生物取樣注意什麼

『壹』 對食品進行微生物檢測取樣時，應注意哪些事項

食品微生物檢測時,我認為最主要的盡量避免雜菌污染.
體現在操作過程中,也就是,在超凈台操作,注意紫外線和臭氧滅菌,與酒精燈保持合適的距離.
倒平板和接種時都要避免其他細菌進入.
還有就是,因為檢測的細菌是不一樣的,所以對應的培養基也不一樣,要注意它的配製和接種方法的區別.
取樣時注意量,也要注意細菌侵入.
所用器具與無菌水要嚴格按照要求進行滅菌。

『貳』 環境微生物測序采樣指南

隨著高通量測序技術飛速發展，人們對微生物的認知也在逐漸深入。凌恩生物每天都會接到全國各類型微生物測序樣本，上到山巔土壤，下至深海底泥；有老師研究植物根際和葉內微生物，也有老師關注動物昆蟲腸道生理代謝的奧秘。為了得到能夠研究的測序結果，規范標準的取樣及送樣是成功的前提。

在樣本送測前，我們要注意以下幾點：

1、取樣使用的工具及容器必須經過滅菌處理；

2、取樣後及時做好標記，記錄取樣相關信息；

3、樣本送測前做好備份，防止意外發生丟失珍貴樣本；

4、送測樣本使用標准容器承裝，在容器上標記清晰，送樣不宜過多；

5、寄送時保持低溫環境，建議使用乾冰配送；

6、可使用凌恩微生態樣本保真液，高品質樣本是決定高品質研究成果的第一步。

常規土壤類樣本取樣方法-農田/森林/草原土壤等

(1) 取樣方法

按實驗設計確定采樣范圍，取樣器具需事先消毒滅菌處理。采樣時應去除地表雜質，根據需要挖取相應深度（如5~20 cm）的土壤，置於冰磨拍掘上運至實驗室。去除可見雜質，建議過2 mm無菌篩網。同一樣方多點樣本等量混合均勻後取5~10 g，保存無菌EP管中，進行核酸提取，或-80℃保存備用。若不能自行提取，可置於乾冰寄送至公司。

註：建議戴一次瞎核性手套、口罩，進行嚴格賀敬取樣和操作，盡可能減少人為的污染。

根際土壤樣本取樣方法-作物/蔬菜/草木根系等

（1）作物類（含草地等矮小植物）根際土壤取樣方法

a. 採集植物植株，去除根部大塊土壤，置於冰上運輸至實驗室；

b. 晃動根部，去除根部鬆散的土壤後，使用無菌刷子從根部收集殘留土壤；

c. 同一樣方多點取樣土壤樣本等量混合均勻後，液氮速凍，置於-80℃冰箱保存。

（2）林木類根際土壤取樣方法

a. 採集地面下 10-20 cm 根際土壤，置於冰上運輸至實驗室；

b. 過 2-5 mm 孔徑無菌篩網；

c. 同一樣方多點取樣土壤樣本等量混合均勻後，液氮速凍，置於-80℃冰箱保存。

若不能自行提取，可置於乾冰寄送至公司提取。

註：取樣器具請事先消毒滅菌處理。若為真菌根際土壤，請務必盡可能去除菌絲體殘留，減少對 DNA/RNA 提取的干擾。

植物表面微生物取樣方法

（1）取樣方法

依據實驗設計，進行樣方設置，每一樣方進行多點取樣，同一樣方點等量混勻成一個樣本。植物根部組織可以通過搖晃振盪或無菌刷子去除根表粘附土壤。

（2）樣本前處理

將植物組織浸沒於無菌PBS溶液，180rpm孵育20min；取出植物組織，再次加入無菌PBS溶液，180rpm孵育20min，取出植物組織，再次加入無菌PBS溶液，超聲波洗滌10min（參數：160 W，30s/30s），最後取出植物組織至於-80度冰箱保存備用。

將三次洗滌液匯總，過0.2um濾膜（或12000g離心10min，收集沉澱），收集濾膜至於-80度冰箱保存。

植物內部微生物取樣方法

（1）依據實驗設計，進行樣方設置，每一樣方進行多點取樣，同一樣方點等量混勻成一個樣本。

（2）對植物組織進行表面消毒操作或者使用上一步「 植物表面微生物取樣」中處理過的植物組織，液氮速凍後，研磨成粉，即可用來進行核酸的提取。

植物組織表面消毒具體操作如下：

無菌水洗滌30s，70%無菌乙醇洗滌2min，2,5% NaClO（含0.1% Tween 80）浸泡5min後轉移至70%無菌乙醇浸泡30s，最後使用無菌水洗滌植物組織3次，即視為對植物組織表面進行無菌化。

表面無菌化的植物組織至於-80度冰箱保存備用或進行核酸提取。

植物根表面微生物取樣方法

（1）將所研究的物體放在事先滅好的無菌容器當中；

（2）加入PBS緩沖液後進行振盪，使得微生物從物體表面充分的脫落並聚集在PBS緩沖液當中,震盪至少2h以上；

（3）直接提取PBS緩沖液中的微生物或者將緩沖液用濾膜過濾之後再進行DNA的提取。

PBS濃度和PH有要求：濃度是用1x的，PH值是7.4，一般買回來的PBS是10x的，建議稀釋到1x。

注意： 建議優先使用超聲波洗滌 。

空氣樣本微生物取樣方法

使用空氣抽濾機，使空氣通過 0.22 μm 濾膜，濾膜上有可見覆蓋物（過濾時間越長，收集的空氣中的灰塵越多，菌數量越多），收集完成後取下濾膜。濾膜置於凍存管中，液氮速凍，乾冰寄送到實驗室。

注意：由於樣本特殊，微生物含量較少，建議多保管備份保存。

水體樣本微生物取樣方法

送樣量：擴增子直徑3-4cm濾膜1-2張；宏基因組直徑3-4cm濾膜>=2張；

（1）研究目的進行確定水體的取樣深度和范圍；

（2）采樣後進行濾膜過濾，選擇合適孔徑的濾膜，對於澄清水體或者略渾濁水體，選用0.22μm或者0.45μm的濾膜，取樣體積大於5L；對於渾濁水體，建議先用大孔徑的濾膜過濾一遍，再用小孔徑的濾膜過濾；

（3）水體泥樣的採集提供大於5g樣本；

（4）用大體積乾冰運輸，且要保證我方在收到樣品開箱檢驗時有足夠的乾冰剩餘。

注意：擴增子項目將2-3L水體過濾到1-2張濾膜（0.22或0.45um）後裝入到離心管中；宏基因組項目將10L水體過濾到>=2張濾膜（0.22或0.45um）後裝入到離心管中。

活性污泥與水體/地表沉積物類樣本取樣方法

（1）活性污泥

從活性污泥裝置中取大於10 ml的懸浮污泥樣本（約5-10 g沉降物），保存無菌EP管中，放入液氮或置於冰上，立即運至實驗室進行核酸提取，或-80℃保存備用。

註：若液態污泥樣本沉降物較少，可適當增加取樣量。

（2）水體/地表沉積物

取距離水底/地表0-10 cm（具體按實驗需要而定）的沉積物5~10 g，保存無菌取樣袋或EP管中，置於冰上運送至實驗室進行核酸提取，或-80℃保存備用。若不能自行提取，可置於乾冰寄送至公司提取。

『叄』 微生物檢驗時，人員操作應注意哪些

1）保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。
2）取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。
3）取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入安全櫃，對其外表面進行紫外燈照射消毒。
4）在要求的做樣區域進行操作。
5）做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒再開口。
6）往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。
7）微生物中的稀釋，吸管通常不接觸液面，都是懸空加液，因為吸管外壁會掛液，造成加入量有誤差。
8）微生物檢測中，鹽水常溫即可。不能過熱，會將部分微生物燙死；也不能溫度太低，不能將樣品溶解完全。
9）加入試劑需要充分混合均勻，保證溶液的均一性。
10）傾倒平皿時，要注意瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中幹掉，微生物亦死亡，加入約15mL培養基後，隨即轉動平皿，使樣品與培養基充分混合均勻。
11）做樣完畢，及時放入相應培養箱進行培養，並清理清潔安全櫃。

『肆』 微生物檢驗標本的正確採集及注意事項

微生物檢驗標本的正確採集及注意事項

正確採集臨床微生物標本，直接影響到微生物培養鑒定結果。可靠的檢驗結果可以指導臨床診斷治療，為臨床科學用葯和成功的感染控制提供依據，是正確、合理使用抗菌葯物，延緩細菌耐葯，減少抗菌葯物濫用和監測醫院感染的第一步，也是最重要的一步。下面是我為大家帶來的微生物檢驗標本的正確採集及注意事項的知識，歡迎閱讀。

一、 血液標本的採集

1、 採集方法

（1）75%酒精清潔局部皮膚。

（2）待皮膚干後，再用2%—2。5%碘酒從穿刺點中心部位開始消毒，范圍不應小於5cm（直徑），且不能用手指觸摸消毒後的皮膚。

（3）皮膚碘酒干後（約1min），穿刺採集血液，采血量成人5—10ml，嬰幼兒1—5ml。

（4）采血後立即在床旁接種培養瓶，並迅速輕搖，充分混勻防止凝固，但又不可劇震以防溶血。

2、注意事項

（1）懷疑菌血症應盡早采血，體溫上升（38。5℃）采血可提高陽性率，但也要防止因等待而延誤時機。

（2）對已經使用抗菌葯物，而又不能停葯者，也應在下次用葯前采血。切忌不要在靜滴抗菌葯物的靜脈處採取血標本，也不能從靜脈導管及動脈插管中取血。

（3）培養基與血液之比以10：1為宜，以稀釋血液中的抗生素，抗體等殺菌物質;有人主張對接受抗菌葯物治療的病人，培養基與采血量之比可為20：1或大於這個比例。

（4）近年研究表明，將血液注入血培養基前，更換針頭反而易導致污染。

（5）每例至少採血兩次，間隔0。5—1h，以利於提高陽性率和區分感染菌與污染菌。

（6）疑為細菌性心內膜炎及布魯氏病的病人，以肘動脈或股動脈采血為宜，除在發熱期采血外，並要多次采血（24h 3—4次）和增加采血量（可增加10ml）。

（7）采血後立即送檢，如不能立即送檢可置室溫，而不能放置冰箱。

（8）如臨床表現很似敗血症，而血培養多次陰性者，提示考慮厭氧菌和真菌感染的可能。

二、骨髓的採集

1、採集方法

在病灶部位或髂前（後）上脊處嚴格消毒後抽取骨髓1ml，注入血培養瓶內。

2、注意事項

（1）骨髓內含有大量的單核巨噬細胞系統的細胞，因而骨髓培養對傷寒病人的.診斷較血培養優越。

（2）用於懷疑細菌性骨髓炎病人。

三、靜脈導管標本的採集

1、採集方法

（1）常規導管部位皮膚消毒。

（2）無菌方法從病人體內拔出靜脈導管，剪下導管尖端5cm，放入無菌瓶中。

（3）立即（15min內）送檢，避免標本乾燥。

2、注意事項

（1）剪下的導管立即接種血平皿，可提高陽性率。

（2）肉湯反復沖洗導管腔內，沖洗液做定量培養。

（3）有人將剪下的導管置肉湯增菌液或培養瓶中，此法不能區分導管感染菌與少量定植菌。

（4）衛生部在《醫學感染診斷標准》（試行）（2001年1月3日施行）中規定：導管管尖培養其接種方法應取導管尖端5cm，在血平板表面往返滾動一次。細菌≥15cfu/平板，即為陽性。

四、呼吸道

1、痰標本

（1）採集方法

①清晨起床後用涼開水漱口多次，以除去口腔內大量雜菌，用力咳出肺深部的膿痰，置於清潔乾燥容器中送檢。

②痰量極少者可用45℃ 3%—10%的氯化鈉溶液約25ml霧化。對於咯痰量少的幼兒，可輕輕壓迫胸骨上部的氣管，當其咯痰後用無菌棉棒採集標本。

③咳嗽無力或昏迷病人，可用吸痰管經鼻腔或口腔經氣管腔內吸引痰液送檢。

④氣管切開者可以深入透氣孔中取痰。

⑤可用支氣管鏡直接在病灶部位採集高濃度的病原菌。

⑥用無菌導管經鼻腔插入氣管鏡內，緩慢注入無菌蒸餾水5ml，取出導管。留取患者在3h內咳出的痰液，放入無菌容器中送檢。

⑦胃內采痰法。無自覺症狀的結核病人。有時可把痰誤咽入胃內，因而可採用胃內溶物做結核菌培養，其陽性結果比咯痰高10%左右，該方法於晨起空腹時，把滅菌的胃管，從鼻腔送入胃內，用20ml注射器抽取胃液。

（2）注意事項

①痰標本的採集以晨痰為准，此時患者痰量較多且含菌量也多。

②標本採集後立即送檢，若不能及時送檢者，可暫存2—8℃冰箱。若晚1—2h接種，會失去苛氧菌，並使得革蘭陰性菌過分生長。

③可接受的標本：痰;支氣管灌洗液，支氣管刷，支氣管活檢;肺吸出物和肺活檢。不能接受的標本：唾液;24h留的痰（結核桿菌培養除外）;拭子。

④ 痰標本的質量評價：（用顯微鏡篩選）在低倍鏡下，檢查鱗狀上皮細胞，至少10個視野，集中在有白細胞處，合格標本為白細胞與鱗狀上皮細胞比例大於2：1。

2、鼻拭子

（1）用濕的拭子（生理鹽水）;

（2）需插兩個鼻孔;

（3）深入3。3cm左右，轉動4—5次;

（4）以上用於診斷金黃色葡萄球菌暴發時的鼻帶菌者。

3、咽拭子、口腔拭子

（1）採集方法（到細菌室取專用拭子）

①患者清水漱口後，由檢查者將其舌外拉，用棉拭子將咽後壁或懸雍垂的後側反復擦拭數次;

②化膿性扁桃體炎、口腔念珠菌病時，直接用棉拭子在病灶部位擦拭;

③插入運送培養基中立即送檢，防止乾燥。

（2）注意事項

①棉拭子應避免觸及舌、口腔黏膜和唾液;

②採集標本前數小時不可用消毒葯物漱口或接觸病灶局部。

五、胃腸道

1、糞便

（1）採集方法

選取膿血、黏液糞便2—3g，液體糞便取絮狀物1—2ml。盛於滅菌瓶中或蠟紙盒中及時送檢。

（2）注意事項

①標本要採集新鮮的，陳舊標本影響陽性檢出率;

②切忌糞尿混合;

③若要分離阿米巴，標本要立即送檢並注意保溫;

④運送培養基可提高陽性率;

⑤分離難辨梭菌時需選不成形或水樣便;

⑥霍亂弧菌、大腸桿菌Ο157感染的腹瀉便則為水樣便或血性便;

⑦標本在病理早期或治療前採集;

⑧一般認為用抗菌葯三天後，標本培養病原菌陰性。

2、肛拭子

在無法獲得糞便的情況下，可用經無菌甘油水或無菌生理鹽水濕潤的肛拭子插入肛門4—5cm（幼兒2—3cm）處，輕輕旋轉擦取直腸表面黏液後取出，置運送培養基中送檢。

六、泌尿道

根據衛生部《醫學感染診斷標准》（試行）通知，泌尿系統臨床診斷為：患者出現尿頻、尿急、尿痛等尿路刺激症狀，或有下腹觸痛、腎區叩痛、伴或不伴發熱，並具有下列情況之一：

（1）尿檢白細胞男性≥5個/高倍視野，女性≥10個/高倍視野，插導尿管患者應結合尿培養;

（2）臨床已診斷為泌尿道感染，或抗菌治療有效而認定的泌尿道感染。

1、中段尿

（1）採集方法

①女性 采樣前用肥皂水或0。1%的高錳酸鉀溶液沖洗外陰，用手指陰x分開排尿，棄其前段尿，不終止排尿，留取中段尿10ml於滅菌容器內。

②男性 用肥皂水清洗尿道口，或0。1%的碘伏溶液消毒尿道口，滅菌紗布擦乾，上翻包皮，棄其前段尿，不終止排尿，留取中段尿10ml於滅菌容器內。

（2）注意事項

①導尿雖然可以減少污染，但是多次重復導尿可以造成逆行性感染，因此近年來大多採用中段尿。

②女性病人最好採取膀胱截石位由護士採取標本，減少污染。

③採集標本以晨起第一次尿液為佳。

④採集標本後，若不能在1h內送檢，暫放4℃冰箱，但不能超過8h。若尿液標本在室溫下放置超過2h，即使接種培養結果細菌數≥104 cfu/ml獲103cfu/ml，也不能作為診斷依據，應重新留取標本送檢。

⑤疑為尿道炎時可將最初3—4ml尿液收集在滅菌容器內。該尿中即使有少數細菌，如反復檢查為同一細菌，也應考慮為病原菌。

⑥兒童在多數情況下，僅沖洗外陰是不夠的，故採集標本較為困難。如果尿內細菌明顯增多，可以高度懷疑為尿路感染，無菌則可否定。

⑦若細菌培養結果為兩種或兩種以上細菌，需考慮污染可能，建議重新留取標本送檢。

⑧尿液中不得加入防腐劑，消毒劑否則影響陽性檢出率。

2、膀胱穿刺採集法

避免污染是很困難的，培養結果與病情不符時，或尿厭氧菌培養，或嬰幼兒中段尿採集困難時，可以用恥骨上穿刺膀胱內采尿。

3、留置導尿者採集法

拔去閉式引流的集尿袋，棄去導尿管前段尿液，留無污染的膀胱內尿液10ml送檢。不可從集尿袋下端留取標本。

七、腦脊液

1、採集方法

由臨床醫師以無菌方法收集腦脊液3—5ml（細菌1ml，真菌2ml抗酸桿菌2ml，病毒1ml）盛於無菌試管或小瓶中立即送檢。

2、注意事項

（1）採集標本後立即送檢，因腦膜炎奈瑟菌離體後迅速自溶，肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌也易死亡;

（2）疑為上述細菌感染時，應注意保溫，不可置冰箱或低溫保存。

八、膽汁

1、十二指腸引流法

在無菌操作下，將十二指腸導管吞咽至十二指腸乳頭部（距齒65—70cm）時，收集A液（來自總膽管，為橙黃或金黃色），隨之注入25%硫酸鎂溶液40ml，經1—2min後再採取B液（來自膽囊，為棕黃綠色），隨後收取C液（來自肝膽管，為檸檬色），一般認為B液做細菌培養意義較大。

2、膽囊穿刺法

膽囊造影術時，可同時採取膽汁。

3手術採取法

由總膽管、膽囊直接穿刺採取膽汁。

以上採集之標本應立即送檢，否則置於4℃冰箱內，採集時需小心，避免被唾液、十二指腸液細菌污染。

九、穿刺液標本

穿刺液包括胸水、腹水、心包液、關節液、鞘膜液。

1、採集方法

由臨床醫師行穿刺術抽取。胸腹水可收集5—10ml，心包液、關節液收集2—5ml，置於無菌含抗凝劑的試管或小瓶中，充分混勻後，立即送檢。抗凝劑10%EDTA二鈉鹽，標本與抗凝劑之比10：1。

2、注意事項

⑴標本採集應在患者用葯之前或停止用葯1—2天後進行;

⑵不能立即送檢可置4℃冰箱保存;

⑶疑為淋病性關節炎患者的關節液，採集後立即送檢，或床旁培養為佳;

⑷不能用棉拭子浸蘸標本送檢。

十、膿汁及病灶分泌物

1、傷口

⑴表面傷口拭子採集方法及注意事項

① 僅限於皮膚與皮下組織，包括手術切口、褥瘡潰瘍、新生兒臍炎、嬰兒膿瘡病。

②用無菌生理鹽水或75%的酒精擦去病灶表面滲液;

③用無菌棉拭子抹去及較深部的膿汁分泌物或組織送檢;

④採集褥瘡潰瘍標本時應採集褥瘡邊緣的膿性分泌物，拭子放在運送培養基中立即送檢，不要採集創口表面的滲液。

⑵傷口、膿腫、竇道、壞疽組織採集方法及注意事項

①閉鎖性膿腫用碘酒和酒精消毒皮膚後，用滅菌注射器穿刺抽取全部膿液送檢，疑為厭氧菌感染時，排去針管內空氣將針頭插入滅菌橡膠塞內送檢;

②傷口處若有膿及滲出物要用無菌棉簽深入各種竇道中擦拭，用小刀刮取，穿刺抽吸或手術切除獲得深處傷口標本;

③當創傷出血時，敷有葯物在2h以內及燒傷在12h內均不應採集標本，此時獲得陽性結果機會甚少。

④採集標本注意觀察膿汁及分泌物性狀、色澤、氣味等。可為培養鑒定提供依據。

⑶燒傷創面

①燒傷創面需要膿性分泌物，焦痂迅速分離變棕黑、黑或紫羅蘭色，燒傷邊緣水腫。患者發燒>38℃或低體溫<36℃，合並低血壓。

②用無菌生理鹽水沖洗傷口創面。

③由於創面部位不同，細菌種類也不盡相同，要用滅菌棉拭子採集多個部位的炎症區送檢。

④採集痂下變黑或變性的不健康區邊緣或引流液等做定量培養及組織活檢。

2、厭氧傷口拭子

⑴厭氧專用棉棒或玻璃棒觸及深部膿汁;

⑵可用注射器抽吸，排去針管內空氣將針頭插入滅菌橡膠塞內送檢;

⑶立即送檢，送檢過程中必須保持在無氧條件;

⑷不宜做厭氧菌培養的有痰、喉拭子、鼻咽拭子、齒齦拭子、直腸、陰道和宮頸拭子以及回腸、結腸造瘺術的流出物，胃、小腸及大腸內容物等。

3、尿道口分泌物拭子

⑴男性用無菌紗布擦拭和清洗尿道口，然後採取從尿道口溢出的膿性分泌物;

⑵採集前列腺液時，先將尿道、膀胱沖洗，然後從肛門用手指按摩前列腺，促使前列腺液溢出;

⑶女性病人先用滅菌紗布或棉拭子仔細擦拭或清洗尿道口，然後從陰道內診壓迫尿道，使分泌物溢出;

⑷取子宮頸分泌物，先用內窺鏡擴張陰道，然後從宮頸口用滅菌棉拭子採取分泌物，盡量避免被陰道宮頸附近正常菌群的污染。

4、蜂窩織炎

⑴用無菌生理鹽水或酒精消毒皮膚;

⑵用細針在炎症最顯著處穿刺吸引;

⑶抽少量滅菌生理鹽水在針管內;

⑷注入無菌試管內送檢。

5、組織標本

⑴活體組織採取的微量標本，可直接接種在培養基內;

⑵表淺組織可直接用棉拭子擦拭、小刀颳去;

⑶較大組織塊的表面可採用燒灼或浸入沸水中5—10s，然後用滅菌剪刀切開，取其中的膿汁;

⑷深部組織標本可經皮膚穿刺或手術切取送檢;

⑸組織標本不可用福爾馬x固定;

⑹有時也可將沾有膿汁的最內層敷料放入無菌平皿內送檢。

十一、眼標本採集

⑴一般細菌，以無菌棉拭子採集眼分泌物，尤其膿性分泌物;

⑵沙眼衣原體，首先擦去眼結膜上面的分泌物，然後用無菌小刀刮取穹窿部及眼結膜上皮細胞，用鏈黴素處理後備用;

⑶對於剛治療或葯物沖洗過的患者最好12—24h後採集標本;

⑷對於淚囊炎患者可稍加擠壓後以無菌棉拭子採集標本。

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『伍』 微生物檢驗時的注意事項

微生物檢驗時的注意事項

微生物(microorganism)，包括細菌、病毒、真菌以及一些小型的原生動物等在內的一大類生物群體，個體微小，與人類生活密切相關。廣泛涉及健康、醫葯、工農業、環保等諸多領域。在中國大陸地區的教科書中，均將微生物劃分為以下8大類：細菌、病毒、真菌、放線菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體。下面是我為大家帶來的微生物檢驗的注意事項的知識，歡迎閱讀。

一、培養基的滅菌及使用

(1)每次配置時，要注意其生產日期是否在保質期內，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質，並且未吸潮。

(2)培養基配置時，稱量要准確，包括鹽水的分裝要准確。

(3)一定要保證現配製現滅菌，未滅菌的配好培養基不能長時間放置，更不可隔夜。

(4)滅菌時要保證恆溫、恆壓，同時要保證有效滅菌時間。

(5)滅菌過的培養基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配製的要先使用。

(6)在使用時，要根據當班次的.使用量，用水浴鍋先將培養基溶化為液態，然後及時調低水域溫度(先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上)待用，千萬不可長時間使培養基處於高溫狀態。

(7)做產品微生物檢測時，傾倒培養基溫度在 45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死;也不可過涼，化好的培養基又結塊凝固，不便於觀察結果。

(8)每瓶培養基均要做空白。

(9)盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養基瓶塞，增大培養基的污染幾率，出現誤差結果。

(10)培養基剩餘過少時，可先將其傾倒成空白用板。

二、 做樣環境的維持

(1)大環境(房間)

1)做樣時，窗戶和空調要關閉，或用酒精對房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響超凈台內部環境(最好在有通排風系統的恆溫恆濕無菌間進行操作)。

2)如果在原來的原料微生物檢測室進行做樣，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺菌。

(2)小環境(超凈台)

1)定期清潔初效過濾器，要及時更換。

2)做樣前，將超凈台內部進行清潔，用 75%酒精進行擦拭消毒，並提前半小時將超凈台紫外燈打開，對超凈台內部環境進行殺菌。

3)關紫外燈，開風機，調整合適進風量，風量不可過低。

4)每次做樣後，要對超凈台內部進行清理、清潔，並用 75%酒精進行擦拭消毒。

5)紫外燈根據其使用壽命要及時更換。

6)做樣同時，要做上相應菌落檢測的環境空白。

7)做樣區域的選擇：

a、一般在距離超凈台外沿的 1/3-2/3 區域進行無菌操作;

b、要在酒精燈火焰的外焰保護區域進行操作。

三、 工器具的潔凈度

(1)玻璃器皿：採用乾熱滅菌方式進行滅菌。

(2)做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣專用，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再採用灼燒方式進行滅菌。

(3)接種針(環)採用灼燒方式進行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針(環)進行冷卻。

四、樣品的採集及檢測

(1)保證采樣器具的無菌性

1)玻璃器皿：採用乾熱滅菌方式進行滅菌，保證恆溫、時間足夠(但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢)。

2)取樣筐：使用前要用 75%酒精進行噴灑消毒

3)取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔後用 75%酒精進行擦拭消毒。

4)取樣袋：可現用酒精進行擦拭消毒，再在超凈台用紫外燈照射消毒，(包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒)。

5)電子稱表面用 75%酒精消毒。

(2)人員操作

1)保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。

2)取樣要具有代表性(隨機樣、目的樣、綜合樣)且要標示清楚。

3)取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈台，對其外表面進行紫外燈照射消毒。

4)在要求的做樣區域進行操作。

5)做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。

6)往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7)樣品計量要准確，稀釋倍數也要准確(1mL 吸管不允許將管口敲掉)，進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。

8)鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，將部分微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解完全。

9)進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。

10)傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿;傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中幹掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

11)做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈台對外表面進行紫外線滅菌。

12)接二步時，要注意先將接種針(環)進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況發生，導致無法判斷、確認。

13)做樣完畢，及時放入相應培養箱進行培養，並清理清潔超凈台。

五、 微生物的培養

(1)在培養過程中，要隨時監控培養箱溫度，保證其在適宜的溫度進行培養。

(2)要按照《微生物檢驗規范》要求及時觀察結果，出現異常，要及時分析原因進行反饋。

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