高濃度營養基質不利於微生物生長，適當降低營養基質的濃度可以減弱這種不利影響。發現低濃度基質的培養基培養出的細菌在數量和種類上均多於高濃度基質的培養基，但營養濃度過低時會使培養出的微生物數量反而下降。

2、維持微生物間的相互作用：在培養基中加入微生物相互作用的信號分子就可簡單模擬微生物間的相互作用，滿足微生物生長繁殖的要求。

3、供應新型的電子供體和受體：不同微生物的代謝過程不同，因此對反應的底物要求也不盡相同。供應微生物需要的特有底物有助於新陳代謝反應的進行及微生物的正常生長。大量的研究表明，將新穎的電子供體和受體應用到微生物培養中，能夠發現未知的生理型微生物。

4、分散微生物細胞：自然界中很多微生物聚集生長，形成「絮體」和「顆粒」等，致使其內部的微生物不易被培養。對「絮體」和「顆粒」進行適度的超聲處理，將細胞分散再進行培養，可以使更多的微生物接觸培養基而得到培養。

5、延長培養時間：對「寡營養菌」的培養，可適當延長培養時間，使其能長至肉眼可見的尺度。當然培養時間不能無限增長，因為培養時間越長，對培養環境的無菌要求就越高[4]。

6、利用瓊脂替代物：瓊脂對某些微生物具有毒性作用，採用無害且凝結作用較好的替代物質作為培養基固化劑，可以增加微生物的可培養性。

⑻ 微生物實驗中不易溶於水的固體樣品怎麼處理

如果本身就是不容性物質，而你還是要用這種物質，在液體里，那隻有直接配製進去，不溶就不溶，微生物可以經過自身的代謝功能，也是可以利用這些沉澱的。比如碳酸鈣，不溶於水，但在乳酸菌發酵過程的培養液中加入它，微生物生產的乳酸可以與與之反應。從而加以利用。
不過，培養是，帶沉澱時的培養液，攪拌返混條件要夠。

⑼ 微生物限度檢測，不溶於水的樣品如何處理可以取上清液做嗎

非水溶性供試品
方法1 取供試品5g（或5ml )，加至含溶化的（溫度不超過45℃）5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無菌混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團後，慢慢加人45 ℃的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至100ml，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1 : 20的供試液。
方法2 取供試品10g，加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯（製法見附錄XII A無菌檢查法中供試品的無菌檢查項下）和無菌玻璃珠的適宜容器中．必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然後加入45 ℃的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液100ml，振搖5～10分鍾，萃取，靜置使油水明顯分層，取其水層作為l : 10的供試液。