① 什麼是微量高通量微生物篩選法其創新點在什麼地方
近年來,一種稱作微量高通量微生物篩選法已在歐洲等實驗室採用。其基本方法是以96孔塑料培養板作大量培養的容器,每孔可先加入2ml培養液,再用多點(12點)接種器快速接種純菌株,每小時約可接40000個不同變異株,每天可篩選2萬~3萬株,經適當培養後,可快速對每孔中的代謝產物進行自動檢測,工效極高。
② 如何篩選微生物葯物
市面上有很多微生物制劑的菌種,多種多樣,造成在選擇上產生很大困惑,下邊是選擇菌種的方法:
1、微生物菌種選擇
動物消化道微生物具有多樣性和特異性,不同動物種類對菌種的要求不同,同一菌株用於不同動物,產生的效果差異也較大。使用時一定要掌握菌種的特性和功效,選擇不當起不到應有效果,反而會破壞原有菌群,甚至引發疾病
2、微生物菌種應用時間
微生物制劑應用要從子畜開始使用,以保證有益菌優先定植。因為制劑進入體內後要有一段時間進行微生物菌群調整才能定植下來。
一般認為,乳酸菌類在各種動物的各階段添加均較好,芽孢桿菌類在生長期添加較好,在幼齡期可以添加;麴黴菌類在幼齡期,水產動物全期不必添加;酵母菌類在生長期不必添加;在水產動物養殖中,以改善水質為目的時,可將微生物制劑或光合細菌直接灑於水中。
3、微生物菌種添加方式
一般粉狀飼料添加微生物制劑效果較好,顆粒飼料和膨化飼料在加工過程中的高溫可造成10%~30%的芽孢桿菌,90%以上的腸球菌以及99%以上的酵母失活,而乳酸桿菌幾乎全部被殺滅。因此,在顆粒飼料中要使用耐熱,耐擠壓的芽孢桿菌制劑。乳酸菌不耐高溫,應採用凍干後包被或採用噴霧乾燥的方式製成的乳酸菌制劑。使用時最好採用飲水方式,以利於乳酸菌優先粘附於腸壁。
4、微生物菌種劑量與濃度
微生物制劑中必須含有相當數量的活菌才能達到效果。當進入動物腸道食糜中外源菌數大於1000萬個每克時,都會對腸道內原有菌群產生較大的影響。因此,微生物制劑在產品中活菌數含量為10億~20億每克時效果最佳。
我國正式批准生產的微生物制劑中規定每克芽孢桿菌含量要多於5億個。以酵母菌產品為例,目前市場上銷售的產品活菌數從每克幾億到200億不等,在選擇是要認真鑒別。
5、微生物菌種抗生素的影響
細菌類的微生物制劑對抗生素敏感,不宜與抗生素同時使用,使用微生物制劑的前後二天應停止使用抗生素。最好先用抗菌葯物清理腸道,為益生菌的定植和繁殖掃除障礙,然後再飼喂微生物制劑,可提高使用效果。酵母菌類屬於真核生物,生物學活性與細菌完全不同,對抗生素、磺胺類葯物和一些抗菌劑有天然抗性,可與抗生素同時使用。
6、微生物菌種保存條件和期限
微生物制劑均為活菌制劑,由於大多數菌種在飼料加工、運輸中容易失活,應用中要注意保存期限。通常微生物制劑應密封保存於陰涼避光處,儲存時間不宜過長,有效期一般為一年左右,隨著保存時間的延長,活菌數量不斷減少。厭氧菌類暴露在空氣中容易死亡,有的產品對其進行了包被或真空包裝處理,應在打開包裝後規定的時間內用完。酵母類屬於兼性厭氧菌,可以保存較長時間。芽孢桿菌類有效期比其他類型長,可達2年左右。
③ 微生物的傳統檢測方法有哪些
傳統檢測有三種方法
1、直接顯微鏡觀察,正常情況,在一定的培養條件下(相同的培養基、溫度以及培養時間),同種微生物表現出穩定的菌落特徵。可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。
2、選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件,選擇培養基,其作用是允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷,得到的微生物往往並不只有一種,但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。
3、鑒別培養基,根據微生物的代謝特點,在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。與選擇培養相比,鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小,一般可直接測定某微生物的種類。
④ 微生物問題:營養缺陷性的篩選方法有什麼舉例說明。。
營養缺陷型微生 物是 指經過誘變處理,使某一菌株喪失合成某些 必需 的營養物質(氨基酸、維生素和鹼基等)的能力,從而必須在培養 基中加人相應 的營養成 分才能 正常生 長 的變異菌株。
分離:
1、青黴素濃縮法。
青黴素 能抑 制細菌 細胞壁 的合 成,因此,用青黴素只能殺死生 長繁殖 中的細 菌,而 不能殺死停 止分裂 的細菌。在 只能使野生 型生長而不 能使 突變型 生長 的選 擇性液體 培養 基中加人青黴 素,野生型被 青黴 素殺死,突變 型 則不被 殺死 而得 以 濃縮。
2、菌絲過濾法。
先用 誘變 劑處理 真菌 (如脈 胞菌 ) 的分生抱子,然 後接 種到液體培養基 中,不 斷給營養液通 氣
,刺激分生抱子生長,並 防止它們相互結合在一起。大約 經過l d 的培養,分生抱子萌發,長 出菌絲。然 後用棉 花把 萌發 了的分生抱子過 濾掉,未萌發的分 生抱 子 (死亡 的、需要 較 長 時間萌 發 的和突變為營養缺 陷型 的分 生抱 子 ) 則仍 留在 培養 液 中,以後 每隔一段時間進行過濾
,連續若 干次後,所剩下 的就都是 缺陷 型的或死亡 的分生抱子。通過補充各種成分 鑒定缺陷型
檢出:
影印接種法。採用一種 特製的工具—「印章」 ,將 在完全培養基上長 出的菌 落的平 皿上「印」一 下,然 後分 別在 完全培養基和基本培 養基 的相 應位 置上 各 印一下,若 在 完全 培養基上生長,而在基本培養基上 不生 長,即認為是營養缺 陷型
⑤ 微生物學的檢查方法是有哪些
微生物學檢查法
標本
因鼠疫傳染性極強,採集標本時必須嚴格無菌操作。根據病型採取淋巴結穿刺液、腫脹部位組織液、膿汁,血液和痰等。人和動物屍體可取肝、脾、肺、病變淋巴結以及心血等。陳舊屍體取骨髓。將採集標本送至有嚴密防護措施的專門實驗室進行檢查,禁止在一般實驗室進行操作。
直接塗片鏡檢
除血液標本外,一般均需塗片或印片,乾燥後用甲醇固定,革蘭染色或呂氏美蘭染色,鏡檢。在不同材料中,菌體大小、形態有很大差異,除典型形態外,往往可見菌體呈多形態性,需加以注意。
分離培養與鑒定
血液標本需先置肉湯中進行增菌培養。分離培養一般選用血瓊脂平板,28攝氏度24小時後,可見較小的露滴狀菌落,繼續培養則菌落增大至1~2毫米,中央厚而緻密,周邊逐漸變薄。取可疑菌落進行塗片染色鏡檢,噬菌體裂解試驗,血清凝集試驗,特異熒光抗體染色等作出鑒訂。
血清學試驗
可用於檢查鼠疫耶爾森菌抗原或特異性抗體。敏感而特異的試驗方法有ELISA、固相放射免疫分析,SPA協同凝集試驗等。
檢測核酸
用DNA探針雜交方法或PCR技術檢測鼠疫耶爾森菌核酸,有助於鼠疫的診斷。PCR敏感性極高,蚤體內有10個鼠疫耶爾森菌感染即可用PCR技術檢出。
診斷檢查
診斷:取決於病人有接觸史及肺部受累表現,病因診斷取決於痰、血或淋巴結吸出物革蘭染色、培養,有條件的單位可作直接熒光素標記抗體染色,可提供快速的病因診斷。
⑥ 對於不同種類的微生物,其篩選方法上有何異同
假單孢用PCIT,真菌用pda,蔡氏,木霉用TSM,放線菌用高氏,ATCC172,SCA,選擇性培養基對應都需要加入不同的抗生素,比較復雜。如果有需要請說得具體些,需要篩選那種微生物。
⑦ 微生物的快速檢測方法有哪些
目前主要普通培養(簡稱標)般報告要用儀器、核酸檢測(PCR)、目前快速檢測(主要包括:免疫磁珠、酶聯免疫試劑盒、金標檢測卡等根據自需求選擇
⑧ 微生物篩選原理
用選擇培養基,調節培養基的某些條件,使你想要的微生物能正常存活,而不想要的微生物不能存活。或者是特定的菌落染色,進而分離。
例:在進行纖維素分解菌的篩選時,可以在培養基里加入剛果紅(一種染料,可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物,但並不和水解後的纖維二塘和葡萄糖發生這種反應。)當我們在含有纖維素的培養基中加入剛果紅時,剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物,而無法和被分解菌分解的纖維素形成剛果紅——纖維素復合物,培養基中就會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈,這樣我們就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌了。
⑨ 海洋微生物的篩選方法有哪些
海洋微生物的篩選方法有哪些
海洋中有自養和異養、光能和化能、好氧和厭氧、寄生和腐生以及浮游和附著等類型的細菌.幾乎所有已知生理類群的細菌,都可在海洋環境中找到.最常見的有:假單胞菌屬 (Pseudomonas)、 弧菌屬(Vibrio)、無色桿菌屬 (Achromobacter)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、螺菌屬 (Spirillum)、微球菌屬(Micrococcus)、八疊球菌屬(Sarcina)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、棒桿菌屬 (Corynebacterium)、枝動菌屬(Mycoplana)、諾卡氏菌屬 (Nocardia)和鏈黴菌屬(Streptomyces)等十多個屬.在海水中,革蘭氏陰性桿菌占優勢;在遠洋沉積物中,則革蘭氏陽性細菌居多;在大陸架沉積物中,芽孢桿菌屬最為常見.
⑩ 微生物菌種的篩選
1.(1)從亞硝酸鹽含量較高的環境中採集土樣;(2)配置培養基,制備平板,一種僅以亞硝酸鹽作為唯一氮源(A),另一種不含任何氮源作為對照(B);(3)將樣品適當稀釋(十倍稀釋法),塗布A平板;(4)將平板至於適當溫度條件下培養,觀察是否有菌落產生;(5)將A平板上的菌落編號並分別轉接至B平板,至於相同溫度條件下培養;(6)挑去在A平板上生長而不在B平板上生長的菌落,在一個新的A平板上劃線、培養,獲得單菌落,初步確定為可利用亞硝酸鹽作為唯一氮源的微生物除培養
2.A將他們混合培養,在培養基上長出的菌落為重組菌株。B如果在混合培養期間加入DNAase,在培養基上無重組菌落出現這說明上述重組是因細胞間的接觸轉化所致;如果仍有重組菌落長生,說明可能是由於接合和轉導所致。C利用只能持留細菌的濾板相隔的U型管進行試驗,如果在基本培養基上不產生重組菌落,則判斷為接合作用,如果產生重組菌落,則又有兩種可能,即轉化或轉導。D利用能持留細菌和細菌病毒而不能持留DNA的濾板相隔的U型管進行試驗,如果不產生重組菌落則為轉導,如果仍產生重組菌落則為轉化