微生物檢測奶粉怎麼處理方法

1. 烘焙食品微生物超標如何解決

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2. 微生物檢驗樣品採集步驟

微生物檢驗樣品採集步驟

樣品的採集是微生物檢驗的重要組成部分，用於檢驗的樣品數量和狀況具有重要意義。這對取樣人員和制樣人員提出了很高的專業要求，既要保證樣品的代表性和一致性，又要保證整個微生物檢驗過程在無菌操作的條件下進行。微生物檢驗樣品的採集大致分為取樣、包裝密封、標識、樣品的運輸、接收、保存幾個環節。下面是我為大家帶來的微生物檢驗樣品的採集步驟的知識，歡迎閱讀。

樣品的取樣

取樣是指在一定質量或數量的產品中，取一個或多個代表性樣品，用於感官、微生物和理化檢驗的全過程。

首先在取樣之前應確認貨、證是否相符。其次取樣工具要達到無菌的要求，對取樣具和一些試劑材料應提前准備、滅菌。如果使用不合適的採集工具，可能會破壞樣品的完整性，甚至使樣品採集毫無意義。

應根據不同的樣品特徵和取樣環境，對取樣物品和試劑進行事先准備和滅菌等操作。另外要保證樣品能夠代表整批產品，其檢測結果應具有統計學有效性，樣品到達實驗室時的狀況應能反映出取樣時產品的真實情況。

取樣時應根據不同的產品類型、產品狀態等選擇不同的取樣方法和標准。

① 包裝食品：對於直接食用的小包裝食品，盡可能取原包裝，直到檢驗前不要開封，以防污染。對於桶裝或大容器包裝的液體食品，取樣前應搖動或用滅菌棒攪拌液體，盡量使其達到均質;取樣時應先將取樣用具浸入液體內略加漂洗，然後再取所需量的樣品，裝入滅菌容器的量不應超過其容量的3/4，以便於檢驗前將樣品搖勻;取完樣品後，應用消毒的溫度計插入液體內測量食品的溫度，並作記錄。盡可能不用水銀溫度計測量，以防溫度計破碎後水銀污染食品;如為非冷藏易腐食品，應迅速將所取樣品冷卻至0～4℃。對於大塊的桶裝或大容器包裝的冷凍食品，應從幾個不同部位用滅菌工具取樣，使樣品具有充分的代表性;在將樣品送達實驗室前，要始終保持樣品處於冷凍狀態樣品一旦融化，不可使其再凍，保持冷卻即可。

②並梁 生產過程中的取樣：劃分檢驗批次，應注意同批產品質量的均一性;如用固定在貯液桶或流水作業線上的取樣龍頭取樣時，應事先將龍頭消毒;當用自動取樣器取不需要冷卻的粉狀或固體食品時，必須履行相應的管理辦法，保證產品的代表性不被人為地破壞。

③ 液體產品：通常情況下，則蔽旁液態產品較容易獲得代表性樣品。液態產品一般盛放在大罐中，取樣時，可連續或間歇攪拌，對於較小的容器，可在取樣前將液體上下顛倒，使其完全混勻。較大的樣品(100～500ml)要放在已滅菌的容器中送往實驗室，實驗室在取樣檢測之前應將液體再徹底混勻一次。

④ 固體樣品：固態樣品常用的取樣工具有滅菌的解剖刀、勺子、軟木鑽、鋸子和鉗子等。麵粉或奶粉等易於混勻的食品，其成品質量均勻、穩定，可以抽取小樣品檢測(如100 g)。但散裝樣品就必須從多個點取樣，且每個樣品都要單獨處理，在檢測前徹底混勻，並從中取一份樣品進行檢測。肉類、魚類的食品既要在表皮取樣叉要在深層取樣。深層取樣時要小心不要被表面污染。有些食品，如鮮肉或熟肉可用滅菌的解剖刀或鉗子取樣;冷凍食品可在未解凍的狀態下可用鋸子、木鑽或電鑽(一般斜角鑽人)等獲取深層取樣樣品;全蛋粉等粉末狀樣品取樣時，可用滅菌的取樣器斜角插入箱底，樣品填滿取樣器後提出箱外，再用滅菌小勺從上、中、下部位取樣。

⑤ 表面取樣：通過惰性載體可以將表面樣品上的微生物轉移到合適的培養基中進行微生物檢驗，這種惰性載體既不能引起微生物死亡，也不應使其增殖。這樣的載體包括清水、拭子、膠帶等。取樣後，要使微生物長期保存在載體上，既不死亡又不增殖十分困難，所以應盡早地將微生物轉接到適當的培養基中。轉移前耽誤的時間越長，品質評價的可靠性就越差。表面取樣技術只能直接轉移菌體，不能做系列稀釋，只有在菌體數量較多時才適用。其最大優點是檢測時不破壞樣品。

⑥ 空氣樣品的採取：空氣的取樣方法有直接沉孫橡降法和過濾法。在檢驗空氣中細菌含量的各種沉降法中，平皿法是最早的方法之一，到目前為止，這種方法在判斷空氣中浮游微生物分次自沉現象方面仍具有一定的意義。過濾法是使定量的空氣通過吸收劑，然後將吸收劑培養，計算出菌落數。

樣品的包裝密封

為保證樣品的完整性，裝有樣品的包裝物應進行封口，以證實其可靠性，即從取樣地點至實驗室這段時間不發生任何變化。可採用自粘膠、特製的紙黏著劑或者石蠟等封口，封口處應留有填寫日期、檢驗人員和貨主簽字的地方，然後蓋上專用的印章。

樣品的標識

取樣過程中應對所取樣品進行及時、准確的標記。取樣結束後，應由取樣人寫出完整的取樣報告。樣品應盡可能在原有狀態下迅速運送或發送到實驗室。

保存的樣品應進行必要的清晰的標記，內容包括：樣品名稱，樣品描述，樣品批號，企業名稱，地址，取樣人，取樣時間，取樣地點，取樣溫度(必要時)，測試目的等。標記應牢固並具防水性，確保字跡不會被擦掉或脫色。所有盛樣容器必須有和樣品一致的標記。在標記上應記明產品標志與號碼和樣品順序號以及其他需要說明的`情況。標記應牢固並具防水性，確保字跡不會被擦掉或脫色。當樣品需要托運或由非專職取樣人員運送時，必須封死樣品容器。

樣品的運輸

取樣結束後應盡快將樣品送往實驗室檢驗。如不能及時運送，冷凍樣品應存放在-15℃以下的冰箱或冷庫內;冷藏和易腐食品存放在0～4℃ 冰箱或冷藏庫內;其他食品可放在常溫暗處。微生物檢驗樣品應在取樣後6 h以內送達實驗室進行檢驗。

樣品的運輸過程必須有適當的保護措施(如密封、冷藏等)，以保證樣品的微生物指標不發生變化。運送冷凍和易腐樣品應在包裝容器內加適量的冷卻劑或冷凍劑，但樣品不可與冷卻劑或冷凍劑直接接觸，保證途中樣品不升溫或不融化，必要時可於途中補加冷卻劑或冷凍劑。運送水樣時應避免玻璃瓶搖動，水樣溢出後又迴流瓶內，從而增加污染。如不能由專人攜帶送樣時，也可托運。托運前必須將樣品包裝好，應能防破損，防凍結或防易腐和冷凍樣品升溫或融化。在包裝上應註明“防碎”、“易腐”、“冷藏”等字樣。同時做好樣品運送記錄，寫明運送條件、日期、到達地點及其他需要說明的情況，並由運送人簽字。

樣品的接收

在接收樣品時，實驗室應與送樣人共同相互確認樣品與委託單上的內容是否一致。確認內容一般包括：品名;檢驗目的;檢驗項目;形狀和包裝狀況(同體、粉狀、冷凍、冷藏、零售、批發、無菌包裝等都不同);抽樣數量(個數和質量);抽樣日期及送達日期;抽樣地點;隨貨樣附帶的許可申請單編號;生產國或者生產廠家名稱(進口商品);抽樣者的單位、姓名及有無封印;其他搬運、儲存、檢驗時的注意事項。

樣品的保存

實驗室接到樣品後應在36 h內進行檢測(貝類樣品通常要在6 h內檢測)，對不能立即進行檢測的樣品，要採取適當的方式保存，使樣品在檢測之前維持取樣時的狀態，即樣品的檢測結果能夠代表整個產品。實驗室應有足夠和適當的樣品保存設施(如冰箱或冰櫃等)。保存的樣品應進行必要和清晰的標記，內容包括：樣品名稱，樣品描述，樣品批號，企業名稱、地址，取樣人，取樣時間，取樣地點，取樣溫度(必要時)，測試目的等;樣品在保存過程中應保持密封性，防止引起樣品pH值的變化。

不同類型的樣品，保存方法不同：

① 易腐樣品：要用保溫箱或採取必要的措施使樣品處於低溫狀態(0～4℃)，應在取樣後盡快送至實驗室，並保證樣品送至實驗室時不變質。易腐的非冷凍食品檢測前不應冷凍保存(除非不能及時檢測)。如需要短時間保存，應在0～4℃ 冷藏保存，但應盡快檢驗(一般不應超過36h)，因為保存時間過長會造成樣品中嗜冷細菌的生長和嗜中溫細菌的死亡。

② 冷凍樣品：要用保溫箱或採取必要的措施使樣品處於冷凍狀態，送至實驗室前樣品不能融解、變質。冰凍樣品要密閉後置於冷凍冰箱(通常為-l8℃)，檢測前要始終保持冷凍狀態，防止樣品暴露在二氧化碳氣體中。

③ 其他樣品：應用塑料袋或類似的材料密封保存，注意不能使其吸潮或水分散失，並要保證從取樣到實驗室進行檢驗的過程中其品質不變。必要時可使用冷藏設備。

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3. 微生物檢測手段及注意事項

1. 微生物計量法

1.1 體積測量法

又稱測菌絲濃度法，通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養液(如10 mL)放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間(如5 min)和轉速(如5000 rpm)，離心後，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物，結果會有一定偏差。

1.2稱 乾重法

可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10~20%。在離心法中，將一定體積待測培養液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，並用清水離心洗滌1~5次，進行乾燥。乾燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘乾，或採用紅外線烘乾，也可在80 ℃或40 ℃下真空乾燥，乾燥後稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾後用少量水洗滌，在40 ℃下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常採用這種方法，如活性乾酵母(Activity Dry Yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。

1.3 比濁法

微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時，可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中，即可隨時測定其生長情況，而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計，在波長600 nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600，以此監控E.coli的生長及誘導時間。

1.4 菌絲長度測量法

對於絲狀真菌和一些放線菌，可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養基，卧放，在開口的一端接種微生物，一段時間後記錄其菌絲生長長度，藉此衡量絲狀微生物的生長。

2. 微生物計數法

2.1 血球計數板法

血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中央有一短橫溝和兩個平台，兩嵴的表比兩平台的表面高0.1 mm，每個平台上刻有不同規格的格網，中央0.1 mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察，統計一定大格內微生物的數量，即可算出1 mL菌液中所含的菌體數。這種方法簡便，直觀，快捷，但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。

2.2 染色計數法

為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色，可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液，染色後在顯微鏡下觀察，活細胞為無色，而死細胞為藍色。

2.3 比例計數法

將已知顆粒(如黴菌孢子或紅細胞)濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。

2.4 液體稀釋法

對未知菌樣做連續十倍系列稀釋，根據估計數，從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5 mL試樣，接種1 mL到3組共15隻裝培養液的試管中，經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然後查最大或然數表MPN(Most Probable Number)得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。

2.5 平板菌落計數法

這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋，取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合，或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後，用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度，即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9 cm的平板上出現50~500個菌落為宜。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的'細菌進行了一次分離培養，獲得了單克隆。

2.6 試劑紙

在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基，其中加入活性指示劑2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC，無色)待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。

2.7 膜過濾法

用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。

3. 間接測定法

微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化，例如酸鹼度，發酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。因此可利用生理指標等間接參數來測定生物量。

3.1 測定含氮量

大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%，酵母為7.5%，黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱後產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。

3.2 測定含碳量

將少量(乾重0.2~2.0 mg)生物材料混入1 mL水或無機緩沖液中，用2 mL 2%的K2Cr2O7溶液在100 ℃下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5 mL，在580 nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標准樣品做標准曲線。

3.3還原糖測定法

還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於大規模工業發酵生產上微生物生長的常規監測。方法是，離心發酵液，取上清液，加入斐林試劑，沸水浴煮沸3分鍾，取出加少許鹽酸酸化，加入Na2S2O3臨近終點時加入澱粉溶液，繼續加Na2S2O3至終點，查表讀出還原糖的含量。

3.4 氨基氮的測定

離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02 mol/L的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02 mol/L的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。

3.5 其他生理物質的測定

P，DNA，RNA，ATP，NAM(乙醯胞壁酸)等含量以及產酸，產氣，產CO2(用標記葡萄糖做基質)，耗氧，黏度，產熱等指標，都可用於生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，最終產氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長。如在BMP-2的發酵生產上，隨時監測溶氧量的變化和酸鹼度的變化，判斷細菌的長勢。

4. 商業化快速微生物檢測法

微生物的檢測，其發展方向是快速，准確，簡便，自動化，當前很多生物製品公司利用傳統微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀器設備，正逐步廣泛應用於醫學微生物檢測和科學研究領域。例如：

4.1 試劑盒，培養基等手段

抗干擾培養基和微生物數量快速檢測技術結合解決了傳統微生物檢測手段不能解決的難題，為建立一套完整的抗干擾微生物檢測系統奠定了堅實的基礎。如：抗干擾微生物培養基，新型生化鑒定管，微生物計數卡，環境質量檢測試劑盒等，可方便的用於多項檢測。

4.2 藉助新型先進儀器

BACTOMETER全自動各類總菌數及快速細菌檢測系統可以數小時內獲得監測結果，樣本顏色及光學特徵都不影響讀數，對酵母和黴菌檢測同樣高度敏感原理是利用電阻抗法(Impedance Technology)將待測樣本與培養基置於反應試劑盒內，底部有一對不銹鋼電極，測定因微生物生長而產生阻抗改變。如微生物生長時可將培養基中的大分子營養物經代謝轉變為活躍小分子，電阻抗法可測試這種微弱變化，從而比傳統平板法更快速監測微生物的存在及數量。測定項目包括總生菌數，酵母菌，大腸桿菌群，黴菌，乳酸菌，嗜熱菌，革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌等。

微生物OD值是反映菌體生長狀態的一個指標，OD是Optical Density(光密度)的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度。通常400～700 nm 都是微生物測定的范圍，需要紫外分光光度計測最大吸收波長。用得最多的是：505 nm測菌絲菌體、560 nm測酵母、600 nm測細菌。用測OD方法畫微生物生長曲線時，同一株菌的起始培養濃度可以准備多管(根據檢測點的需要，如需檢測10個點，就准備10管)，然後每個點取一管出來測OD值就行了。

一般測菌體密度的OD的波長范圍是580 nm-660 nm，如枯草芽孢桿菌用600 nm，已經屬於可見光區(200 nm～400 nm為紫外光區，400 nm～800 nm為可見光區)。空白如用水做，需要離心洗滌菌體;空白如用不接種的培養基做就不需要洗滌，但是不接種的培養基要和接種的同時培養以求條件一致，最後注意一般OD值在控制在0.1~0.4最好，在這個區內的值就可靠，如果OD大於1.0，一般要稀釋後再測，因為OD太大，分光光度計的靈敏度就會顯著降低。

一般都測吸光值，而且最好是整個實驗過程中，保持發酵液或菌體的稀釋倍數一致，吸光值與稀釋倍數不一定成正比，可保證整個實驗點有可比性。且取值的時候要連續讀數，重復3次的數最好。

另，用分光光度計測微生物的OD值為什麼要把波長設為600 nm

這個波長其實只是針對濁度，而分光光度計在600 nm處對濁度的反應比較靈敏。測吸收峰的實際意義並不大，比如LB搖瓶培養過夜的大腸桿菌，其實在400多納米處的吸收最大，但那很可能是培養液的吸收峰。

4. 檢測奶粉的含量，要用哪種化學試劑

國際上普遍用凱氏定氮法檢驗奶粉中的蛋白質含量（雙縮脲只能定性分析，不能定量檢測）凱氏定氮法的一般步驟和反應(1)樣品的制備 固體食品應粉碎過20目篩網，待測樣品必須質地均勻，一般無其他特殊的制備要求。 (2)消化 樣品精確稱量後放入凱氏燒瓶，加入酸和催化劑，使樣品中的有機物消化至透明澄清，其中氮和硫酸反應生成了不揮發的硫酸銨。 在消化期間，蛋白質中的氮被釋放出來形成銨離子，硫酸氧化有機物並和銨離子結合，碳元素和氧元素被轉化成二氧化碳和水。 (3)中和、蒸餾 消化液用水稀釋，再加入含鹼的硫代硫酸鈉中和硫酸，形成的氨被蒸餾至含有次甲基藍和甲基紅混合指示劑的硼酸溶液中。 凱氏定氮法的歷史背景(1)初始方法 1883年，Johann Kjeldahl建立了現代凱氏定氮法的基本方法分析有機氮。 ①消化：採用硫酸再加入粉狀高錳酸鉀使樣品中的氮完全氧化成硫酸銨形式； ②中和：稀釋後的消化液經中和後，將氨蒸餾至已知體積的含有碘液和碘酸鉀標准酸中； ③滴定：用標准硫代硫酸鹽溶液滴定釋放出的碘。 (2)改進的方法 對初始凱氏定氮方法幾個重要的改進： ①汞、銅和硒等金屬催化劑加入到硫酸中使樣品消化更完全，其中汞的效果最好； ②硫酸鉀用於提高消化時硫酸的沸點，以加快消化速度； ③硫化物或硫代硫酸鈉加到稀釋的消化液中，使得易於結合氨基的汞釋放氮； ④氨直接蒸餾到硼酸溶液，然後用標准酸滴定；

5. 生鮮奶如何消毒和滅菌處理

生鮮奶採用巴氏滅菌法（亦稱低溫消毒法）來進行消毒和滅菌。

國際上通用的巴氏消毒法主要有兩種：

1、一種是將牛奶加熱到62-65℃，保持30分鍾。這種方法目前在廣東較少使用。採用這一方法，可殺死牛奶中各種生長型致病菌，滅菌效率可達97.3%-99.9%，經消毒後殘留的只是部分嗜熱菌及耐熱性菌以及芽孢等，但這些細菌佔多數的是乳酸菌，乳酸菌不但對人無害反而有益健康。

2、第二種方法將牛奶加熱到75-90℃，保溫15-16秒，其殺菌時間更短，工作效率更高。但殺菌的基本原則是，能將病原菌殺死即可，溫度太高反而會有較多的營養損失。

(5)微生物檢測奶粉怎麼處理方法擴展閱讀：

「生鮮奶」使用注意事項：

由於未經過均質工藝處理，「生鮮奶」的乳脂肪球較大，煮沸後會發生聚集上浮，從而帶來「粘稠」、「風味濃郁」的感官印象。不過，研究表明「生鮮奶」與經過巴氏殺菌的純奶其實在營養及人體健康功能方面並沒有顯著性差異。

但「生鮮奶」由於滅菌不徹底等存在安全隱患，消費者不宜直接飲用。而且產奶的奶牛是否健康、有沒有檢疫、運輸過程中有沒有被污染等信息尚難以做到完全追溯，存在一定的食品安全隱患。

尤其是兒童、老人、孕婦和免疫力低下的人群，食用「生鮮奶」後被病原菌感染的風險更大。因此，建議消費者不要直接飲用「生鮮奶」。