❶ 如何建立復雜多組分樣品的高效液相色譜分析條件
1,為進行分離,可以根據樣品的組分將流動相和固定相的組合最佳化.如果熟悉液相色譜,這是非常有利的,但對初學者來說,這是困難的. 2,適用樣品范圍廣,80%的分析對象可藉此法分析. 3,可以使用高效的分離柱,易於分離復雜的多組分混合物. 4,把被分離的組分溶解在流動相中,可以全部回收之. 5,可以使用多種非破壞性高靈敏度和選擇性的檢測器,把幾種檢測器串聯起來,根據其對應特性,獲取與定性有關的重要信息. 6,只能檢測從色譜柱流出的組分. 7,由於沒有通用型高靈敏度檢測器,所以在分析未知混合物而沒有色譜峰的時候,無法確定其原因是分離條件不合適,還是檢測器沒有響應. 8,採用尺寸排斥色譜法時,從低分子到高分子的樣品全部流出,而且流出順序是從高分子量開始,故可根據保留容量推測分子量,最適於做未知樣品的組成分析. 9,測定精度好.因為注入精度比氣相色譜好,故可以用絕對工作曲線. 10,雖然示差折光檢測器為通用型檢測器,但和氣相色譜的熱導檢測器和氫火焰檢測器相比,由於化合物之間的響應不同,所以用峰面積百分數求由多種化合物組成的混合物時問題較多. 11,要限制色譜柱的使用條件（溫度、壓力、流動相等）.而且與氣相色譜相比,性能隨時間的變化較大.必須定期用標准品在標准條件下檢查色譜柱的性能.若按照不同的樣品對象,固定使用色譜柱,對色譜柱的壽命是有利的. 12,製作色譜柱需要特殊裝置和專門技能. 13,與氣相色譜法相比,由於共存物質對分離的影響小,易於制備分析樣品. 14,柱外死體積對色譜柱的性能有重大的綜合性影響,而且連接方法依儀器製造廠而異.
❷ 如何建立好葯物含量的高效液相色譜分析方法
1，首先必須去進行配製葯物溶液前處理的工作。找出該葯物的溶解性，探索出該葯物的有效溶劑，使該葯物能在該溶劑中充分溶解，這是葯物溶液配製的前處理必然途徑，也是進行高效液相色譜含量分析的首要條件。
2，然後就是根據該葯物配製溶液的前處理方法，配製好適當濃度的葯物溶液，利用該葯物溶液，在紫外-可見分光光度計上進行紫外掃描，找到該葯物的最大吸收波長，確立適合的高效液相色譜分析的檢測波長。因為它是進行高效液相色譜含量分析的基本條件
3，再是色譜柱的選擇：根據葯物的極性來選擇合適極性的色譜柱類型
4，再是流動相的確立。配製一系列的流動相，考察合適的流動相。
5，再是准確度考察。通過精密度、重復性和重現性的考察來衡量儀器的准確度
6，接著是線性關系考察。配製不同濃度的一系列溶液，進行其溶液的色譜掃描。根據所得的不同濃度下的葯物峰面積作為縱坐標（Y軸）、以溶液濃度為橫坐標（X軸）進行線性回歸，得到其線性圖，考察其線性程度，即線性相關系數R=？。考察的目的就是：為了我們在做含量分析時，選擇一個合適的濃度進行檢測，不至於你配製的待測溶液濃度范圍不在線性范圍之內，造成測量結果的錯誤。
7，再是最低檢測濃度和檢測限的考察。目的是為了考察這種方法的實用性，是否符合痕量分析的要求。
8，再是回收率考察。目的是考察方法的准確性。
9，再是穩定性考察。目的是考察試驗方法的時間性，指導我們在分析檢測時，建立合適的溶液配製到進樣的時間段，保證實驗結果的准確性。
10，最後是專屬性考察。
❸ （五）生物標志物色譜-質譜分析
1.基本原理
生物標志物是指發現於地質體中的化學性質穩定、碳骨架結構具有明顯生物起源特徵的有機化合物。如甾類和萜類化合物烷。這類生物標志化合物一般用色譜-質譜（GC-MS）或色譜-質譜-質譜（GC-MS-MS）連用儀分析鑒定，這種連用儀的特點是充分發揮GC的高分離效能和MS的高鑒別能力之特長，這樣即使有些化合物分不開，靠質量碎片也能把其鑒別出來。
樣品注入GC氣化室，氣化後隨載氣進入毛細柱，分離成的單一組分，依次進入MS離子源。當化合物進入離子源時，用能量為70eV或低於70eV的電子束轟擊，化合物就會失去一個電子變成等質量的分子離子，不同質量的分子離子或碎片離子（A+、B+、C+等）可在多個軌道中運行，經離子光學系統將其聚焦成具有一定速度的離子束，射入連續改變磁場強度的質量分析器，使具有不同質量的離子按從小到大的順序進行方向、能量聚焦，並通過收集狹縫射到電子倍增器上，放大後被計算機採集下來，經數據系統處理，即可得到定性用的質譜圖或質量碎片圖。
2.樣品要求
測定甾烷、萜烷的飽和烴組分，應按有機質族組分柱層析分析方法獲取；當正構烷烴含量高時，會影響檢測效果，應採用尿素絡合或分子篩除去。
色譜進樣方式為樣品直接或用溶劑稀釋後分流或無分流進樣。質譜離化方式為電子轟擊；解析度大於500 或全質量范圍為一個質量單位，掃描方式為全掃描或多離子檢測（MID）。
3.地質應用
色譜-質諧分析鑒定所提供的萜烷、甾烷有機地化指標，是目前公認的可靠和有效的有機地化參數，主要用於生油岩評價（類型、成熟度）、油源對比、原油運移、生物降解、原油類型的劃分、沉積環境的研究等方面，都取得了明顯效果，有效地指導了油氣勘探工作。
❹ 如何建立色譜含量測定方法
含量測定分析方法驗證
摘要：本文介紹了在對含量測定所用的分析方法進行方法學驗證時，各項指標的可接受標准，以利於判斷該分析方法的可行性。
關鍵詞：含量測定 分析方法驗證 可接收標准
在進行質量研究的過程中，一項重要的工作就是要對質量標准中所涉及到的分析方法進行方法學驗證，以保證所用的分析方法確實能夠用於在研葯品的質量控制。為規范對各種分析方法的驗證要求，我國已於2005年頒布了分析方法驗證的指導原則。該指導原則對需要驗證的分析方法及驗證的具體指標做了比較詳細的闡述。但是文中未涉及各具體指標在驗證時的可接受標准，國際上已頒布的指導原則中也未發現相關的要求。另一方面，大多數葯品研發單位在進行質量研究時，已逐步認識到分析方法驗證的必要性與重要性，大都也在按照指導原則的要求進行分析方法驗證，但驗證完後卻因沒有一個明確的可接受標准，而難以判斷該分析方法是否符合要求。本文結合國外一些大型葯品研發企業在此方面的要求，提出了在對含量測定方法進行驗證時的可接受標准，供國內的葯品研發單位在進行研究時參考。
1.准確度
該指標主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求分別配製濃度為80%、100%和120%的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。
可接受的標准為：各濃度下的平均回收率均應在98.0%-102.0%之間，9個回收率數據的相對標准差(RSD)應不大於2.0%。
2.線性
線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：
在80%至120%的濃度范圍內配製6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行線性回歸分析。
可接受的標准為：回歸線的相關系數(R)不得小於0.998，Y軸截距應在100%響應值的2%以內，響應因子的相對標准差應不大於2.0%。
3.精密度
1)重復性
配製6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標准差應不大於2.0%。
2)中間精密度
配製6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數據的相對標准差應不大於2.0%。
4.專屬性
可接受的標准為：空白對照應無干擾，主成分與各有關物質應能完全分離，分離度不得小於2.0。以二極體陣列檢測器進行純度分析時，主峰的純度因子應大於980。
5.檢測限
主峰與噪音峰信號的強度比應不得小於3。
6.定量限
主峰與噪音峰信號的強度比應不得小於10。另外，配製6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時間的相對標准差應不大於2.0%。
7.耐用性
分別考察流動相比例變化±5%、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、流速相對值變化±20%時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標准為：主峰的拖尾因子不得大於2.0，主峰與雜質峰必須達到基線分離;各條件下的含量數據(n=6)的相對標准差應不大於2.0%。
8、系統適應性
配製6份相同濃度的供試品溶液進行分析，主峰峰面積的相對標准差應不大於2.0%，主峰保留時間的相對標准差應不大於1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大於2.0，主峰與雜質峰必須達到基線分離，主峰的理論塔板數應符合質量標準的規定。
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❺ 建立生物樣品分析方法，對定量分析方法進行驗證包括哪些內容
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生物樣品定量分析方法驗證指導原則
1.
范圍
准確測定生物基質（如全血、血清、血漿、尿）中的葯物濃度，對於葯物和制劑研發非常重要。這些數據可被用於支持葯品的安全性和有效性，或根據毒動學、葯動學和生物等效性試驗的結果做出關鍵性決定。因此，必須完整地驗證和記錄應用的生物分析方法，以獲得可靠的結果。
本指導原則提供生物分析方法驗證的要求，也涉及非臨床或臨床試驗樣品實際分析的基本要求，以及何時可以使用部分驗證或交叉驗證，來替代完整驗證。
生物樣品定量分析方法驗證和試驗樣品分析應符合本指導原則的技術要求。應該在相應的生物樣品分析中遵守GLP原則或GCP原則。
2.
生物分析方法驗證
2.1
分析方法的完整驗證
分析方法驗證的主要目的是，證明特定方法對於測定在某種生物基質中分析物濃度的可靠性。此外，方法驗證應採用與試驗樣品相同的抗凝劑。一般應對每個物種和每種基質進行完整驗證。當難於獲得相同的基質時，可以採用適當基質替代，但要說明理由。
一個生物分析方法的主要特徵包括：選擇性、定量下限、響應函數和校正范圍（標准曲線性能）、准確度、精密度、基質效應、分析物在生物基質以及溶液中儲存和處理全過程中的穩定性。
有時可能需要測定多個分析物。這可能涉及兩種不同的葯物，也可能涉及一個母體葯物及其代謝物，或一個葯物的對映體或異構體。在這些情況下，驗證和分析的原則適用於所有涉及的分析物。