如何對微生物進行培養

① 微生物的培養方法

1．平板劃線分離培養法

對混有多種細菌，採用劃線分離和培養，使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個菌落，以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法：

①分區劃線分離法：此法常用於含菌量較多的細菌的分離。先用接種環挑取標本塗布於瓊脂平板1區（占培養基總面積的¼）並作數條劃線，再於2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域，均將接種環燒灼滅菌1次，冷後再劃下一區域，每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板，培養後分別觀察1區形成菌苔，2區菌落連成線，3區和4區可分離到單個菌落。

②連續劃線分離法：此法常用於含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕塗抹，然後再用接種環或拭子在平板表面曲線連續劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表面。

2.瓊脂斜面接種法

主要用於菌落的移種，以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環（針）挑取單個菌落或培養物，從培養基斜面底部向上劃一條直線，然後再從底部沿直線向上曲折連續劃線，直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養基斜面接種，用接種針挑取待鑒定細菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部，抽出後在斜面上由下至上曲折劃線接種。

3．穿刺接種法

此法多用於半固體培養基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養基接種，半固體培養基的穿刺接種可用於觀察細菌的動力。接種時用接種針挑取菌落，由培養基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養基，穿刺高層部分，退出接種針後直接劃線接種斜面部分。

4．液體培養基接種法

用於各種液體培養基如肉湯、蛋白腖水、糖發酵管等的接種。用接種環挑取單個菌落，傾斜液體培養管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立後液體淹沒接種物為准）。此接種法應避免接種環與液體過多接觸，更不應在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實驗室污染。

5．傾注平板法

本法主要用於飲水、飲料、牛乳等標本中的細菌計數。取純培養物的稀釋或原標本1ml至無菌培養皿內，再將已融化並冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養基15~20ml傾注入該無菌培養皿內，混勻，待凝固後置37℃培養，長出菌落後進行菌落計數，以求出每毫升標本中所含菌數。先數6個方格（每格為1cm2）中菌落數，求出每格的平均菌落數，並算出平皿直徑，然後按下列公式計數，求出每毫升標本中的細菌數。

全平板菌落數=每方格的平均菌落數×лr2

每ml標本中的細菌數=全平板菌落數×稀釋倍數

6．塗布接種法

本法多用於紙片擴散法葯敏試驗的細菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養基表面，然後用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子於不同的角度反復塗布，使被接種液均勻分布於瓊脂表面，然後貼上葯敏紙片，或直接培養，本法經培養後細菌形成菌苔。

② 培養微生物的方法步驟介紹

微生物培養所培養的微生物通常是病菌、細菌、放線菌、真菌等，屬於生物培養的一種。

微生物培養步驟：

1.配置不同濃度的營養液稀釋液:取營養液1ml溶於9ml無菌水中,振盪 5min配成10%的溶液.

2.將容器口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰用吸管從此溶液中吸取1ml加入到裝有9ml無菌水的試管中.以此類推製成1%,0.1%,0.01%等不同濃度的稀釋液.

3.將試管口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰,左手拿試管,右手托培養皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰).將溶液倒入培養皿中,在各培養皿上標上濃度.

4.將有細菌生長的樣品容器口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰,用接種環挑取菌落上的少量菌體加入10%的營養液中.把接種環放在酒精燈上灼燒滅菌,再次取樣加入盛1%的營養液的培養皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰)中.重復這個操作,將各濃度的營養液接上種.

5.輕輕搖勻接上種的培養皿,置於恆溫箱內37攝氏度保存,3天後就有菌落出現.

微生物培養的基本條件：

1、影響微生物生長的因素

微生物的生長，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到外界許多因素的影響。影響微生物生長的因素很多，簡要介紹如下。

1） 營養物濃度

細菌的生長率與營養物的濃度有關:μ=μmax*C/(K+C) ，營養物濃度與生長率的關系曲線是典型的雙曲線。

K值是細菌生長的很基本的特性常數。它的數值很小，表明細菌所需要的營養濃度非常之低，所以在自然界中，它們到處生長。然而營養太低時，細菌生長就會遇到困難，甚至還會死亡。這是因為除了生長需要能量以外，細菌還需要能量來維持它的生存。這種能量稱為維持能。另一方面，隨著營養物濃度的增加，生長率愈接近最大值。

2）溫度

在一定的溫度范圍內，每種微生物都有自已的生長溫度三基點：最低生長溫度、最適生長溫度和最高生長溫度。在生長溫度三基點內，微生物都能生長，但生長速率不一樣。微生物只有處於最適生長溫度時，生長速度才最快，代時最短。超過最低生長溫度，微生物不會生長，溫度太低，甚至會死亡。超過最高生長溫度，微生物也要停止生長，溫度過高。也會死亡。一般情況下，每種微生物的生長溫度三基點是恆定的。但也常受其它環境條件的影響而發生變化。

根據微生物最適生長溫度的不同，可將它們分為三個類型：

a.嗜冷微生物：其是適生長溫度多數在-10℃－20℃之間

b.中溫微生物：其最適生長溫度一般在20℃－45℃之間

c.嗜熱微生物：生長溫度在45℃以上。

3）水分

水分是微生物進行生長的必要條件。芽孢、孢子萌發，首先需要水分。微生物是不能脫離水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生長，而不能生活在純水中。各種微生物在不能生長發育的水分活性范圍內，均具有狹小的適當的水分活性區域。

4）氧氣

按照微生物對氧氣的需要情況，可將它們分為以下五個類型。

a.需氧微生物：這類微生物需要氧氣供呼吸之用。沒有氧氣，便不能生長，但是高濃度的氧氣對需氧微生物也是有毒的。很多需氧微生物不能在氧氣濃度大於大氣中氧氣濃度的條件下生長。絕大多數微生物都屬於這個類型。

③ 微生物的培養

微生物培養（microculture)是生物培養的中的一種。所培養的微生物主要有病毒、細菌、放線菌、真菌等。
微生物培養需要用到培養基，根據微生物的不同種類和生活習性來配製特定的培養基。微生物培養成功的關鍵在於無菌操作，如果培養器具和培養基不能徹底滅菌、培養的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。
病毒的培養 病毒是營寄生生存的生物，靠寄生在活細胞內才能繁殖，在培養的時候一般把它接種到活雞胚內。

1、配製培養基配好之滅菌過程配好培養基般錐形瓶錐形瓶進行滅菌滅完之也先放錐形瓶等待分裝滅完菌之放入無菌室或通風廚待用
2、培養皿滅菌（空）培養皿滅菌沒有培養基情況下進行存所說種放置問題般用專門滅培養皿金屬筒或者用牛皮紙、報紙打包滅菌
3、滅完菌之培養皿放入無菌室或通風廚待用（打開滅菌前包裝從滅菌設備拿出直接進無菌室或通風廚）降至室溫才使用
4、分裝般培養基溫度降至50-60攝氏度時候開始分裝若提前准備好已經凝固錐形瓶用前先水浴加熱熔化液態情況下向培養皿分裝
5、待培養皿培養基凝固（快分裝完基本上凝固差多了）此時才培養皿倒置防止皿蓋上冷凝水污染培養基（此時皿蓋下培養基蒸發出水蒸氣向上走還凝結於培養基上會有皿蓋上形成水滴再滴落情況了此防止污染）
6、接種培養接種也倒置培養（原因同 5 所說）

倒置還防止培養基水分蒸過快發培養基變干無機鹽析出營養成分濃度變大能使用利於微生物生長過分裝培養皿應盡快使用放長了還容易感染雜菌

④ 微生物的實驗室培養（高中生物）

1、培養基為微生物提供生長、發育、繁殖所需的碳源、氮源等。微生物才能正常生存、繁殖，為科學實驗所用。保存是有一定的條件的，避免微生物發生變異，這時不利於研究了，所以要有特定的方法。保存的方法有：1、石蠟油低溫保藏；2、甘油冷凍保藏（常用）；3、真空冷凍乾燥；4、液氮超低溫保藏等方法。都是為了更好的保存和保持菌種。
2、原因有兩個：1、獲取單一種類的目的微生物；2、能夠看到由一個微生物繁殖形成的菌落。因為最後一步是要看到肉眼可見的菌落，不同的微生物生活在不同的場所，條件不同，數量也不相同，為了能夠分散開來，形成由一個微生物繁殖形成的菌落，看哪一個梯度最適宜。科學家已經做也了個大概，就必須要進行梯度稀釋。這也就是不能一步到位的原因，要進行實驗，，不同的微生物就要不同的梯度，我們才最容易看到由一個微生物繁殖形成的菌落。這樣就必須把每個稀釋度的都要塗到培養基上。
3、甘油保存菌種的條件是需要凍存。主要靠低溫來降低微生物活性，達到保存的目的。加甘油是為了避免水結冰產生冰晶損傷細胞。
它的適用范圍廣，操作簡便、效果好。最重要的是無變異現象發生。

⑤ 微生物培養需要什麼條件

微生物的實驗室培養：
營養構成：
各種培養基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。
無菌技術：
(1)關鍵：防止外來雜菌的入侵。
(2)具體操作
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。
②將用於微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌。
③為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。
④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。
(3)消毒和滅菌
制備牛肉膏蛋白腖固體培養基的方法：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。
接種方法：
平板劃線法和稀釋塗布法。
（1）平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。
②劃A區：將平板倒置於煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底並盡量使平板垂直於桌面，有培養基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環先在A區劃3—4條連續的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區後應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響後面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底並將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內)，以防止雜菌的污染。
③劃其他區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉到上方，接種環通過A區（菌源區）將菌帶到B區，隨即劃數條緻密的平行線。再從B區作C區的劃線。最後經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。
④等平板凝固後，將平板倒置。
（2）稀釋塗布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。能夠測定樣品中活菌數的方法是：稀釋塗布平板法。

⑥ 微生物如何培養

原理:1.單個微生物過小,一般採取菌落培養法進行培養觀察.
2.由於不同的微生物生長環境不同,種群間有明顯界限.一個菌落可認為是同一菌種的集合.

儀器:接種鏟和接種針(用於陸生菌種) 接種環(用於水生菌種) 酒精燈 培養皿

步驟:1.配置不同濃度的營養液稀釋液:取營養液1ml溶於9ml無菌水中,振盪 5min配成10%的溶液.
2.將容器口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰用吸管從此溶液中吸取1ml加入到裝有9ml無菌水的試管中.以此類推製成1%,0.1%,0.01%等不同濃度的稀釋液.
3.將試管口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰,左手拿試管,右手托培養皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰).將溶液倒入培養皿中,在各培養皿上標上濃度.
4.將有細菌生長的樣品容器口靠近(注意不是對著)酒精燈燈焰,用接種環挑取菌落上的少量菌體加入10%的營養液中.把接種環放在酒精燈上灼燒滅菌,再次取樣加入盛1%的營養液的培養皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰)中.重復這個操作,將各濃度的營養液接上種.
5.輕輕搖勻接上種的培養皿,置於恆溫箱內37攝氏度保存,2~3天後就有菌落出現.

⑦ 微生物培養需要什麼條件為什麼

微生物的生長和繁殖需要條件有：

1、適宜的營養條件(充足的碳源、氮源)。

2、適宜的氧含量(好氧的要震盪培養，厭氧的要厭氧培養，兼性的可以靜止培養)。

3、合適的pH值(一般指培養基的pH值)。

4、合適的環境溫度(細菌37度，真菌28度)。

5、合適的接種量(一般接種量是1%)。

6、只用專業的中海生物微生物培養基

(7)如何對微生物進行培養擴展閱讀：

微生物的主要特徵

1、體小面大

一個體積恆定的物體，被切割的越小，其相對表面積越大。微生物體積很小，如一個典型的球菌，其體積約1mm，可是其表面積卻很大。這個特徵也是賦予微生物其他如代謝快等特性的基礎。

2、吸多轉快

微生物通常具有極其高效的生物化學轉化能力。據研究，乳糖菌在1個小時之內能夠分解其自身重量1000-10000倍的乳糖，產朊假絲酵母菌的蛋白合成能力是大豆蛋白合成能力的100倍。

3、生長繁殖快

相比於大型動物，微生物具有極高的生長繁殖速度。大腸桿菌能夠在12.5-20分鍾內繁殖1次。不妨計算一下，1個大腸桿菌假設20分鍾分裂1次，1小時3次，1晝夜24小時分裂24×3=72次，大概可產生4722366500萬億個（2的72次方），這是非常巨大的數字。

但事實上，由於各種條件的限制，如營養缺失、競爭加劇、生存環境惡化等原因，微生物無法完全達到這種指數級增長。 已知大多數微生物生長的最佳pH范圍為7.0 (6.6~7.5)附近，部分則低於4.0。

微生物的這一特性使其在工業上有廣泛的應用，如發酵、單細胞蛋白等。微生物是人類不可或缺的好朋友。