微生物檢查用菌種如何進行確認

⑴ 細菌微生物檢測儀如何使用

細菌微生物檢測儀（風途）通過拭子來檢測發光值可以確定衛生狀況。標本應取自每次深層清潔後，肉眼看上去很乾凈的表面。重復檢測5次，統計結果。可根據環境檢測需求設定上下限值，做到數據快速評估預警，表面潔凈度快速篩查。

⑵ 所有微生物檢驗都要用到標准菌株嗎

所有微生物檢驗都要用到標准菌株。
標准菌株：由國內或國際菌種保藏機構保藏的，遺傳學特性得到確認和保證並可追溯的菌株。
標准菌株的復活或培養物的制備應按照供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。

⑶ 中國葯典微生物限度檢查法的控制菌檢查

控制菌檢查用的培養基應進行培養基的適用性檢查，成品培養基、由脫水培養基或按處方配製的培養基均應檢查。菌種
對試驗菌種的要求同計數培養基的適用性檢查。
大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC ( B ) 44l02]
金黃色葡萄球菌（StapHylococcus aureus）[ CMCC ( B ) 26003 ]
乙型副傷寒沙門菌（Salmonella paratypHi B )〔CMCC ( B ) 50094〕
銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC ( B ) 10104〕
生孢梭菌（Clostridium sporogenes ) [ CMCC ( B ) 6494l]
白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC ( F ) 98001〕
菌液制備
接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中或營養瓊脂培養基上，生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基中，培養18～24小時；接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中或改良馬丁瓊脂培養基上，培養24～48小時。用0.9%無菌氯化鈉溶液製成每lml含菌數為10～100cfu的菌懸液。
菌懸液在室溫下放置應在2小時內使用．若保存在2～8 ℃可在24小時內使用。
適用性檢查
控制菌檢查用培養基的適用性檢查項目包括促生長能力、抑制能力及指示能力的檢查。各培養基的檢測項目及所用菌株見表2。
表2 控制菌檢查用培養基的促生長能力、抑制能力及指示能力檢查 控制菌檢查 培養基 特性 試驗菌株 大腸埃希菌 膽鹽乳糖培養基 促生長能力 大腸埃希菌 抑制能力 金黃色葡萄球菌 4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養基 促生長能力+指示能力 大腸埃希菌 曙紅亞甲藍瓊脂培養基或麥康凱瓊脂培養基 促生長能力+指示能力 大腸埃希菌 大腸菌群 乳糖膽鹽發酵培養基 促生長能力 大腸埃希菌 抑制能力 金黃色葡萄球菌 乳糖發酵培養基 促生長能力+指示能力 大腸埃希菌 曙紅亞甲藍瓊脂培養基或麥康凱瓊脂培養基 促生長能力+指示能力 大腸埃希菌 沙門菌 營養肉湯培養基 促生長能力 乙型副傷寒沙門菌 四硫磺酸鈉亮綠培養基 促生長能力 乙型副傷寒沙門菌 抑制能力 金黃色葡萄球菌 膽鹽硫乳瓊脂培養基或沙門、志賀菌屬瓊脂培養基 促生長能力+指示能力 乙型副傷寒沙門菌 曙紅亞甲藍瓊脂培養基或麥康凱瓊脂培養基 促生長能力+指示能力 乙型副傷寒沙門菌 三糖鐵瓊脂培養基 指示能力 乙型副傷寒沙門菌 銅綠假單胞菌 膽鹽乳糖培養基 促生長能力 銅綠假單胞菌 抑制能力 金黃色葡萄球菌 溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基 促生長能力 銅綠假單胞菌 抑制能力 大腸埃希菌 綠膿菌素測定用培養基 促生長能力+指示能力 銅綠假單胞菌 金黃色葡萄球菌 亞碲酸鹽肉湯培養基 促生長能力 金黃色葡萄球菌 抑制能力 大腸埃希菌 卵黃氯化鈉瓊脂培養基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養基 促生長能力 金黃色葡萄球菌 抑制能力 大腸埃希菌 梭菌 梭菌增菌培養基 促生長能力 生孢梭菌 哥倫比亞瓊脂培養基 促生長能力 生孢梭菌 白色念珠菌 沙氏葡萄糖液體培養基 促生長能力 白色念珠菌 沙氏葡萄糖瓊脂培養基 促生長能力+指示能力 白色念珠菌 念珠菌顯色培養基 促生長能力+指示能力 白色念珠菌 抑制能力 大腸埃希菌 1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養基 促生長能力+指示能力 白色念珠菌 液體培養基促生長能力檢查
分別接種不大於100cfu的試驗菌（表2） 於被檢培養基和對照培養基中，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及最短培養時間下培養。與對照培養基管比較，被檢培養基管試驗菌應生長良好。
固體培養墓促生長能力檢查
取試驗菌各0.1ml（含菌數50～100cfu）分別塗布於被檢培養基和對照培養基平板上，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及最短培養時間下培養。被檢培養基與對照培養基上生長的菌落大小、形態特徵應一致。
培養基抑制能力檢查
接種不少於100cfu的試驗菌（表2）於被檢培養基中，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及最長時間下培養，試驗菌應不得生長。
固體培養基指示能力檢查
取試驗菌各0.1ml（含菌數不大於100cfu )（表2）分別塗布於被檢培養基和對照培養基平板上，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及時間下培養。被檢培養基上試驗菌生長的菌落大小、形態特徵、指示劑反應情況等應與對照培養基一致。
液體培養基指示能力檢查
分別接種不大於100cfu的試驗菌（表2）於被檢培養基和對照培養基中，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及最短培養時間下培養。與對照培養基管比較，被檢培養基管試驗菌生長情況、指示劑反應等應與對照培養基一致。 當建立產品的微生物限度檢查法時，應進行控制菌檢查方法的驗證，以確認所採用的方法適合於該產品的控制菌檢查。若產品的組分或原檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，檢查方法應重新驗證。
驗證時，依各品種項下微生物限度標准中規定檢查的控制菌選擇相應驗證的菌株，驗證大腸菌群檢查法時，採用大腸埃希菌作為驗證菌株。驗證試驗按供試液的制備和控制菌檢查法的規定及下列要求進行。
菌種及菌液制備
同控制菌檢查用培養基的適用性檢查。
驗證方法
取規定量供試液及10～100cfu試驗菌加入增菌培養基中，依相應控制菌檢查法進行檢查。當採用薄膜過濾法時．取規定量供試液，過濾，沖洗，試驗菌應加在最後一次沖洗液中，過濾後，注入增菌培養荃或取出濾膜接人增菌培養基中。
結果判斷
若上述試驗檢出試驗菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法進行供試品的該控制菌檢查；若未檢出試驗菌，應採用培養基稀釋法、離心沉澱法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，並重新進行方法驗證。
驗證試驗也可與供試品的控制菌檢查同時進行。 供試品的控制菌檢查應按已驗證的方法進行。
陽性對照試驗
陽性對照試驗方法同供試品的控制菌檢查，對照菌的加菌量為10～10Ocfu。陽性對照試驗應檢出相應的控制菌。
陰性對照試驗
取稀釋液10ml照相應控制菌檢查法檢查，作為陰性對照。陰性對照應無菌生長，
（1）大腸埃希菌（Escherichia coli）取供試液10ml（相當於供試品lg、lml、10cm²)，直接或處理後接種至適量（不少於100ml）的膽鹽乳糖培養基中，培養18～24小時，必要時可延長至48小時。
取上述培養物0.2ml，接種至含5ml MUG培養基的試管內，培養，於5小時、24小時在366nm紫外光下觀察，同時用未接種的MUG培養基作本底對照。若管內培養物呈現熒光，為MUG陽性；不呈現熒光，為MUG陰性。觀察後，沿培養管的管壁加人數滴靛基質試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質陽性；呈試劑本色，為靛基質陰性。本底對照應為MUG陰性和靛基質陰性。
如MUG陽性、靛基質陽性，判供試品檢出大腸埃希菌；如MUG陰性、靛基質陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌；如MUG陽性、靛基質陰性，或MUG陰性、靛基質陽性，則應取膽鹽乳糖培養基的培養物劃線接種於曙紅亞甲藍瓊脂培養基或麥康凱瓊脂培養基的平板上，培養18～24小時。
若平板上無菌落生長或生長的菌落與表3所列的菌落形態特徵不符，判供試品未檢出大腸埃希菌。若平板上生長的菌落與表3所列的菌落形態特徵相符或疑似，應進行分離、純化、染色鏡檢和適宜的鑒定試驗，確認是否為大腸埃希菌。
表3 大腸埃希菌菌落形態特徵 培養基 菌落形態 曙紅亞甲藍瓊脂 紫黑色、淺紫色、藍紫色或粉紅色，菌落中心呈深紫色或無明顯暗色中心，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常有金屬光澤 麥康凱瓊脂 鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤 （2）大腸菌群（Coliform）取含適量（不少於10ml )的乳糖膽鹽發酵培養基管3支，分別加入1 :10的供試液lml（含供試品0.1g或0.1ml）、1: 100的供試液1ml（含供試品0.01g或0.01ml）、1:1000的供試液1 ml（含供試品0.001g或0.001ml），另取1支乳糖膽鹽發酵培養基管加人稀釋液1ml作為陰性對照管。培養18～24小時。
乳糖膽鹽發酵管若無菌生長或有菌生長但不產酸產氣，判該管未檢出大腸菌群；若產酸產氣，應將發酵管中的培養物分別劃線接種於曙紅亞甲藍瓊脂培養基或麥康凱瓊脂培養墓的平板上，培養18～24小時。
若平板上無菌落生長，或生長的菌落與表4所列的菌落形態特徵不符或為非革蘭氏陰性無芽抱桿菌，判該管未檢出大腸菌群；若平板上生長的菌落與表4所列的菌落形態特徵相符或疑似，且為革蘭氏陰性無芽抱桿菌，應進行確證試驗。表4 大腸菌群菌落形態特徵 培養基 菌落形態 曙紅亞甲藍瓊脂 紫黑色、紫紅色、紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊．表面光滑，濕潤 麥康凱瓊脂 鮮桃紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤 確證試驗從上述分離平板上挑選4～5個疑似菌落，分別接種於乳糖發酵管中，培養24～48小時。若產酸產氣，判該乳糖膽鹽發醉管檢出大腸菌群，否則判未檢出大腸菌群。
根據大腸菌群的檢出管數，按表5報告lg或lml供試品中的大腸菌群數。
表5 可能的大腸菌群數 各供試品量的檢出結果 可能的大腸菌群數N（個/g或ml ) 0.1g或0.1ml 0.01g或0.01ml 0.01g或0.01ml + + + > 10³ + + 10²< N < 10³ + ― ― 10 < N < 10² ― ― ― < 10 註：+代表檢出大腸菌群；―代表未檢出大腸菌群．
（3）沙門菌（salmonella）取供試品10g或10ml ,直接或處理後接種至適量（不少於200ml）的營養肉湯培養基中，用勻漿儀或其他適宜方法混勻，培養18～24小時。
取上述培養物1ml，接種於10 ml四硫磺酸鈉亮綠培養基中，培養18～24小時後，分別劃線接種於膽鹽硫乳瓊脂（或沙門、志賀菌屬瓊脂）培養基和麥康凱瓊脂（或曙紅亞甲藍瓊脂）培養基的平板上，培養18～24小時（必要時延長至40～48小時）。若平板上無菌落生長或生長的菌落不同於表6所列的特徵，判供試品未檢出沙門菌。
若平板上生長的菌落與表6所列的菌落形態特徵相符或疑似，用接種針挑選2～3個菌落分別於三糖鐵瓊脂培養基高層斜面上進行斜面和高層穿刺接種，培養18～24小時，如斜面未見紅色、底層未見黃色；或斜面黃色、底層無黑色，判供試品未檢出沙門菌。否則，應取三糖鐵瓊脂培養基斜面的培養物進行適宜的鑒定試驗，確認是否為沙門菌。
表6 沙門菌菌落形態特徵 培養基 菌落形態 膽鹽硫乳瓊脂 無色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無黑色 沙門、志賀菌屬瓊脂 無色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中心有時帶黑褐色 曙紅亞甲藍瓊脂 無色至淺橙色．透明或半透明，光滑濕潤的圓形菌落 麥康凱瓊脂 無色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時為暗色 （4）銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）取供試液10ml（相當於供試品1g、lml、10cm²)，直接或處理後接種至適量（不少於100ml）的膽鹽乳糖培養基中，培養18～24小時。取上述培養物，劃線接種於溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基的平板上，培養18～24小時。
銅綠假單胞菌典型菌落呈扁平、無定形、周邊擴散、表面濕潤，灰白色，周圍時有藍綠色素擴散。如平板上無菌落生長或生長的菌落與上述菌落形態特徵不符，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。如平板生長的菌落與上述菌落形態特徵相符或疑似，應挑選2～3個菌落，分別接種於營養瓊脂培養基斜面上，培養18～24小時。取斜面培養物進行革蘭氏染色、鏡檢及氧化酶試驗。
氧化酶試驗
取潔凈濾紙片置於平皿內，用無菌玻棒取斜面培養物塗於濾紙片上，滴加新配製的1%二鹽酸二甲基對苯二胺試液，在30秒內若培養物呈粉紅色並逐漸變為紫紅色為氧化酶試驗陽性，否則為陰性。
若斜面培養物為非革蘭氏陰性無芽抱桿菌或氧化酶試驗陰性，均判供試品未檢出銅綠假單胞菌。否則，應進行綠膿菌素試驗。
綠膿菌素（Pyocyanin）試驗
取斜面培養物接種於PDP瓊脂培養基斜面上，培養24小時，加三氯甲烷3～5ml至培養管中，攪碎培養基並充分振搖。靜置片刻，將三氯甲烷相移至另一試管中，加人lmol / L鹽酸試液約lml，振搖後，靜置片刻，觀察。若鹽酸溶液呈粉紅色，為綠膿菌素試驗陽性，否則為陰性。同時用未接種的PDP瓊脂培養基斜面同法作陰性對照，陰性對照試驗應呈陰性。
若上述疑似菌為革蘭氏陰性桿菌、氧化酶試驗陽性及綠膿菌素試驗陽性，判供試品槍出銅綠假單胞菌。若上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗陽性及綠膿菌素試驗陰性，應繼續進行適宜的鑒定試驗，確認是否為銅綠假單胞菌。
( 5 )金黃色葡萄球菌（StapHylococcus aureus）取供試液l0ml（相當於供試品1g、lml、l0cm²)，直接或處理後接種至適見（不少於100ml）的亞碲酸鈉（鉀）肉湯（或營養肉湯）培養基中，培養18～24小時，必要時可延長至48小時。取上述培養物，劃線接種於卵黃氯化鈉瓊脂培養基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養基的平板上，培養24～72小時。若平板上無菌落生長或生長的菌落不同於表7所列特徵，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。
表7 金黃色葡萄球菌菌落形態特徵 培養基 菌落形態 甘露醇氯化鈉瓊脂 金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃色環，菌落直徑0.7～lmm 卵黃氯化鈉瓊脂 金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有卵磷脂分解的乳濁圈，菌落直徑1～2mm 若平板上生長的菌落與表7所列的菌落特徵相符或疑似，應挑選2～3個菌落，分別接種於營養瓊脂培養基斜面上，培養18～24小時。取營養瓊脂培養基的培養物進行革蘭氏染色．並接種於營養肉湯培養基中，培養18～24小時，做血漿凝固酶試驗。
血漿凝固酶試驗
取滅菌小試管3支，各加入血漿和無菌水混合液（1 : 1 ) 0.5ml，再分別加入可疑菌株的營養肉湯培養物（或由營養瓊脂培養基斜面培養物制備的濃菌懸液）0.5ml、金黃色葡萄球菌營養肉湯培養物（或由營養瓊脂培養基斜面培養物制備的濃菌懸液）0.5ml、營養肉湯或0.9%無菌氯化鈉溶液0.5ml ,即為試驗管、陽性對照管和陰性對照管。將3管同時培養，3小時後開始觀察直至24小時。陰性對照管的血漿應流動自如，陽性對照管血漿應凝固，若試驗管血漿凝固為血漿凝固酶試驗陽性，否則為陰性。如陽性對照管或陰性對照管不符合規定時，應另制備血漿，重新試驗。
若上述疑似菌為非革蘭氏陽性球菌、血漿凝固酶試驗陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。
( 6 )梭菌（Clostridium）取供試液10ml（相當於供試品1g、lml、10cm²) 2份，其中l份置80 ℃保溫10分鍾後迅速冷卻。上述2份供試液直接或處理後分別接種至100ml的梭菌增菌培養基中。置厭氧條件下培養48小時。取上述每一培養物0.2ml，分別塗抹接種於含慶大黴素的哥倫比亞瓊脂培養基平板上，置厭氧條件下培養48～72小時。若平板上無菌落生長，判供試品未檢出梭菌；若平板上有菌落生長，應挑選2～3個菌落分別進行革蘭氏染色和過氧化氫酶試驗。
過氧化氫酶試驗
取七述平板上的菌落，置潔凈玻片上，滴加3%過氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產生，為過氧化氫酶試驗陽性，否則為陰性。
若上述可疑菌落為革蘭氏陽性梭菌，有或無卵圓形或球形的芽孢，過氧化氫酶試驗陰性，判供試品檢出梭菌，否則判供試品未檢出梭菌。
( 7 )白色念珠菌（Candida albicans）取供試液10ml（相當於供試品1g、lml、l0cm²）直接或處理後接種至適量（不少於100ml）的沙氏葡萄糖液體培養基中，培養48～72小時。取上述培養物劃線接種於沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上，培養24～48小時（必要時延長至72小時）。
白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養基上生長的菌落呈乳白色，偶見淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，培養時間稍久則菌落增大，顏色變深、質地變硬或有皺褶。若平板上無菌落生長或生長的菌落與上述菌落形態特徵不符，判供試品未檢出白色念珠菌。如平板上生長的菌落與上述菌落形態特徵相符或疑似，應挑選2～3個菌落分別接種至念珠菌顯色培養基平板上 ，培養24～48小時（必要時延長至72小時）。若平板上無綠色或翠綠色的菌落生長，判供試品未檢出白色念珠菌。
若平板上生長的菌落為綠色或翠綠色．挑取相符或疑似的菌落接種於1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養基上．培養24～48小時。取培養物進行染色、鏡檢及芽管試驗。
芽管試驗
挑取l%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養基上的培養物，接種於加有一滴血清的載玻片上，蓋上蓋玻片，置濕潤的平皿內，於35～37 ℃培養1～3小時，置顯微鏡下觀察孢子上有否長出短小芽管。
若上述疑似菌為非革蘭氏陽性菌，顯微鏡下未見厚膜孢子、假菌絲、芽管，判供試品未檢出白色念珠菌。 供試品檢出控制菌或其他致病菌時，按一次檢出結果為准，不再復試。
供試品的細菌數、黴菌和酵母菌數其中任何一項不符合該品種項下的規定，應從同一批樣品中隨機抽樣，獨立復試兩次，以3次結果的平均值報告菌數。
若供試品的細菌數、黴菌和酵母菌數及控制菌三項檢驗結果均符合該品種項下的規定，判供試品符合規定；若其中任何一項不符合該品種項下的規定．判供試品不符合規定。

⑷ 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

1、快速測試片技術法

快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。

細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。

2、生物電化學方法

生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷，從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中，培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化，所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。

常見的有：阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。

3、微菌落技術

微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點，其研究始於 20 世紀50年代，定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始，國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。

4、氣相色譜法

氣相色譜應用到微生物的檢測中，主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異，利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

5、高效液相色譜法

利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

⑸ 怎麼鑒定微生物中某種細菌的含量

你好，受高中水平的限制，我給出下列方法：

通過顯微鏡直接觀察。一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。這些特徵包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。（見高中生物選系1《生物技術實踐》圖2-8）因此可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。
使用選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件。選擇培養基，顧名思義其作用是允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長。例如，使用以尿素作為唯一氮源的培養基能夠培養出可合成脲酶的微生物；在培養基中PH調至酸性有利於黴菌的生長繁殖（抑制細菌的生命活動）等。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷，得到的微生物往往並不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。
使用鑒別培養基。即根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。例如，水質檢驗中大腸桿菌的檢驗（大腸桿菌的存在數量用以衡量水被糞便污染的程度）就用到了伊紅—美藍試劑，該試劑與水或乳製品中的大腸桿菌反應出現深紫色且帶有金屬光澤，屬於大腸桿菌的特徵反應。與選擇培養相比，鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小，一般可直接測定某微生物的種類。

⑹ 食品微生物檢測需要做方法確認嗎

食品微生物檢測需要做方法確認
微生物限度檢查方法應該說是「驗證」還是「確認」
葯品微生物限度檢查是控制葯品質量的一個重要檢查項目。中國葯典2005年版規定，不同的葯品微生物限度檢查中的細菌數、黴菌及酵母菌數測定、各控制菌的檢查，必須按照經過驗證的方法進行。一些中西葯制劑由於葯品本身的理化性質及抑菌活性，干擾葯品污染的微生物計數測定和控制菌的檢出，帶來檢查結果的不準確性。如在細菌數測定中，低稀釋級的平均平板菌落數低於高稀釋級，呈現細菌的不正常分布，即葯品顯現出干擾或抑菌作用；反映在控制菌檢查中，陽性對照試驗呈陰性反應，其檢驗結果不能反映葯品被微生物污染的真實狀況，得出不準確的結果或假陰性結果。由於2005年版以前的中國葯典，沒有要求對微生物限度檢查中的各項目進行方法學驗證，以至於這類方法學問題越來越多，影響微生物限度檢查結果的准確性。2002年10月～2003年4月我所參加中檢所組織葯品微生物限度檢查方法驗證試驗協作課題。選擇了4種審核檢驗的中西葯制劑品種，其原葯品標准沒有進行微生物限度檢查方法驗證考察，也未見相關文獻報道。為對微生物限度檢查方法進行考察，選用4種代表菌做了微生物計數的菌回收率試驗。根據各品種的要求對控制菌做檢出率測定的研究。得出的結果說明這些葯品微生物限度檢查方法存在的問題，並為該課題提供了試驗數據。

⑺ 葯品領域的微生物檢測及標准

中國葯典微生物限度檢查法，為《中國葯典》附錄收載的關於葯品微生物檢查的法定方法。葯品的不同劑型的微生物檢測標准不同，具體如下：

1、制劑通則品種

制劑通則、品種項下要求無菌的制劑及標示無菌的制劑應符合無菌檢查法規定。

2、口服給葯制劑

細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每lg或lml不得過100cfu。

大腸埃希菌每1g或lml不得檢出。

3、耳、鼻及呼吸道吸入給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²，不得過10cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。

大腸埃希菌鼻及呼吸道給葯的制劑，每1g、lml或l0cm²，不得檢出。

4、陰道、尿道給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。

黴菌數和酵母菌數每1g、lml或l0cm²應小於10cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm²，不得檢出。

5、直腸給葯制劑

細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g或lml不得過100cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每lg或lml不得檢出。

6、其他局部給葯制劑

細菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。

黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。

7、含動物組織

含動物組織（包括提取物）的口服給葯制劑每10g或10ml還不得檢出沙門菌。

8、兼用途徑制劑

應符合各給葯途徑的標准。

(7)微生物檢查用菌種如何進行確認擴展閱讀

微生物限度檢查法的注意事項：

1、當建立產品的微生物限度檢查法時，應進行控制菌檢查方法的驗證，以確認所採用的方法適合於該產品的控制菌檢查。若產品的組分或原檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，檢查方法應重新驗證。

2、檢查項目應當包括細菌數、黴菌數、酵母菌數及控制菌檢查。

3、微生物限度檢查應在環境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區域內進行。

4、檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣區域、工作檯面及環境應定期按《醫葯工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標准進行潔凈度驗證。

5、除另有規定外，本檢查法中細菌及控制菌培養溫度為30℃～35℃；黴菌、酵母菌培養溫度為23℃～28℃。

6、檢驗結果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 為單位報告，特殊品種可以最小包裝單位報告。

⑻ 微生物計數方法驗證需要怎麼准備

微生物限度檢查方法學驗證
1、供試品：XXXXX膠囊（批號：XXXXXX）
2、菌種：
菌落計數用菌種：
(1)
枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]
(2)
金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]
(3)
大腸埃希菌[CMCC（B）4]
(4)
白色念珠菌[CMCC
(F)
98001]
控制菌檢查用菌種：
(1)
大腸埃希菌[CMCC（B）4]
(2)
金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]
3、培養基：營養肉湯培養基、改良馬丁培養基、營養瓊脂培養基、玫瑰紅鈉瓊脂培養基、膽鹽乳糖培養基、4-甲基傘形酮葡糖苷培養基（MUG）。
4、預試驗
按照中國葯典2005年版微生物限度檢查法中常規法及培養基稀釋法檢驗，金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的回收率均小於70%，本品有抑菌作用。
5、細菌、黴菌及酵母菌計數
按照中國葯典2005年版微生物限度檢查法進行細菌、黴菌及酵母菌計數的方法學驗證試驗及菌落計數。
5.1菌液制備：
(1)
接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至10ml營養肉湯中，35～37℃培養18～24小時，取此培養液1ml加0.9％無菌氯化鈉溶液9ml，採用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5～10-7，使菌數約為50～100cfu/ml。
(2)
接種白色念珠菌的新鮮培養物至10ml改良馬丁培養基中，23～28℃培養24～48小時，取此培養液1ml加0.9％無菌氯化鈉溶液9ml，採用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5～10-7，使菌數約為50～100cfu/ml。
5.2
供試液的制備
取供試品10g，pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至100ml，振搖，使呈1：10的供試品儲備液。取1：10的供試品儲備液
10ml

⑼ 微生物檢驗需要哪些菌種

大腸桿菌沙門菌 志賀菌 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 肉毒梭菌
黴菌和酵母菌

⑽ 微生物限度檢查法的結果判定

被檢培養基上的菌落平均數與對照培養基上的菌落平均數的比值大於70%，且菌落形態大小應與對照培養基上的菌落一致。判該培養基的適用性檢查符合規定。計數方法的驗證當建立產品的微生物限度檢查法時，應進行細菌、黴菌及酵母菌計數方法的驗證，以確認所採用的方法適合於該產品的細菌、黴菌及酵母菌數的測定。若產品的組分或原檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，計數方法應重新驗證。驗證時，按供試液的制備和細菌、黴菌及酵母菌計數所規定的方法及下列要求進行。對各試驗菌的回收率應逐一進行驗證。菌種及菌液制備 同計數培養基的適用性檢查驗證方法 驗證試驗至少應進行3 次獨立的平行試驗，並分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。
（1）試驗組 平皿法計數時，取試驗可能用的最低稀釋級供試液1ml 和50～100cfu 試驗菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數。薄膜過濾法計數時，取規定量試驗可能用的最低稀釋級供試液，過濾，沖洗，在最後一次的沖洗液中加入50～100cfu 試驗菌，過濾，按薄膜過濾法測定其菌數。
（2）菌液組 測定所加的試驗菌數。
（3）供試品對照組 取規定量供試液，按菌落計數方法測定供試品本底菌數。
（4）稀釋劑對照組 若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗時，可用相應的稀釋液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml 供試液含50～100cfu，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數方法測定其菌數。結果判斷 在3 次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率（稀釋劑對照組的平均菌落數占菌液組的平均菌落數的百分率）應均不低於70%。若試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數減去供試品對照組的平均菌落數的值占菌液組的平均菌落數的百分率）均不低於70%，照該供試液制備方法和計數法測定供試品的細菌、黴菌及酵母菌數；若任一次試驗中試驗組的菌回收率低於70%，應採用培養基稀釋法、離心沉澱法、薄膜過濾法、中和法（表1）等方法或聯合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，並重新進行方法驗證。表1 常見干擾物的中和劑或滅活方法干擾物 可選用的中和劑或滅活方法戊二醛 亞硫酸氫納酚類、乙醇、吸附物 稀釋法醛類 稀釋法、甘氨酸、硫代硫酸鹽季銨類化合物（QACs）、對羥基苯甲酸酯、 卵磷脂、聚山梨酯汞類制劑 亞硫酸氫納、巰基乙酸鹽、硫代硫酸鹽雙胍類化合物 卵磷脂酒、洗必泰類 聚山梨酯鹵化物 硫代硫酸鹽 乙二胺四乙酸（EDTA） 鎂或鈣離子磺胺類 對氨基苯甲酸。
若沒有適宜的方法消除供試品中的抑菌作用，那麼驗證試驗中微生物回收的失敗可看成是因供試品的抗菌活性引起的，同時表明該供試品不能被試驗菌污染。但是，供試品也可能僅對試驗用菌株具有抑製作用，而對其他菌株沒有抑製作用。因此，根據供試品須符合的微生物限度標准和菌數報告規則，在不影響檢驗結果判斷的前提下，應採用能使微生物生長的更高稀釋級的供試液進行方法驗證試驗。若驗證試驗符合要求，應以該稀釋級供試液作為最低稀釋級的供試液進行供試品檢驗。計數方法驗證時，採用上述方法若還存在一株或多株試驗菌的回收率達不到要求，那麼選擇回收情況最接近要求的方法和試驗條件進行供試品的檢驗。驗證試驗也可與供試品的細菌、黴菌及酵母菌計數同時進行。 取規定量供試液及10～100cfu 試驗菌加入增菌培養基中，依相應控制菌檢查法進行檢查。當採用薄膜過濾法時，取規定量供試液，過濾，沖洗，試驗菌應加在最後一次沖洗液中，過濾後，注入增菌培養基或取出濾膜接入增菌培養基中。結果判斷 若上述試驗檢出試驗菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法進行供試品的該控制菌檢查；若試驗組未檢出試驗菌，應採用培養基稀釋法、離心沉澱集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，並重新進行方法驗證。驗證試驗也可與供試品的控制菌檢查同時進行。供試品檢查供試品的控制菌檢查應按已驗證的方法進行，增菌培養基的實際用量同控制菌檢查方法的驗證。陽性對照試驗 供試品進行控制菌檢查時，應做陽性對照試驗。陽性對照試驗的加菌量為10～100cfu，方法同供試品的控制菌檢查。陽性對照試驗應檢出相應的控制菌。陰性對照試驗 取稀釋液10ml 照相應控制菌檢查法檢查，作為陰性對照。陰性對照應無菌生長。