1. DNA或RNA分子探針要用什麼標記
DNA探針的標記方法較成熟,有多種方法可供選擇,如缺口平移法、隨機引物法、PCR標記法等,能用於同位素和非同位素標記。
DNA探針技術又稱分子雜交技術,是利用DNA分子的變性、復性以及鹼基互補配對的高度精確性,對某一特異性DNA序列進行探查的新技術。DNA探針是利用同位素、生物素等標記的特定DNA片斷,該片斷可大至寄生蟲基因組DNA,小至20個鹼基。當DNA探針與待測的非標記單鏈DNA(或RNA)按鹼基順序互補結合時,以氫健將2條單鏈連接而形成標記DNA-DNA(或標記DNA-RNA)的雙鏈雜交分子。將未配對結合的核苷酸溶解後用檢測系統(放射自顯影或酶檢測等)檢測雜交反應結果。由於DNA分子鹼基互補的精確性,單連DNA探針僅與樣品中變性處理的DNA單鏈出現配對雜交,由此決定了探針的特異性;用放射性同位素(如32P)或生物素標記探針,使雜交試驗同時具有高度的敏感性