① 真核基因如何在原核生物中表達 具體步驟
利用PCR技術擴增,連接到帶原核啟動子的表達載體上,得到陽性克隆就可以用了
② 原核生物如何表達遺傳信息
真核生物和原核生物的細胞結構和遺傳信息存在明顯差異,在基因組結構上,原核生物結構簡單,信息量少;真核生物結構復雜,信息量大,在基因表達調控上,雖然二者可以在復制、擴增、基因激活、轉錄、轉錄後、翻譯和翻譯後等多級水平上進行,但轉錄水平調控是主要的,如何實施調控,真核基因表達調控的環節更多。
③ 原核生物基因在真核生物中直接表達么
原核生物的機體能在基因表達過程的任何階段進行調控,如調控可在轉錄階段、轉錄後加工階段和翻譯階段進行.轉錄的調控主要發生在起始階段,這樣可避免浪費能量合成不必要的轉錄產物.通常不在轉錄延伸階段進行調控,但可在終止階段進行調控,終止可以防止越過終止子而進行下一個基因的轉錄.RNA的初級轉錄產物本身是一個受調控的靶分子,轉錄物作為一個整體其有效性可以受到調控,例如,它的穩定性可以決定它是否保存下來用於翻譯.此外,初級轉錄產物轉變為成熟分子的加工能力可決定最後mRNA分子的組成和功能.在真核細胞中,還可對RNA從核到胞漿中的轉運進行調控.但是在細菌中,mRNA只要一合成,就可用於翻譯.翻譯也像轉錄一樣,在起始階段和終止階段進行調控.DNA轉錄的起始和RNA翻譯的起始路線也很相似.
真核生物基因表達的調控要比原核生物復雜得多,特別是高等生物,不僅由多細胞構成,而且具有組織和器官的分化.細胞中由核膜將核和細胞質分開,轉錄和翻譯並不是偶聯,而是分別在核和細胞質中進行的,基因組不再是環狀或線狀近於裸露DNA,而是由多條染色體組成,染色體本身結構是以核小體為單位形成的多極結構,真核生物的個體還存在著復雜的個體發育和分化,因此說真核生物的基因表達調控是多層次的,從DNA到RNA到有功能蛋白質多途徑進行調控的.主要的調控途徑有如下幾個方面:
①DNA和染色體水平上的調控:基因的拷貝數擴增或丟失和基因重排,DNA修飾,在染色體上的位置,染色體結構(包括染色質、異染色質、核小體)都可影響基因表達.
②轉錄水平上的調控:轉錄起始的控制和延伸的弱化對mRNA前體的水平都會產生影響.
③轉錄後RNA加工過程和運送中的調控:真核基因轉錄出的mRNA前體,要經過加工才能成熟為mRNA,包括切割、拼接、編輯、5`和3`末端修飾等,成熟的mRNA再運出細胞核.
④翻譯水平上的調控:5`端前導序列形成莖環結構降低翻譯水平或抑制蛋白結合5`端,阻止mRNA的翻譯.
⑤翻譯後的調控:翻譯後產生的蛋白質常常需要修飾和加工如磷酸化、糖基化、切除信號肽及構象形成等,才能成為有活性的蛋白質,可以利用這個過程有選擇地激活或滅活某些蛋白質.
⑥mRNA降解的調控:控制mRNA壽命就能控制一定數目的mRNA分子產生蛋白質數量,這種調控是由mRNA 3`端的序列決定的.
④ 如何使基因在原核生物中表達
1.獲取目的基因:最簡單的是直接從cDNA文庫找,不然就要自己用mRNA逆轉錄出cDNA,然後PCR,電泳檢測,回收。
2.酶切和連接:找一個質粒載體,根據載體的說明書選擇內切酶,一般是雙酶切。把載體和你的目的片段用一樣的酶切了,然後混合了連接。
3、轉化:找一種工程菌,把它弄成感受態,把你連接好了的重組質粒和菌混了,讓質粒鑽到菌裡面去。
4、檢驗(篩選培養):看看質粒進到菌裡面沒有,目的基因連接到了質粒上了沒有,一般是藍白斑+抗生素抗性+電泳。
5、誘導表達:加入誘導劑,等著菌表達
6、檢測,看看產物出來沒有,量多少、有沒有活性,etc。
完了,具體問題具體分析,思路以上。
⑤ 原核生物是如何進行基因表達的
1、Operon操縱子:一個或幾個結構基因與一個調節基因和一個操縱基因,加上啟動子構成一個操縱單元,這個單元稱為操縱子。在操縱子中,結構基因產生mRNA並作為模板合成蛋白質;而調節基因則產生一種阻遏蛋白與操縱基因相互作用;阻遏蛋白與操縱基因結合從而阻礙了結構基因轉錄成為mRNA;在誘導過程中,誘導物通過與阻遏蛋白相結合而阻止阻遏蛋白與操縱基因結合。 2. CAP:環腺苷酸(cAMP)受體蛋白CRP(cAMP receptor protein ),cAMP與CRP結合後所形成的復合物稱激活蛋白CAP(cAMP activated protein ) 3.Attenuator弱化子:在操縱區與結構基因之間的一段可以終止轉錄作用的核苷酸序列。 4. 魔斑:當細菌生長過程中,遇到氨基酸全面缺乏時,細菌將會產生一個應急反應,停止全部基因的表達。產生這一應急反應的信號是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸(pppGpp)。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個或幾個操縱子,而是影響一大批,所以稱他們是超級調控子或稱為魔斑。 5. 上游啟動子元件:是指對啟動子的活性起到一種調節作用的DNA序列,-10區的TATA、-35區的TGACA及增強子,弱化子等