如何用生物素標記小分子

① 生物素標記肽的應用

生物素標記肽可用於蛋白純化、檢測、固化、葯物導向、蛋白質結構分析等。

檢測與某一多肽相互作用的物質，最簡單的方法就是利用此多肽做親和pull-down實驗，然後直接檢測結合蛋白。蛋白質體外結合(Pull-down)試驗可用於驗證蛋白-蛋白相互作用的存在（經由別的研究方法預測過的，如免疫共沉澱）和作為一種初級的篩選試驗來識別一些未知的蛋白-蛋白相互作用。通過競爭性阻斷結合，合成肽通常被用來驗證被假設的蛋白質-蛋白質相互作用。

② 生物素標記的DNA探針用什麼方法檢測

生物素標記的DNA探針用什麼方法檢測
以病原微生物DNA或RNA的特異性片段為模板,人工合成的帶有放射性或生物素標記的單鏈DNA片段,可用來快速檢測病原體.
怎麼檢測：
將一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或熒光染料等標記後製成的探針.可與固定在硝酸纖維素膜的DNA或RNA進行互補結合,經放射自顯影或其他檢測手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在.
以細菌為例,目前分子雜交技術用於細菌的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要准確的多,是細菌分類學的一個發展方向.加之分子雜交技術的高敏感性,分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景.細菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個基因.（各種細菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要採取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段後分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫.然後用多種其它菌種的DNA作探針來篩選,產生雜交信號的克隆被剔除,最後剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段.將此重組質粒標記後作探針進一步鑒定,亦可經DNA序列分析鑒定其基因來源和功能.）括弧里比較重要!

③ 為什麼免疫組化染色ABC法比SP法更靈敏

可以看下面這個示意圖：

如果沒有生物素，鏈霉親和素上帶有的HRP酶是有限的，因為兩個蛋白都有一定的空間結構，空間位阻可能會導致蛋白的某些生物學功能喪失，所以鏈霉親和素能夠偶聯上的HRP數量受限。但是如果用生物素標記HRP，再把生物素-HRP與鏈霉親和素一起孵育，這個時候是兩個蛋白被生物素這個小分子連接，一個鏈霉親和素可以和4個生物素結合，假設完全理想的狀態，二抗的生物素佔去一個位點，還有3個位點可以結合帶有生物素的HRP，也就是變成了一分子鏈霉親和素帶有3分子的HRP，酶量增加了，當然靈敏度也就相應的提高了。

④ 怎樣用生物素標記dna

先用限制性內切酶在DNA上切出兩個粘性末端，然後在DNA連接酶的配合下用與這個粘性末端相配的有標志性的（可以是放射性和熒光性等同位素一般屬於放射性）DNA片段標記出來，簡單地說就是這樣～

⑤ DNA或RNA分子探針要用什麼標記

DNA探針的標記方法較成熟，有多種方法可供選擇，如缺口平移法、隨機引物法、PCR標記法等，能用於同位素和非同位素標記。

DNA探針技術又稱分子雜交技術，是利用DNA分子的變性、復性以及鹼基互補配對的高度精確性，對某一特異性DNA序列進行探查的新技術。DNA探針是利用同位素、生物素等標記的特定DNA片斷，該片斷可大至寄生蟲基因組DNA，小至20個鹼基。當DNA探針與待測的非標記單鏈DNA（或RNA）按鹼基順序互補結合時，以氫健將2條單鏈連接而形成標記DNA-DNA（或標記DNA-RNA）的雙鏈雜交分子。將未配對結合的核苷酸溶解後用檢測系統（放射自顯影或酶檢測等）檢測雜交反應結果。由於DNA分子鹼基互補的精確性，單連DNA探針僅與樣品中變性處理的DNA單鏈出現配對雜交，由此決定了探針的特異性；用放射性同位素（如32P）或生物素標記探針，使雜交試驗同時具有高度的敏感性