即用型微生物平板怎麼使用方法

① 生物中接種方法→平板劃線法要注意什麼

（1）要注意全程無菌操作；

（2）滑動時用力要均勻，切勿將接種環嵌入培養基內；

（3）平板應較硬、較厚、表面乾燥；

（4）需要分區的時候，劃完一個區後必須燒去接種環上的殘菌，待冷卻後再劃另一個區；

（5）劃線的線條宜平行、密集、整齊。

接種是食用菌生產中的關鍵環節之一，如果接種技術不過關，即會造成雜菌污染，成活率低而前功盡棄。無論是菌種分離、傳代還是擴繁，都要在無菌條件下嚴格按照無菌操作規程進行。

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常用的接種方法

1、三點接種

在研究黴菌形態時常用此法。此法是把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落後，來觀察、研究它們的形態。除三點外，也有一點或多點進行接種的。

2、穿刺接種

在保藏厭氧菌種或研究微生物的動力時常採用此法。做穿刺接種時，用的接種工具是接種針，用的培養基一般是半固體培養基。用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠生長。

3、澆混接種

將待接的微生物和45℃左右的固體培養基進行混合，這樣菌液就達到稀釋的目的，待平板凝固之後，置合適溫度下培養，就可長出單個的微生物菌落。

4、塗布接種

將菌液倒入凝固的平板上面，用塗布棒在表面作來回左右的塗布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落

5、注射接種

用注射的方法將待接的微生物轉接至活的生物體內，如人或其它動物中，常見的疫苗預防接種，就是用注射接種，接入人體，來預防某些疾病。

6、活體接種

活體接種是專門用於培養病毒或其它病原微生物的一種方法，因為病毒必須接種於活的生物體內才能生長繁殖。所用的活體可以是整個動物；也可以是某個離體活組織，例如猴腎等；也可以是發育的雞胚。接種的方式是注射，也可以是拌料喂養。

② 微生物研究中的傳統平板法是什麼方法具體怎麼做的

傳統的平板法為：稀釋混合倒平板法

平板是指經熔化的固體培養基倒入無菌培養皿中,
冷卻凝固而成的盛有固體培養基的平皿。該法是先將待分離的含菌樣品,
用無菌生理鹽水作一系列的稀釋(常用十倍稀釋法,
稀釋倍數要適當),
然後分別取不同稀釋液少許
(0.5-1.0ml)於無菌培養皿中,
傾入已熔化並冷卻至50℃左右的瓊脂培養基,
迅速旋搖,
充分混勻。待瓊脂凝固後,
即成為可能含菌的瓊脂平板。

於恆溫箱中倒置培養一定時間後,
在瓊脂平板表面或培養基中即可出現分散的單個菌落。

③ 跪求 土壤微生物的測定：塗布平板法 測定細菌、真菌和放線菌的實驗步驟（詳細）

塗布平板法實驗器材 牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基配製 牛肉膏 0.3g
蛋白腖 1g
氯化鈉 0.5g
瓊脂 2g
自來水 100mL
pH 7.0～7.2 滅菌 1.05kg/cm2，22min
配製具體步驟
1．稱量
按培養基配方比例依次准確地稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化後倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量後直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然後立即取出紙片。蛋白腖很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱葯品時嚴防葯品混雜，一把牛角匙用於一種葯品，或稱取一種葯品後，洗凈、擦乾，再稱取另一葯品，瓶蓋也不要蓋錯。
2．溶化
在上述燒杯中可先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。待葯品完全溶解後，補充水分到所需的總體積。如果配製固體培養基，將稱好的瓊脂放入已溶化的葯品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最後補足所失的水分。
3．調pH
在未調pH前，先用精密pH試紙測量培養基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，並隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達7．6。反之，則用1mol/L HCl進行調節。注意pH值不要調過頭，以避免回調，否則，將會影響培養基內各離子的濃度。
對於有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調節可用酸度計進行（使用方法，可參考有關說明書）。
4．過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利結果的觀察。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實驗無需過濾）。很多都是不需要過濾的。
5．分裝
按實驗要求，可將配製的培養基分裝入試管內或三角燒瓶內。分裝裝置見圖Ⅴ-1。
分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌後製成斜面，如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌後垂直待凝。
6．加塞
培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養基內而造成污染，並保證有良好的通氣性能（棉塞製作方法附本實驗後面）。
7．包紮
加塞後，將全部試管用麻繩捆紮好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩紮好。用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞後，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式紮好，使用時容易解開，同樣用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。
8．滅菌
將上述培養基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分鍾高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，則應放入冰箱內暫存。
9．擱置斜面
將滅菌的試管培養基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
10．無菌檢查
將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。

1．活材料：蘇雲金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis）菌劑。
2．培養基：牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基（附錄三、1）
3．器材：90ml無菌水、9ml無菌水、無菌平皿、lml無菌吸管、天平、稱樣瓶、記號筆、玻璃刮鏟等。
四、實驗方法
1．樣品稀釋液的制備 准確稱取待測樣品l0g，放入裝有90ml無菌水並放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振盪20min，使微生物細胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液；再用1ml無菌吸管，吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液；以此類推，連續稀釋，製成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液（圖22-1）。
圖22-1 平板計數法中樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養
用稀釋平板計數時，待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時，稀釋度應高，反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數時，採用10-7、10-8、10-9稀釋度，測定土壤細菌數量時，採用10-4、10-5、10-6稀釋度，測定放線菌數量時，採用l0-3、10-4、10-5稀釋度，測定真菌數量時，採用10-2、10-3、10-4稀釋度。
2．平板接種培養 平板接種培養有混合平板培養法和塗抹平板培養法兩種方法。
（1）混合平板培養法 將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼，每一號碼設置三個重復，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。然後在9個平板中分別倒入已融化並冷卻至45—50℃的細菌培養基(圖22-2)，輕輕轉動平板，使菌液與培養基混合均勻，冷疑後倒置，適溫培養。至長出菌落後即可計數。
（2）塗抹平板計數法 塗抹平板計數法與混合法基本相同，所不同的是先將培養基熔化後趁熱倒入無菌平板中，待凝固後編號，然後用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上（每個編號設三個重復）。再用無菌刮鏟將菌液在平板上塗抹均勻（圖22-3），每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度塗抹時，也可以不更換刮鏟。將塗抹好的平板平放於桌上20—30min，使菌液滲透入培養基內，然後將平板倒轉，保溫培養，至長出菌落後即可計數。

④ 簡述如何利用澆注平板法和塗布平板法分離微生物，這兩種方法的適用范圍分別是什麼

兩種辦法都是先要做好固體培養基的配製，之後滅菌後備用。
1、先將樣品按10稀釋法進行系列稀釋，用的是無菌水即可。根據樣品中微生物數目的多少確定用哪三個連續稀釋度，一般先10的負6次方到10的負8次方。
2、塗布法，將滅菌的培養基冷卻到攝氏50度左右時，倒入無菌的空平板，冷卻凝固後備用；將稀釋的樣品取1毫升放於凝固的固體培養基表面，之後用無菌的玻璃塗棒分布均勻。
3、澆平板法：將1毫升稀釋的樣品放於空白的無菌培養皿，之後將冷卻到45-50度之間的培養基倒入，輕搖混勻、凝固。
4、待完全凝固後倒置培養，即可獲得單一菌落。

適用范圍：
澆平板法適用於兼性微生物的培養，塗布法適用於好氧微生物的培養。最好是單細胞微生物，或有孢子或芽孢。